南方医科大学检验与生物技术学院输血医学系
- 作品数：17 被引量：29H指数：4
- 相关机构：石河子大学动物科技学院广州中医药大学第一临床医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基于二代测序的RhD阳性个体RHD基因mRNA选择性剪接分析被引量：2
- 2021年
- 【目的】本研究旨在对RhD阳性个体中红细胞特异性表达的RHD基因不同转录本进行分析,并对选择性剪接发生的机制进行初步探讨。【方法】利用体外有核红细胞培养体系分离并培养RhD阳性个体的有核红细胞,使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对RhD阳性个体RHD基因外显子6至3’非编码区扩增后进行二代测序,分析mRNA转录本,并采用生物信息学方法分析RHD基因所有外显子5’及3’剪接位点的最大熵值。【结果】RHD基因的转录本以正常全长mRNA为主,除此之外还存在其他8种异常转录本。按照表达量从多到少,分别为外显子7缺失、外显子9缺失、外显子8和9缺失、外显子7、8和9缺失、外显子7和9缺失、外显子8和9缺失合并外显子7与10间插入一段170 bp的内含子7片段、全长mRNA但插入170 bp的内含子7片段和外显子9缺失但插入一170 bp的内含子7片段,其中最后3种为新转录本。生物信息学分析提示外显子7和外显子9异常剪接可能与其5’-剪接位点(5’-splice site,5’ss)或3’ss和剪接体结合能力下降有关,而内含子7片段异常表达于转录本中可能与其两端存在类似5’ss和3’ss剪接保守序列有关。【结论】RHD基因存在十分复杂的选择性剪接模式,使RhD阳性个体的RHD基因在mRNA水平上存在多种不同的剪接转录本。
- 罗亚林魏玲姬艳丽罗广平付涌水付涌水温机智
- 关键词：转录本剪接
- 调节性T淋巴细胞对急性期布鲁菌病患者治疗效果的影响被引量：5
- 2017年
- 目的调查布鲁杆菌感染后宿主的体液和细胞免疫应答情况，Foxp3^＋在布鲁菌病患者治疗过程中的变化，阐明宿主产生免疫抑制对布鲁菌病治疗效果的影响。方法2015年7月至2015年11月，黑龙江农垦总局总医院感染三科住院的急性期布鲁菌病患者65例。标准治疗组28例，根据患者情况选择抗菌药物进行3个疗程的标准治疗，每个疗程20d，疗程间隔10d；免疫增强剂组37例，在标准治疗的基础上增加免疫增强药物。另选取健康体检者30名为健康对照组。在治疗前和每个疗程结束时，采用流式细胞术检测患者外周血中CD3^＋CD4^＋Foxp3^＋Treg含量变化。符合正态分布的数据以孑±S表示。两组间比较采用t检验，多组问的比较采用方差分析，组间两两比较采用SNK法。不符合正态分布的数据进行多个独立样本的非参数检验。结果65例急性期布鲁菌病患者第1疗程结束时外周血中Foxp3^＋ Treg含量为2．83％，第2疗程结束时为3．77％，第3疗程结束时为4．03％，均高于健康对照组的1．69％（￡值分别为5．97、9．05和5．66，均P〈0．01）。第1疗程结结束时，标准治疗组和免疫增强剂组间外周血Foxp3^＋Treg含量差异无统计学意义（t=0．33，P〉0．05），但均高于健康对照组（￡值分别为7．09和4．94，均P〈0．01）。第2疗程结束时，免疫增强剂组患者外周血Foxp3^＋Treg含量高于标准治疗组，差异有统计学意义（t=2．22，P〈0．01），且两组均高于健康对照组（f值分别为10．79和7．25，均P〈0．01）。第3疗程结束时，免疫增强剂组患者外周血Foxp3^＋ Treg含量高于标准治疗组和健康对照组，差异均有统计学意义（t值分别为6．02和6．45，P〈0．01）。结论急性期布鲁菌病患者经过添加免疫增强剂的治疗，外周血Foxp3^＋Treg含量呈现持续上升的趋势，并一直维持在一定高位水平。推测，过�
- 胡飞环张国侠田艳君张立杰刘佰玲王文敬黎诚耀
- 关键词：布鲁菌病T淋巴细胞调节性FOXP3
- 乙肝疫苗免疫献血者人群HBV感染特征
- 目的在我国开展乙肝计划免疫后(1992年)出生的献血者人群,已占献血者总数的三分之一以上。乙肝免疫人群的HBV感染状况直接关乎血液病毒安全。本文将对深圳和广州地区乙肝免疫献血者人群新发慢性和隐匿性HBV感染的状况与特征进...
