上海市组织工程研究与开发中心
- 作品数：42 被引量：193H指数：7
- 相关作者：刘伟尹烁张涤生陈凡凡张艳更多>>
- 相关机构：上海交通大学附属第六人民医院上海理工大学上海第二医科大学附属第九人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划上海市重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学一般工业技术更多>>
- 脂肪干细胞诱导成肌细胞治疗尿失禁的实验研究被引量：4
- 2009年
- 目的探索脂肪干细胞(ADSCs)诱导技术在压力性尿失禁治疗中的运用。方法采用气囊扩张阴道的方法建立压力性尿失禁动物模型,并通过尿动力学和组织学方法进行检测。采集大鼠自体的ADSCs,运用5-Aza诱导技术体外诱导成肌细胞,并通过Desmin、Myosin免疫荧光标记加以证实,回植注射于尿失禁大鼠模型膀胱颈部的后尿道肌层内,术后1、3个月分别采用尿动力学和组织学方法检测回植效果,另取未诱导的ADSCs回植作为对照组。结果回植后1、3个月,实验组最大膀胱容量、漏尿点平均压和最大膀胱平均压均显著低于对照组(P值均<0.05)。与造模后大鼠后尿道相比,实验组回植后1、3个月大鼠后尿道黏膜下肌层增厚,出现较多的粗大纵形肌束,黏膜下较多肌细胞存在;对照组回植后1、3个月大鼠后尿道黏膜下肌层稍有增厚,但不如实验组黏膜下肌层丰满。结论ADSCs具备向成肌细胞等转化的能力,运用其多向分化能力,诱导培养成肌细胞,治疗压力性尿失禁,具有创伤小、恢复快的特点。
- 傅强宋小飞廖国龙邓辰亮崔磊徐月敏
- 关键词：脂肪干细胞压力性尿失禁成肌细胞
- 人肋软骨细胞体外培养中生长代谢及功能的变化被引量：5
- 2004年
- 目的 通过检测体外培养的人肋软骨细胞老化过程中Ⅰ、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖(aggrecan)的表达变化 ,为组织工程软骨构建的种子细胞选择适宜的回植时机。方法 取体外培养的P1 ～P5人肋软骨细胞 ,通过观察细胞形态 ,细胞增殖率 ,Alcianblue法定量检测每代Aggrecan中GAG含量 ,免疫组化蛋白水平观察Ⅰ、Ⅱ型胶原表达及RT PCR从mRNA水平分析Ⅰ、Ⅱ型胶原及Aggrecan基因表达量。结果 人肋软骨细胞从第 3代起逐渐向成纤维样细胞形态转换 ;每代软骨细胞Aggrecan中GAG含量随传代次数逐渐降低 ,第 3代后处于较低水平 ;Ⅰ、Ⅱ型胶原的表达在蛋白水平及mRNA水平基本一致 ,第 2代以前Ⅱ型胶原表达较强 ,Ⅰ型胶原表达较弱 ,之后随传代Ⅱ型胶原表达减弱 ,Ⅰ型胶原表达逐渐增强 ;而Aggrecan在第 3代以前表达较高 ,从第 4代后明显下降。结论 人软骨细胞体外培养老化过程中综合细胞扩增及细胞功能因素 ,第 2代的软骨细胞 (体外扩增约 18 32 6倍 )可作为构建人组织工程软骨的种子细胞。
- 张艳柴岗刘伟崔磊曹谊林
- 关键词：肋软骨体外培养组织工程软骨MRNA水平生长代谢
- 海绵体脱细胞基质和平滑肌细胞相容性的研究
- 目的：探讨人脐动脉平滑肌细胞(umbilical artery smooth muscle cens,HUASMCs)与阴茎海绵体脱细胞基质(acellular corporal collagen matrix,ACCM...
