第三军医大学药学院临床微生物及免疫学教研室
- 作品数：20 被引量：55H指数：5
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- 相关机构：西南大学生物技术学院蚕学与系统生物学研究所西南大学生物技术学院中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
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- 类鼻疽伯克霍尔德菌粘附素1434基因的克隆表达及免疫学性质鉴定
- 前言类鼻疽是由类鼻疽伯克霍尔德菌感染引起的以肺炎和败血症为主要症状的一种新发传染病,流行于南北纬20°之间,可表现阴性、亚临床到临床不同体征,具有高误诊率、高死亡率、高耐药性和人群普遍易感。粘附素1434基因在类鼻疽伯克...
- 方瑶顾江于波王海光毛旭虎
- 文献传递
- 幽门螺杆菌抗原HLA限制性免疫显性Th细胞表位的系统筛选与鉴定方法
- 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染超过全世界半数人口,是胃炎,胃溃疡、十二指肠溃疡的主要病因,并与胃癌,胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALT)的发生密切相关,被世界卫生组织列为胃癌的...
- 陈立吴超邹全明
- 文献传递
- 肠出血性大肠杆菌O157:H7导致宿主细胞A/E损伤的分子机制研究进展
- 肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157:H7是一种重要的病原菌,可引起腹泻、出血性肠炎(Hemorrhagic enteritis,HC),并容易继发溶...
- 蒋明明
- 关键词：分子机制
- 文献传递
- 幽门螺杆菌cagT蛋白的表达、纯化及免疫原性研究被引量：4
- 2010年
- 为了解析cagT蛋白的结构,进而了解cagT基因在幽门螺杆菌致病中的作用,应用PCR技术从幽门螺杆菌26695菌株基因组中扩增cagT基因,T/A法克隆,连接至pET-28a(+)载体,转化宿主细胞E.coliBL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达,亲和层析法纯化目的蛋白,免疫家兔制备抗体并鉴定其抗原性.成功克隆cagT基因,重组cagT基因片段的测序结果与GenBank上公布的序列相同.重组cagT蛋白以可溶和包涵体两种形式表达,免疫家兔所得的抗体滴度为1∶32.结果构建了高效表达cagT蛋白的重组载体pET-28a(+)-cagT,表达的蛋白具有良好的免疫原性,为后续的结构和功能研究奠定了基础.
- 丁红雷潘竞张卫军张怡罗萍解庆华毛旭虎邹全明
- 关键词：幽门螺杆菌基因克隆
- 幽门螺杆菌适应性定植相关基因HP0318的克隆及序列分析
- 2007年
- 目的测定幽门螺杆菌(HP)适应性定植蒙古沙鼠前后HP0318基因序列并分析其序列差异,以了解该基因在HP适应性定植过程中在基因水平是否发生了改变,为进一步研究HP的适应性变异机制提供实验依据。方法对幽门螺杆菌临床分离株M0、沙鼠适应株M13及标准株NCTC11637基因组中的HP0318全长基因进行扩增,然后连接到PMD18-T载体进行测序,最后通过DNAsis软件对不同菌株来源的HP0318基因进行多重序列比对,并与Genbank公布的2个标准株(HP26695株和J99株)的HP0318序列进行对比分析。结果PCR法成功扩增出了3个菌株的HP0318基因片段,克隆到PMD18-T载体上酶切鉴定正确。测序结果表明3株幽门螺杆菌(M0、M13、11637)的HP0318序列大小均为756bp。序列分析显示在不同来源的HP菌株中表现出较高的保守性,最低相似性达到94%。结论HP0318基因属于HP特异性基因,HP在沙鼠中适应性定植可能并不是由HP0318基因水平的变异引起,有必要进一步实验验证其功能和阐明其所具有的调控机制。
- 郭刚肖洁邹全明童文德张卫军
- 关键词：幽门螺杆菌克隆
- 幽门螺杆菌尿素酶B亚单位功能片段构建及免疫原性研究被引量：2
- 2007年
- 目的构建表达免疫活性的尿素酶功能片段原核表达体系。方法根据尿素酶B基因序列以及文献报道的尿素酶活性中心区域,primer5.0设计相应的引物,以Hp基因组为模版,PCR扩增拟表达的尿素酶活性片段,经测序证实后将片段亚克隆于原核表达载体pET28中,转入宿主菌BL21后IPTG诱导表达后,Tris-Tricine PAGE电泳及抗Hp特异性抗体western-tbollting鉴定目的蛋白表达。结果PCR从Hp基因组中扩增出414bp目的片段,经酶切及测序证实构建了功能片段表达阳性重组子,命名为pU414,IPTG诱导后电泳分析可以发现相应分子量附近出现可疑目的蛋白,能够被特异性血清识别。结论成功建立尿素酶活性功能片段蛋白表达载体,为下一步实验研究奠定基础。
- 袁小澎邹全明吴超张卫军郭鹰
- 关键词：幽门螺杆菌尿素酶免疫原性
- 幽门螺杆菌碳酸酐酶诱发的胃黏膜免疫损伤作用研究
- 目的目前对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染的致病机制及其诱发的免疫损伤机制尚不清楚,本研究对 Hp 碳酸酐酶(carbonic anhydrase,CA)诱发的胃黏膜免疫损伤作用进行动物实验...