- 黎诚耀付涌水朱为刚张玉明
- 文献传递
- 布鲁菌外膜蛋白16对成骨细胞的毒力作用被引量：1
- 2021年
- 目的观察布鲁菌外膜蛋白(OMP)16脂化型(L16)和非脂化型(U16)对成骨细胞的毒力效应。方法利用大肠埃希菌BL21(DE3)原核表达系统制备L16和U16重组蛋白,并使用镍柱纯化。采用成组设计,利用小鼠成骨细胞系(MC3T3细胞)分别与L16和U16重组蛋白共孵育(L16、U16刺激组),以布鲁菌脂多糖(LPS)刺激物为阳性对照(LPS对照组),未加任何刺激的细胞作为阴性对照,孵育时间为24 h。CCK-8法检测MC3T3细胞的活力;离心收集培养细胞上清,生物发光法测定上清中乳酸脱氢酶(LDH)的释放率,评价L16和U16对MC3T3细胞的毒力作用;进一步使用AnnexinⅤ-PE/7-AAD双染流式细胞术检测MC3T3细胞的凋亡率,以及通过免疫印迹法(WB)检测凋亡执行蛋白Caspase-3的活化水平。结果L16刺激组细胞活力[(56.16±1.63)%]显著低于U16刺激组和LPS对照组[(97.02±1.44)%、(98.64±0.90)%,P均<0.01],LDH释放率[(84.64±0.96)%]显著高于U16刺激组和LPS对照组[(34.82±3.41)%、(26.75±1.95)%,P均<0.01]。AnnexinⅤ-PE/7-AAD染色结果显示,L16刺激组细胞凋亡率为(46.45±2.19)%,而其余组均<1%。WB结果显示,L16刺激组细胞内存在活化的Caspase-3,而U16刺激组和LPS对照组未检测到此活化片段。结论L16能诱导成骨细胞的凋亡,使成骨细胞的增殖受到抑制,而U16的作用不明显,具备完整脂化结构的布鲁菌L16是毒力效应所必需的。
- 任慧杨恒胡飞环易嘉敏黎诚耀王文敬
- 关键词：外膜蛋白成骨细胞系细胞活力乳酸脱氢酶
- 广州地区无偿献血者戊型肝炎病毒感染流行病学调查被引量：8
- 2019年
- 目的调查广州地区无偿献血者的戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)感染情况。方法 2017年4月-2018年4月间收集了5 552名广州血液中心无偿献血者的血液样本,采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测抗-HEV IgG抗体(HEV IgG)、抗-HEV IgM抗体(HEV IgM)和HEV抗原(HEV Ag),采用χ~2检验分析年龄、性别、民族、职业和ALT等因素分别与HEV IgG和IgM抗体阳性的相关性,采用多因素Logistic回归分析判辨HEV感染的独立风险因素。结果 HEV IgG、IgM和HEV Ag的阳性率分别为20.05%(1 113/5 552)、0.76%(42/5 552)和0.04%(2/5 552)。年龄和民族是HEV IgG和HEV IgM阳性率的独立风险因素:HEV阳性率随着年龄增长而增大(IgG OR=1.089, 95%CI:1.080-1.098,P<0.001; IgM OR=1.055,95%CI:1.028-1.084,P<0.001);壮族的HEV IgG和IgM阳性率(32.69%, 7.69%)高于汉族(19.89%, 0.70%),差异有统计学意义(IgG OR=2.052, 95%CI:1.103-3.819,P=0.023; IgM OR=12.029, 95%CI:4.067-35.580,P<0.001)。此外,我们还发现职业是HEV IgG阳性率的独立风险因素,学生是阳性率最低的人群。结论广州地区无偿献血者中HEV抗体阳性率较高,且在不同人群中感染情况不同,为输血传播HEV的风险评估提供基础数据。
