吉林大学生命科学学院疫苗研究中心
- 作品数：27 被引量：39H指数：3
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- 重组HIV-1腺病毒载体活疫苗的冻干保护剂研究被引量：12
- 2007年
- 目的研制重组HIV-1腺病毒载体活疫苗的冻干保护剂。方法在重组HIV-1腺病毒载体活疫苗中加入不同配比的保护剂,在适宜条件下制备成冻干剂型。根据冻干后外观、病毒滴度和热稳定性试验等结果,筛选出冻干保护剂的最适配方。结果以人血白蛋白、海藻糖、甘露醇、右旋糖苷和蔗糖等成分按比例配伍制备的保护剂,对重组HIV-1腺病毒载体活疫苗显示了较好的保护作用。冻干前后疫苗病毒感染性滴度下降在0.17LogCC ID50/ml以内;37℃放置1周,滴度下降0.3LogCC ID50/ml左右;37℃放置3周后,滴度下降约为0.6LogCC ID50/ml。而无保护剂的液体疫苗对照于37℃放置1周,滴度下降近2.5个LogCC ID50/ml。结论以人血白蛋白、海藻糖、甘露醇、右旋糖苷和蔗糖等配伍而制备的保护剂效果较好。
- 张一折滕洪刚吕帅然姜春来于湘晖孔维
- 关键词：冷冻干燥保护剂
- 表达HIV-1 Gag-Pol抗原的重组痘病毒的构建及免疫原性
- 2007年
- 目的构建稳定高效表达HIV-1Gag-Pol蛋白的重组痘病毒载体疫苗,并检测其体液免疫效果。方法将修饰型HIV-1Gag-Pol基因插入到痘病毒表达载体pSC11m2启动子P7·5下游,经与野生型痘病毒同源重组后,进行蓝白斑筛选。用筛选得到的重组病毒rM-GP转染HEK293细胞,经SDS-PAGE和Westernblot检测表达蛋白。用该重组病毒免疫BALB/c小鼠,并检测体液免疫应答。结果已筛选到稳定高效表达HIV-1Gag-Pol蛋白的重组痘病毒载体rM-GP,经Westernblot,在免疫小鼠血清中检测到抗HIV-1p24蛋白的特异性抗体。结论重组痘病毒载体rM-GP能稳定高效表达HIV-1Gag-Pol蛋白,并能引起有效的体液免疫应答。
- 滕红刚姜春来于湘晖孔维
- 关键词：人类免疫缺陷病毒免疫原性
- 人黏蛋白1串联重复区DNA疫苗诱导小鼠的免疫应答被引量：1
- 2007年
- 目的观察人黏蛋白1串联重复区(MUC1 VNTR)DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的体液及细胞免疫应答。方法将含有33个黏蛋白1重复区序列(33m)的重组质粒pVR1012-33m,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,并加强免疫2次,每次100μg,间隔2周,分别以空载体pVR1012和生理盐水为对照。末次免疫后取小鼠血清及脾淋巴细胞,Western blot检测血清抗体特异性,LDH法检测CTL反应活性,MTS/PMS法检测脾淋巴细胞增殖活性。结果重组质粒免疫组小鼠血清中检出了MUC1 VNTR抗原特异性抗体。用重组质粒pVR1012-33m免疫BALB/c小鼠后,在效靶比为100:1和33:1时,可显著地诱导特异性CTL应答。在MUC1 VNTR抗原肽的刺激下,免疫小鼠脾淋巴细胞得到增殖,与空载体和生理盐水对照组相比,差异均有显著意义。结论DNA疫苗pVR1012-33m在BALB/c小鼠体内可诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答,为预防、治疗性MUC1 VNTR疫苗的研制提供了一定的实验依据。
- 张淑子张海红于湘晖孔维李维
- 关键词：DNA疫苗细胞免疫体液免疫
- HIV-1 Vif与ElonginC蛋白在大肠杆菌中的共表达被引量：1
- 2008年
- 目的在大肠杆菌中共表达HIV-1Vif与ElonginC蛋白。方法PCR扩增ElonginC基因全长DNA片段,克隆入pMDT-easy载体,经NdeⅠ/BamHⅠ双酶切后,与质粒pRSETB连接,构建质粒pRSETB-ElonginC。将质粒pMRI-Vif转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达菌株,再将此菌株制备成感受态细胞,用pRSETB-ElonginC质粒转化该细胞,经1mmol/L IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果质粒pRSETB-ElonginC经NdeⅠ/BamHⅠ双酶切,可切出约3000和400bp的2条片段,测序证明质粒构建正确。在大肠杆菌中共表达了Vif与ElonginC蛋白,该蛋白具有良好的抗原特异性。结论在大肠杆菌中共表达了Vif与ElonginC蛋白。
- 朱可彤王小丹杜娟郭博孔维于湘晖
- 关键词：人类免疫缺陷病毒-1
- 重组MVA病毒载体疫苗的冻干保护剂研究被引量：1
- 2006年
- 目的研制重组MVA病毒载体疫苗的耐热冻干保护剂。方法在重组MVA病毒载体疫苗中加入不同配比的保护剂,在适宜的条件下制备成冻干剂型。根据冻后外观、病毒滴度和热稳定性等结果,筛选出保护剂的最适配方。结果以海藻糖、甘露醇、右旋糖苷和肌醇等按比例、配伍而成的保护剂,对MVA病毒载体疫苗显示了较好的保护性,疫苗冻干前后病毒滴度下降在0.12LgPFU/ml以内,37℃放置1周,滴度下降0.35LgPFU/ml左右;放置3周,滴度下降不超过1LgPFU/ml。而无保护剂的液体疫苗对照于37℃放置1周,滴度下降近1LgPFU/ml;放置3周,滴度下降3.5LgPFU/ml左右。结论以海藻糖、甘露醇、右旋糖苷和肌醇等配伍而成的保护剂是一种良好的疫苗保护剂。
- 张一折姜春来王忠诚于湘晖吴永革刘成山孔维
- 关键词：冷冻干燥保护剂冻干保护剂
- 携带HBVC基因重组MVA假病毒颗粒的构建及抗原性鉴定
- 目的:构建携带HBVC基因的重组MVA假病毒颗粒,为进一步评价其作为基因治疗工具的价值奠定基础。
方法:将HBVC基因通过基因重组构建入穿梭载体pSC11,得到质粒pSC11-C,将此质粒转染MVA病毒感染的...