- 刘开云郭刚邹全明
- 文献传递
- 肠出血性大肠埃希菌O157:H7 espA基因的克隆与表达被引量：9
- 2006年
- 目的通过DNA重组技术表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7的EspA蛋白,并分析其免疫学性质。方法采用PCR技术从EHEC O157:H7基因组中扩增espA基因,T／A法克隆,连接至pET-28a(+)载体上,转化宿主细胞E．coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析法纯化目的蛋白, SDS-PAGE测定其相对分子质量,同时分析其N端氨基酸序列,免疫家兔鉴定其抗原性。结果重组espA基因片段的测序结果与GenBank上基因序列只有1个碱基不同,一致性为99．83％,所编码的氨基酸序列没有改变。重组EspA蛋白在工程菌中以包涵体的形式表达,表达量约30％。免疫家兔所得抗体滴度为1:32。结论构建高效表达EspA蛋白的重组载体pET-28a(+)-espA,表达的蛋白具有良好的免疫原性,为进一步制备亚单位疫苗奠定基础。
- 王庆旭毛旭虎邹全明曾韦锟罗萍程建平易勇马颖
- 关键词：EHECO157:H7DNA重组
- 免疫磁分离及免疫比浊分析对福氏志贺菌的自动快速定量检测被引量：8
- 2009年
- 目的以SPA包被的磁珠和富含SPA的金黄色葡萄球菌分别与福氏志贺菌的多抗血清结合,制备福氏志贺菌特异的多抗磁珠和抗体致敏的金黄色葡萄球菌作为协同凝集试剂与免疫比浊试剂,利用免疫比浊分析探索其在福氏志贺菌自动快速定量检测中的初步应用。方法福氏志贺菌F1a免疫日本大耳白兔制备多抗血清,磁珠包被SPA后再与多抗偶联,制成多抗免疫磁珠。以该磁珠捕获模拟标本的福氏志贺菌,接种MH平板37℃培养18～24h,菌落计数后计算免疫磁珠的特异富集作用。富含SPA的金黄色葡萄球菌(No1800株)经甲醛灭活后,与福氏志贺菌的多抗血清结合,制备特异抗体致敏的金黄色葡萄球菌,作为协同凝集试剂和自动定量检测的免疫比浊试剂,在日立7060全自动生化分析仪编制程序进行自动检测并进行初步的方法学评价。结果福氏志贺菌F1a免疫日本大耳白兔获得了高质量的多抗血清,特异性好,凝集效价达1∶320;制备多抗免疫磁珠对福氏志贺菌具有一定的富集作用,菌落计数显示磁珠处理的细菌捕获效率约为30%;抗体致敏的金黄色葡萄球菌,作为协同凝集试剂和自动定量检测的免疫比浊试剂,在玻片上能与待测福氏志贺菌产生明显的凝集现象,在日立7060全自动生化分析仪上定量检测灵敏、特异、线性良好。结论以福氏志贺菌的多抗血清分别致敏SPA包被的磁珠和富含SPA的金黄色葡萄球菌,制备特异的多抗磁珠对福氏志贺菌有一定的特异捕获与富集作用,抗体致敏的金黄色葡萄球菌作为协同凝集试剂与免疫比浊试剂对福氏志贺菌的自动、快速、定量检测具有较好的效果,为病原菌的快速诊断和自动定量分析提供了新的思路。
- 肖敏易勇毛旭虎罗萍聂棱贾莉萍魏平王惠敬华邹全明
- 关键词：福氏志贺菌免疫磁珠免疫比浊SPA
- 幽门螺杆菌双组分系统耐酸相关蛋白ArsS的原核表达及纯化
- 2010年
- 目的原核表达并纯化幽门螺杆菌双组分系统耐酸相关蛋白ArsS,为深入研究其功能及其在幽门螺杆菌耐酸机制中的作用奠定基础。方法以幽门螺杆菌菌株26695基因组为模板,采用PCR法扩增ArsS基因,插入pET-22b(+)载体,构建重组原核表达质粒pET-22b(+)-ArsS,转化E.coliBL21(DE3),0.5mmol/LIPTG25℃诱导表达,并采用亲和层析与分子筛层析对重组蛋白进行纯化。结果重组原核表达质粒pET-22b(+)-ArsS经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;重组蛋白以可溶性形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上;分子筛层析图谱显示,在150mmol/LNaCl条件下,目的蛋白层析效果较好,纯化后的重组蛋白纯度可达95%以上,浓度约为10mg/ml。结论已成功原核表达并纯化获得了高纯度的ArsS蛋白。
- 张晓丽章金勇邹全明
- 关键词：幽门螺杆菌耐酸双组分系统基因表达
