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一种规模化生产轮状病毒疫苗的方法: 本发明涉及一种规模化生产轮状病毒疫苗的方法，具体涉及一种用14L生物反应器大规模培养轮状病毒灭活疫苗的方法，包括以下步骤：1)Vero细胞的复苏与传代，2)细胞收集与接种生物反应器，3)细胞的生物反应器培养，4)换液与细...; 李云富李刚黄勇付臻鹏刘春庭罗翀胡雪芹肖俊光; 文献传递

轮状病毒抗原ELISA定量检测方法的建立被引量：3: 2016年; 目的建立轮状病毒（rotavirus,RV）抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,用于RV灭活疫苗生产过程中抗原含量的检测。方法采用RV全病毒免疫豚鼠,制备抗RV血清,纯化后作为检测抗体。以购进的羊抗A群轮状病毒多克隆抗体作为包被抗体,经辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗豚鼠血清抗体作为酶标抗体,建立双抗体夹心ELISA法,检测样本中RV抗原含量,并对该方法进行验证及应用。结果所建立的方法,包被抗体的使用浓度为5μg/ml,检测抗体的使用浓度为3.2U/ml,酶标抗体使用浓度为10ng/ml。测定的线性范围为3～94ng/ml,R2在0.993以上,线性关系良好,定量限度为3ng/ml;对不同浓度的RV抗原参考品进行检测,回收率在91.5%～109.3%;变异系数均小于5.2%;与冻干乙型脑炎灭活疫苗、灭活乙型脑炎病毒液、小牛血清、人白蛋白、MA104细胞培养上清液、M199培养基均无交叉反应;通过RV灭活疫苗原液纯化过程中间品抗原含量的检测,能有效反映抗原纯化趋势。结论已建立了RV抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,该方法线性好,特异性强,灵敏度高,准确性好,可用于RV疫苗生产过程中间品及终产品的抗原定量检测。; 李云富付臻鹏李刚罗翀黄海彬黄勇刘春庭林上炎周淑芳; 关键词：轮状病毒抗原双抗体夹心ELISA

轮状病毒在不同细胞上培养效果的比较: 2016年; 目的比较轮状病毒(rotavirus,RV)在不同细胞上的培养效果,确定RV最适培养细胞株。方法采用原代牛肾细胞(PCKC)、MA104细胞、CV-1细胞、Vero细胞4种细胞培养RV,观察RV在不同细胞培养过程中细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),并检测病毒收获液的病毒毒力及病毒RNA。结果 MA104和PCKC细胞较适宜RV的增殖培养,其次是CV-1细胞,而Vero细胞感染病毒后3 d才出现CPE,6 d才有约75%的细胞圆缩死亡,这时收获的病毒液滴度也不及前3种细胞的病毒收获液滴度,且收获液的病毒RNA电泳的条带较模糊。结论 MA104、PCKC、CV-1细胞较适宜RV的增殖培养,而应用于大规模生产疫苗的Vero细胞培养RV要想达到前3种细胞的效果,还需进一步完善感染和培养方法。; 李云富李刚黄伟荣黄勇刘春庭付臻鹏林上炎罗翀; 关键词：轮状病毒细胞培养

一种乙型脑炎疫苗的生产方法: 本发明提供一种乙型脑炎疫苗的生产方法，该生产方法包括以下步骤：将Vero种子细胞加入300升生物反应器中，与微载体一起进行灌流培养；灌流培养5～6天后，沉降微载体和细胞，以维持液替换培养基，接种乙型脑炎病毒继续进行灌流培...; 刘钿莲刘丹艾文

鼠神经生长因子病毒灭活效果的验证被引量：1: 2014年; 目的对鼠神经生长因子（mouse nerve growth factor,mNGF）病毒灭活工艺进行验证。方法以伪狂犬病毒（pseudorabies virus,PRV）和Sindbis病毒为指示病毒,考察辛酸钠法对mNGF原液中病毒的灭活效果,并比较灭活后与未灭活原液的mNGF活性、纯度、等电点及其-20℃贮存0、3、6个月的稳定性。结果 mNGF原液经0.3%辛酸钠、pH（5.0±0.2）、（25±1）℃灭活90 min,PRV和Sindbis病毒滴度均下降6 lgCCID50/ml以上,灭活60、90 min样品盲传3代后,均未检测出病毒。灭活后与未灭活原液的mNGF活性无差异,比活性均在5.0×10^5 AU/mg以上,蛋白纯度均为100%,等电聚焦主区带均在8.65～9.30之间;-20℃贮存0、3、6个月,蛋白纯度均为100%,比活性均无明显差异,且6个月内比活性均未明显降低。结论辛酸钠法可安全、快速、高效地灭活mNGF原液中的指示病毒及其所代表的相关病毒,保证了产品的质量及其工艺的稳定性,保障了临床用药的安全性。; 扈会平赵淑媛唐正均李云富曾娟梅孙玉龙刘兵黄剑波; 关键词：神经生长因子辛酸钠病毒灭活

一种利用生物反应器规模化生产轮状病毒疫苗的方法: 本发明涉及一种利用生物反应器规模化生产轮状病毒疫苗的方法，具体涉及一种用75L生物反应器大规模培养轮状病毒灭活疫苗的方法，包括以下步骤：1)Vero细胞的复苏与传代，2)细胞收集与接种生物反应器，3)细胞的生物反应器培养...; 李云富李刚黄勇付臻鹏刘春庭罗翀胡雪芹肖俊光; 文献传递

一种乙型脑炎疫苗制剂的生产方法: 本发明提供一种乙型脑炎疫苗制剂的生产方法，该生产方法包括以下步骤：向灭活和纯化的乙型脑炎病毒培养液中加入1mol/L pH8.5磷酸盐缓冲溶液使其磷酸盐浓度达到0.05mol/L，然后在搅拌下加入1mol/L的NaOH溶...; 刘钿莲马书智艾文; 文献传递

一种乙型脑炎疫苗的纯化方法: 本发明提供一种乙型脑炎疫苗的纯化方法，该纯化方法包括以下步骤：将灭活的乙型脑炎病毒浓缩液经聚丙烯葡聚糖分子筛柱层析，洗脱溶剂为pH为7.5～8.5的磷酸缓冲液，紫外检测器波长280nm处检测；收集第一洗脱峰，以带有季胺阳...; 刘钿莲沈名锋艾文

一种用于再生处理细胞和病毒培养用微载体的方法: 本发明涉及一种细胞及病毒培养用微载体的再生处理方法。该方法是通过特殊处理液和合适的处理手段对已使用过的微载体即已培养过贴壁细胞的微载体进行有效的处理，使其达到与新微载体一样的培养效果。并且通过本方法处理，可使微载体反复使...; 李云富李刚吴林彝黄奕斌郭晓娜罗翀肖俊光; 文献传递

一种处理液以及采用其测定铝盐吸附型疫苗中抗原含量的方法: 本发明公开了一种用于解吸附铝盐吸附型疫苗中的抗原的处理液，所述处理液为磷酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液，并包含蛋白质以及一种或多种酸和/或它们的盐。本发明还公开了一种采用该处理也检测铝盐吸附型疫苗中抗原含量的方法。本发明方法...; 罗翀李刚关欣陈小芳李云富汪恩浩; 文献传递

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