- 尤庆柱黄杰庭许茹王敏廖峭单振刚戎霞付涌水
- 关键词：戊型肝炎病毒无偿献血者
- 海南黎族人群乙肝感染情况与风险因素分析被引量：4
- 2018年
- 目的:了解海南黎族人群乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)的感染情况并分析其相关风险因素。方法:于2014年7月至2015年10月采用随机抽样的方法选取1 595名海南白沙黎族居民作为研究对象,获得其基线资料和风险因素等流行病学资料,采用化学发光法检测血浆的乙肝核心抗体(HBc Ab),用t检验分析HBc Ab阳性组与阴性组之间年龄的差异,用单因素卡方检验和多因素Logistics回归分析年龄、性别及相关风险因素对HBc Ab的影响。结果:该人群HBc Ab的阳性率为71.8%(1 145/1 595)。男性与女性的阳性率差异无统计学意义(χ~2=0.134,P=0.715)。各年龄组之间HBV感染率的差异有统计学意义(F=540.769,P<0.001)。其中,12~17岁组的HBV感染率(11.9%)显著低于其他各年龄组,18~23岁组(28.0%)显著高于12~17岁组,但显著低于其余(>23岁)年龄组(>85%)。多因素Logistics回归分析显示饮酒和纹身均是该人群HBV感染的独立风险因素(χ2=169.833,P<0.001;χ~2=11.354,P=0.001)。结论:海南黎族人群的HBV感染率较高,年龄、饮酒和纹身是该人群感染的独立风险因素。
- 宋丹丹许茹黄杰庭王敏戎霞付涌水
- 关键词：HBV感染黎族年龄
- 寨卡病毒包膜蛋白重组人腺病毒5型载体的构建与免疫原性测定
- 2019年
- 目的以腺病毒5型载体(Ad5)构建含寨卡病毒(ZIKV)包膜蛋白(prM-E)的复制缺陷型5型重组腺病毒(rAd5)表达载体,测定prM-E在细胞中的表达及对小鼠的免疫原性。方法从ZIKV毒株Z16006(亚洲型)分离获得prM-E基因片段,以重组腺病毒AdMaxTM系统包装重组腺病毒rAd5/prM-E。选用C57BL/6小鼠,以rAd5/prM-E107、108和109 PFU三个剂量肌内注射免疫小鼠,在第3周同等剂量加强免疫一次,第5周从小鼠眼球取血并分离脾淋巴细胞。分别以ELISpot和ELISA方法测定小鼠对ZIKV prM-E的体液与细胞免疫反应。结果成功构建复制缺陷型重组腺病毒载体rAd5/prM-E,采用Western blot方法和抗ZIKV E抗体检测rAd5/prM-E感染的293A细胞表达产物,可见与E蛋白相应的56 kDa蛋白带。以ELISpot方法测定小鼠脾淋巴细胞特异性IFN-γ分泌细胞形成斑点数(SFCs),结果分别为(688.54±186.43)、(1 084.90±144.14)和(1 640.20±147.13)SFCs/106脾细胞,与病毒接种剂量呈正比关系;采用ELISA测定免疫小鼠血清中抗E抗体,其滴度(log10值)分别为(3.14±0.39)、(3.50±0.30)和(3.74±0.25),均高于对照组小鼠(0.80±0.17),差异具有统计学意义(P<0.001)。结论 rAd5/prM-E具有感染小鼠并诱导小鼠产生强烈的特异性抗体和细胞免疫反应的能力,表明prM-E具有良好的免疫原性,为ZIKV候选疫苗研制提供了可靠的免疫源。
- 马晓瑞罗升学王一琳张攀丽刘博超赵卫李婷婷黎诚耀
- 关键词：腺病毒载体免疫原性
- 流式细胞术检测NK细胞的细胞毒作用的两种方法比较被引量：5
- 2019年
