暨南大学药学院基因组药物研究所 作品数:65 被引量:136 H指数:6 相关作者: 杨清玲 闫莉 沈良华 郭钦丽 孟祥平 更多>> 相关机构: 广州医学院公共卫生学院 广州医学院公共卫生学院化学致癌研究所 中山大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 广东省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 轻工技术与工程 更多>>
重组病毒巨噬细胞炎性蛋白致畸胎研究及骨髓微核实验 被引量:4 2005年 目的:研究重组病毒巨噬细胞炎性蛋白(rvMIP)的致畸胎和致细胞染色体损伤作用。方法:采用大鼠致畸胎、小鼠骨髓微核实验。结果:不同浓度的rvMIP实验组SD大鼠母鼠的畸胎率分别为29%,17%和25%,胎鼠总畸形率分别为3.1%,2.5%和1.6%。NIH小鼠骨髓微核率在给药后24h雌鼠分别为1.50,1.00和1.00,嗜多染红细胞与正染红细胞比值(PCE/NCE)分别为0.4,0.4和0.5,雄鼠分别为1.33,1.33和1.67,PCE/NCE比值分别为0.6,0.5和0.5。给药后48h的微核率雌鼠分别为2.00,1.33和1.33,PCE/NCE比值分别为0.5,0.5和0.5,雄鼠分别为1.50,2.00和1.00,PCE/NCE比值分别为0.3,0.4和0.5。各项检测指标在实验组与阴性对照组之间差别没有显著意义,P>0.05;在实验组与阳性对照组之间差别有非常显著意义,P<0.01。结论:在本实验条件下,rvMIP没有致畸胎和细胞染色体损伤作用。 华兴 陈宏 张光 刘俊云 孙晗笑关键词:胚胎 突变 微核 人呼吸道合胞病毒FHRA-HRB片段的表达纯化与鉴定 被引量:1 2017年 目的:克隆呼吸道合胞病毒融合F蛋白(RSV-F)中FHRA-HRB基因片段,构建体外的原核表达载体,对FHRA-HRB蛋白进行表达纯化,为进一步研究FHRA-HRB蛋白构效关系及抗RSV活性提供实验依据.方法:用Trizol法从RSV感染的Hep-2细胞中提取病毒RNA,逆转录得c DNA,使用Primer 6.0软件设计特异性引物,聚合酶链反应(PCR)扩增得到FHRA-HRB片段,测序成功后,将FHRA-HRB插入p ET-15b脱磷载体中,转化入Rosettagami表达宿主,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导FHRA-HRB的体外表达,Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白.用Western-blot法鉴定FHRA-HRB蛋白表达.结果:成功扩增了大小约1100 bp的FHRA-HRB片段,克隆进p ET-15b载体后,菌液PCR验证与测序分析结果表明FHRA-HRB片段序列与预期一致且读码框插入正确,表达载体构建成功.工程菌经IPTG诱导后成功表达大小约43 000的FHRA-HRB蛋白,经Ni-NTA agarose纯化后FHRA-HRB蛋白纯度达95%以上.纯化后的FHRA-HRB蛋白经Western-blot鉴定其大小正确.结论:成功构建p ET-15b-FHRA-HRB表达载体,经表达纯化后,得到了纯度较高的FHRA-HRB蛋白,纯化蛋白经Western-blot鉴定正确.本研究为进一步研究其抗RSV活性和开发以F蛋白为靶点的抗RSV药物提供实验依据. 夏超 沈良华 李满妹 唐维 易善泽 牛得伟 王峰 李药兰关键词:呼吸道合胞病毒 蛋白表达 重组vMIP-Ⅱ鼻腔给药的研究 :为方便用药,减少血源性传播,提高vMIP—Ⅱ生物利用度,本文致力于鼻用vMIP-Ⅱ喷雾剂和粉雾剂(微球)的研究.方法:以SD大鼠为动物模型,分别进行鼻腔给药和静脉注射给药,采用直接竞争ELISA法测定大鼠血浆中vMIP... 周云 孙晗笑 王峰 莫雪梅 李秀英关键词:鼻腔喷雾剂 粉雾剂 药代动力学 纤毛毒性 大肠杆菌表达的vMIP-Ⅱ包涵体的纯化与复性研究 被引量:12 2005年 目的纯化、复性大肠杆菌表达的vMIPⅡ包涵体蛋白。方法用8molL尿素缓冲液变性溶解vMIPⅡ包涵体,然后加入十二烷基磺酸钠(SDS)进一步促溶,利用金属亲和层析和分子筛层析纯化,再利用柱层析去除SDS,纯化后透析复性;通过荧光和单核淋巴细胞趋化抑制实验检测复性蛋白的结构和抑制单核淋巴细胞趋化的活性。结果重组vMIPⅡ纯化和复性后,仍具有完整的高级结构和抑制单核细胞趋化的活性。结论已获得了重组vMIPⅡ活性蛋白,为进一步研究应用奠定基础。 张少恩 孙晗笑 张光 杨清玲 沙文琼 刘俊云 龚莉桂关键词:大肠杆菌表达 复性 包涵体蛋白 层析纯化 活性蛋白 趋化 阳春砂倍半萜合酶AvTPS基因的生物信息学分析和表达纯化 2021年 目的:克隆阳春砂倍半萜合酶(AvTPS)编码序列,并对其蛋白进行表达和纯化.方法:根据转录组测序获得的倍半萜合酶(TPS)核苷酸序列设计引物,以反转录生成的cDNA为模板,使用RT-PCR克隆获得AvTPS的编码(CDS)序列,并连接pMD-18T载体上,对阳性菌进行基因测序.利用ClustalX等生物信息软件对AvTPS蛋白氨基酸序列进行生物信息学分析.利用表达载体pSDS233,Ni-NTA亲和层析对蛋白表达和纯化.结果:通过RT-PCR获得了大小为1650 bp的AvTPS的CDS序列并成功连接到pMD-18T载体.