- 宋鲁杰徐月敏傅强李超胡晓勇崔磊
- 文献传递
- 人脐带来源的平滑肌和内皮细胞复合兔海绵体脱细胞基质构建组织工程海绵体的初步探索
- 目的：探讨人脐带来源的平滑肌和内皮细胞与阴茎海绵体脱细胞基质(ACCM)复合构建组织工程海绵体的可行性。方法：以1%的 Triton-X 100与0．1%NHHO 混合液对兔阴茎海绵体进行脱细胞处理,制备 ACCM。HE...
- 宋鲁杰徐月敏傅强崔磊李超胡晓勇
- 文献传递
- 兔阴茎海绵体平滑肌细胞的纯化培养及相关鉴定分析被引量：2
- 2008年
- 背景:从以往的文献来看,阴茎海绵体平滑肌细胞的原代培养存在着制作时间长,纯度不高以及易被成纤维细胞污染等诸多缺点。目的:探索兔阴茎海绵体平滑肌细胞的纯化培养技术及纯度鉴定方法。设计、时间及地点:对照实验,于2007-10/2008-03在上海交通大学附属第六人民医院泌尿外科,上海市组织工程研究与开发中心完成。材料:成熟的雄性新西兰大白兔5只,体质量2.5～2.8kg。方法:取雄性新西兰兔新鲜的阴茎组织,利用高浓度的胶原酶消化法结合差速贴壁技术对海绵体平滑肌细胞进行纯化培养。以同期兔成纤维细胞作为对照参考。主要观察指标:以四甲基偶氮唑盐分析细胞生长特性;以平滑肌肌动蛋白、肌球蛋白、结蛋白免疫荧光鉴定海绵体平滑肌细胞;以流式细胞仪检测P2及P5代细胞α-肌动蛋白、肌球蛋白、结蛋白阳性率变化情况。结果:培养细胞四甲基偶氮唑盐显示细胞指数增长期为6d左右,随后进入平台期。α-肌动蛋白、肌球蛋白、结蛋白均呈阳性反应,同期成纤维细胞仅α-肌动蛋白显示阳性结果。第2代细胞表达α-肌动蛋白、肌球蛋白、结蛋白阳性率分别65.3%,42.2%,62.3%。经过反复多次的纯化技术至第5代时,上述指标阳性表达率分别上升为92.8%,72.7%,78.1%。结论:通过高浓度的酶消化法及差速贴壁技术可获得高纯度的阴茎海绵体平滑肌细胞,肌球蛋白、结蛋白相对于α-肌动蛋白可以成为鉴定海绵体平滑肌细胞的特异性指标。
- 冯超徐月敏朱卫东宋鲁杰崔磊
- 关键词：阴茎海绵体平滑肌细胞细胞培养
- 兔阴茎海绵体平滑肌细胞的纯化培养及相关鉴定分析
- 目的:探索兔阴茎海绵体平滑肌(CSM)细胞的纯化培养技术及纯度鉴定方法。方法:取雄性新西兰兔新鲜的阴茎组织,利用高浓度的胶原酶消化法结合差速贴壁技术对海绵体平滑肌细胞进行纯化培养。获得CSM细胞后运用MTT分析细胞生长特...