- 目的:比较并优化流式细胞术检测人NK细胞体外细胞毒功能的方法。方法:采用Calcein-AM释放法或CFSE/7-AAD法分别对靶细胞进行标记,按10∶1和20∶1效靶比与7例NK细胞在37℃5%CO2培养箱共培养4 h,流式细胞术测定两种不同标记方法的靶细胞死亡率。结果:各实验组中CFSE/7-AAD法检出的靶细胞死亡率均高于Calcein-AM释放法,在低效靶比、弱细胞毒作用条件下,差异具有统计学意义。细胞毒作用较弱时,Calcein-AM释放法平均荧强度变化不显著、结果误差较大;而CFSE/7-AAD法则能更加敏感地检出靶细胞的死亡率。结论:CFSE/7-AAD法能够特异、灵敏地检出NK细胞的细胞毒活性,所获得的结果更为可靠。
- 蔡思齐邓志辉
- 关键词：流式细胞术细胞毒作用NK细胞
- 广州地区丙型肝炎病毒主要基因型E1蛋白胞外域序列分析被引量：1
- 2020年
- 目的了解广州地区丙型肝炎病毒(HCV)主要流行基因型E1蛋白胞外域氨基酸序列突变特征。方法采集2012-2018年380例广州地区HCV感染者血液标本,使用试剂盒提取HCV RNA,进行Core/E1区序列巢式PCR扩增和测序,采用Mega 7.0构建系统进化树进行基因分型,对广州地区流行的HCV主要基因型的E1胞外域部分序列进行氨基酸翻译和构建共有序列,利用生物信息软件、统计软件分析HCV E1胞外域氨基酸位点突变的分布特征、替换模式及与宿主免疫的关系。结果广州地区HCV主要流行基因型为1b和6a,分别占38.68%和41.84%;1b和6a基因型E1蛋白胞外域(aa 192-320)发生突变的氨基酸位点分别有62个(48.1%)和60个(46.5%),差异无统计学意义(χ^2=2.04,P>0.05);突变主要发生在aa 192-260区段,1b型的高度突变位点(突变率≥20%)比较分散,6a型则集中在aa231-243区段;高度突变位点均处于免疫表位区,BLOSUM评分显示大部分突变位点氨基酸替换模式为保守性替换。结论HCV基因型1b和6a蛋白E1胞外域的高度突变位点主要位于免疫表位区,大部分突变为保守性替换而且种类多样,可能与免疫压力有关。
- 杜荣松杜荣松许茹王敏黄杰庭单振刚王敏王淏廖峭付涌水
- 关键词：丙型肝炎病毒基因型突变疫苗
- 内蒙古鄂尔多斯地区献血者人群布氏菌感染情况调查被引量：1
- 2020年
- 目的通过对内蒙古额鄂尔多斯地区矿区团体和街头的2个献血者人群,进行布鲁氏菌(简称"布菌")感染筛查,评估布菌对血液安全构成的潜在风险。方法采用侧向流动免疫分析(LFIA)、虎红平板试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)对献血者血浆中的布氏菌抗体进行初筛;随访可疑阳性标本,进行布菌分离培养,并对可疑阳性血液标本再进行ELISA,Western Blot及PCR检测。结果 2018年7月21日-8月23日期间,共检测鄂尔多斯地区献血者血浆标本1255份,其中矿区团体献血者837份,街头献血者418份。结果显示,共计17份血清标本出现至少1种或2种以上方法的布菌抗体检测阳性,占总数的1.35%。经ELISA和Western Blot鉴定,其中14份血清标本为抗体阳性,占总数1.12%(14/1255),其中矿区抗体阳性率为0.96%(8/837),街头抗体阳性率1.44%(6/418);3份血清标本呈Nested PCR阳性,阳性率为0.24%(3/1255)。结论在布鲁氏菌病流行的地区,感染发生在非职业风险人群中。布鲁氏菌感染的特征是细胞内寄生和持续性菌血症。鄂尔多斯地区献血者人群的布菌抗体阳性率为1.35%,核酸阳性率为0.24%,对血液安全性提出了警示。
- 陆锦辉朱晓平王佳雯沈木生司晋鸿张玲李婷婷王文敬付涌水黎诚耀
- 关键词：布氏菌流行率献血者