生物信息分析表明,AvTPS蛋白含549个氨基酸残基,二级结构以α-螺旋为主等信息.通过蛋白的表达和纯化,获得纯度为94.22%的可溶性AvTPS蛋白.结论:从阳春砂中可成功克隆出AvTPS的编码基因,为后续研究其基因在阳春砂中的特异性表达奠定基础. 张斌 印思颖 付献瑶 沈良华 郑自由 周仁超 王峰关键词:阳春砂 表达纯化 生物信息学分析 禽流感病毒基因组研究 被引量:5 2005年 禽流感是严重危害家禽业和人类健康的一种传染性疾病,是由A型禽流感病毒(avianinfluenzavirus,AIV)引起。本文就AIV基因组的研究进展进行了综述。 江振友 唐小龙 孙晗笑关键词:禽流感病毒 毒力变异 基因组 人天然免疫基因TRIM5α的序列及进化分析 被引量:2 2009年 目的:克隆人TRIM5α基因,对其编码序列进行分析,并进行分子进化研究。方法:以HeLa细胞cDNA为模板,用RT-PCR方法克隆人TRIM5α基因,与人基因组序列对比分析其结构;用BioEdit、Genedoc和MEGA4.1软件进行蛋白序列联配和进化分析。结果:扩增了长1482bp的人TRIM5α基因片段,序列分析表明其覆盖了完整编码框,编码由493个氨基酸残基组成的人TRIM5α蛋白;人TRIM5α蛋白与黑猩猩、大猩猩、猩猩、猕猴TRIM5α蛋白的相似度分别为98.2%、96.8%、93.7%和87.6%。结论:克隆了人TRIM5α基因,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。 孟祥平 李秀英 孙晗笑 莫雪梅关键词:人免疫缺陷病毒 进化 克隆 水稻细胞质铜锌超氧化物歧化酶基因的序列和表达分析 被引量:15 2007年 以水稻(Oryza sativa)品种Cpslo17幼穗为材料,通过RT-PCR克隆了长度为698bp的编码水稻细胞质铜锌超氧化物歧化酶基因(OsCu/Zn-SOD)。序列分析表明其覆盖基因完整编码框,编码由152个氨基酸组成的蛋白,它与玉米(Zea maize)Cu/Zn-SOD基因序列的相似率为88%。TargetP和ChloroP预测编码蛋白N端无信号肽序列,且此编码区段有8个外显子和7个内含子。利用Swiss-Model站点预测OsCu/Zn-SOD三维结构,并分析其铜锌离子结合位点的结构。RT-PCR结果表明OsCu/Zn-SOD在水稻不同品种均有表达,但表达量存在差异,OsCu/Zn-SOD在Cpslo17的分裂旺盛的幼嫩组织如幼穗、开花期花序和未成熟种子中表达量较高,而在叶片中表达量相对较低,在愈伤组织中表达微弱。 王峰 王宏斌 王金发关键词:水稻 铜锌超氧化物歧化酶 基因组结构 RT-PCR SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR法检测贝类中的诺如病毒 被引量:3 2010年 针对诺如病毒Ⅱ型的保守区域设计引物,建立了SYBR Green Ⅰ实时荧光RT-PCR检测诺如病毒Ⅱ型的反应体系。此方法的病毒检测下限达到10^2拷贝,标准曲线的线形范围为10^2-10^6拷贝,相关系数为0.9952,斜率为-2.982,截距为35.84。对诺如病毒Ⅱ型检测特异,与轮状病毒、腺病毒、甲肝病毒、星状病毒无交叉反应。针对质粒标准品检测的批内试验变异系数(CV)为0.95%-1.69%(n=5),批间试验CV为0.87%-1.24%(n=3)。运用此方法随机检测30份贝类水产品,检测出2份阳性样品。结果表明,SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR检测诺如病毒Ⅱ型的方法灵敏、特异、重复性好,可应用于贝类水产品的快速检测。 莫雪梅 高东微关键词:SYBR SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测HIV-1前病毒方法的建立及应用 被引量:3 2010年 目的建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR技术测定HIV-1前病毒载量方法,并以其观察相关病毒进入抑制剂对HIV-1前病毒的作用。方法选择HIV-1的gag和env保守区域设计引物,建立SYBR Green I荧光定量PCR测定HIV-1前病毒载量的体系,并以其观察6μg/ml^6 ng/ml的重组病毒巨噬细胞炎症蛋白(rvMIP)、逆转录酶抑制剂(AZT)、膜融合抑制剂(T-20)、rvMIP+AZT、rvMIP+T-20对HIV-1前病毒载量的影响。结果所建立的荧光定量PCR体系的检测下限为101Copies,其标准曲线的相关系数为0.998 9,斜率为-4.925,截距为35.70;除6ng/ml的rvMIP、AZT、T-20外,三种药物处理后HIV-1前病毒载量均显著减小(P<0.05),并呈质量浓度依赖性;联合用药者前病毒载量显著低于单用rvMIP者(P<0.05),HIV-1前病毒载量rvMIP+T-20(rvMIP+AZT(rvMIP(T-20(AZT。结论本研究建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法具有灵敏、快速、准确及成本低廉等优点;与T-20或AZT联用可增强rvMIP对HIV-1前病毒的抑制作用。 莫雪梅 闫莉 孙晗笑