- 栾翔凌胡燕沈宏辉侯俊王志杰孔维辛绍杰貌盼勇
- 关键词：痘苗病毒基因治疗HBV慢性感染乙型肝炎疫苗
- 文献传递
- 中国流行株HIV-1B/C重组亚型包膜蛋白真核表达载体的构建及稳定表达细胞株的筛选被引量：2
- 2006年
- 目的获得高质量的中国流行株HIV-1B/C重组亚型包膜蛋白抗原。方法改造表达载体,以构建中国流行株HIV-1B/C重组亚型包膜蛋白基因带有筛选标记的真核细胞表达质粒,将所构建质粒转染真核细胞,用含有抗性的培养基筛选出能够高效、持续表达包膜蛋白的稳定表达细胞株。结果所构建的表达载体pVRPEnv转染细胞后可表达目的蛋白,并建立了稳定表达细胞系。结论获得了可以高效、持续稳定表达中国流行株HIV-1B/C重组亚型包膜蛋白的细胞株。
- 马红霞于湘晖姜春来吴永革孔维
- 关键词：HIV-1包膜蛋白细胞系
- 四川地区宫颈癌患者组织中部分高危HPV亚型感染及E6基因序列分析被引量：5
- 2006年
- 目的 调查四川地区宫颈癌患者组织中高危人乳头瘤病毒（HPV）33、52和58亚型的感染状况及E6基因突变特性,为制备适合中国人群的HPV疫苗提供流行病学资料.方法 采用PCR技术,并结合基因测序分析.结果 对四川地区2003～2004年60份宫颈癌患者癌组织DNA进行HPV检测,获得HPV52和HPV58亚型各4份,检出率为6.7%;HPV33亚型1份,检出率为1.7%.对所获得的各份HPV33、52和58E6基因测序,均有碱基突变.结论 HPV52型感染率在四川地区相对较高.与GenBank标准株相比,四川地区发现的HPV33和HPV52 E6基因有多处突变,与日本发现的HPV33和HPV52突变株相近.
- 邱爱东乌恩奇任源于湘晖吴永革金英花姜春来查晓孔维
- 关键词：人乳头瘤病毒宫颈癌E6基因突变
- 阿尔采默病治疗性疫苗原核表达载体的构建
- 2007年
- 目的构建阿尔采默病治疗性疫苗原核表达载体。方法选择Aβ42的B细胞优势表位的15个氨基酸基因序列,与趋化因子BCA-1基因连接,克隆至经突变改造的原核表达质粒pRSET/no His中,经酶切和DNA测序鉴定重组质粒。结果酶切鉴定及DNA测序确定已将BCA-1/Aβ1-15克隆到表达载体pRSET/no His中。结论已成功地构建了Aβ42亚单位疫苗的原核表达质粒。
- 吴永革尹艳春孙天旭于湘晖姜春来金英花孔维
- 关键词：阿尔采默病治疗性疫苗原核表达
- Vif-ΔN28和Cullin5-N138蛋白的表达及纯化
- 2006年
- 目的获得高纯度的Vif-ΔN28和Cullin5-N138蛋白。方法以Vif/VR1012质粒为模板,PCR扩增出Vif-ΔN28基因并插入pRSETB质粒。将构建的原核表达载体Vif-ΔN28/pRSETB以及已有的Cullin5-N138/pRSETB质粒分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,产物经Ni-NTA离子纯化柱纯化、复性。结果所表达的Vif-ΔN28和Cullin5-N138蛋白约占各自菌体总蛋白的20%,纯化后蛋白纯度均可达90%以上。结论已成功构建了Vif-ΔN28原核表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达,获得了可溶性的纯化的Vif-ΔN28和Cullin5-N138蛋白。
- 张文艳楼朝平朱可彤张帆姜春来吴永革于湘晖孔维
- 关键词：人免疫缺陷病毒