- 冯超徐月敏朱卫东宋鲁杰崔磊
- 文献传递
- 应用组织工程技术构建角膜上皮组织的研究进展
- 2006年
- 角膜上皮功能异常所导致的角膜盲,在疾病早期往往仅需进行角膜上皮移植即可治愈。组织工程技术发展迅速,应用该技术构建的组织工程化角膜上皮层可成为角膜上皮移植的供体来源。综合探讨组织工程角膜上皮构建时种子细胞、载体材料的选择和构建方法。
- 张艳青张文杰曹谊林
- 关键词：角膜上皮
- CⅡTA反义cDNA抑制Hela细胞表面MHCⅡ类抗原的表达被引量：3
- 2003年
- 目的 探讨Ⅱ类主要组织相容性复合物 (MHCⅡ )激活因子 (CⅡTA)的反义cDNA对细胞表面MHCⅡ类分子表达的抑制。方法 克隆 3条CⅡTA反义片段 (arⅡ 1、arⅡ 2、arⅡ 3) ,并稳定转染Hela细胞。免疫组化、流式细胞术检测细胞核内CⅡTA蛋白及其调控的经典MHCⅡ (HLA DR、 DP、 DQ)类抗原表达 ,RT PCR法检测CⅡTA、经典MHCⅡ及恒定链的mRNA水平。结果 三种反义片段中arⅡ 2效果最佳。在重组人IFN γ诱导下 ,arⅡ 2阳性Hela细胞与正义链组比较 ,CⅡTA蛋白抑制率达87.2 3% ,HLA DR、 DP及 DQ抗原诱导型表达分别降低了 79.2 1%、90 .31%及 4 8.30 % ;同时CⅡTA、经典的MHCⅡ及恒定链的mRNA含量明显减少 (P <0 .0 5 )。结论 CⅡTA反义片段抑制了自身mRNA含量 ,从而阻止其调控的MHCⅡ分子的表达 ,为预防移植物抗宿主病提供了一种新思路。
- 郭荣邹萍范华骅崔磊曹谊林郑滨高跞高峰陆华中
- 人体骨髓基质干细胞冷冻干燥的探索性实验被引量：7
- 2005年
- 人体骨髓基质干细胞已成为组织工程、细胞移植和基因治疗等领域的重要研究对象 ,目前对它已有低温保存的研究 ,而通过冷冻干燥的方法对其进行保存国内外未见报导。实验尝试用冻干的方法来保存骨髓基质干细胞。文中选取海藻糖、PVP、HES等作保护剂 ,应用差示扫描量热仪 (DSC)测量其结晶温度和玻璃化转变温度 ;随后对加入保护剂的细胞溶液进行冻干实验 ,并应用流式细胞仪对冻干样品复水后的细胞活性进行了测定 ,其中 30 %PVP +2 0 %海藻糖对细胞的保护效果较好 ,细胞成活率达到 16 .4 0 %。
- 杨鹏飞程启康王欣华泽钊陈凡凡舒朝峰崔磊曹谊林
- 关键词：骨髓基质干细胞冻干HES细胞移植细胞活性
- 人骨髓基质干细胞体外诱导和鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的建立人自体骨髓基质干细胞(human menchymal stem cells,hMSCs)体外分离、鉴定体系,建立经诱导表达成骨、软骨、脂肪细胞表型的体外培养体系,探讨作为骨组织工程种子细胞的可能性,为组织工程技术应用打下基础。方法抽取患者骨髓5ml,以密度梯度法分离hMSCs,使用流式细胞仪鉴定细胞表型;应用免疫组化和分子生物学技术,对hMSCs进行成骨、软骨、脂肪细胞的诱导培养和表型鉴定。结果第2代hMSCs阳性细胞表达率CD105(78±6)%,CD166(43±7)%,CD29(69±12)%;hMSCs成骨诱导培养第3代平均扩增(163.4±13.4)倍,形成钙结节,骨细胞转录因子、骨钙素、骨桥蛋白和I型胶原免疫荧光阳性,RT-PCR证实有I型胶原、骨钙素、骨桥蛋白和骨结合素mRNA表达,对照组阴性;成软骨细胞诱导培养后II型胶原、SOX9(SRY-type HMGbox9,是在哺乳动物性别决定和软骨生成中起着关键调控作用的一个基因)。免疫荧光阳性,RT-PCR证实II型胶原、软骨聚集蛋白聚糖mRNA表达,对照组阴性;成脂肪细胞诱导培养后,油红-O染色阳性,RT-PCR证实PPAR2 mRNA的表达,对照组阴性。结论通过密度梯度法可获得较高纯度hMSCs,经体外培养能保持多项分化潜能,体外诱导培养第3代仍可表达各种细胞表型,能够满足骨组织工程临床应用对种子细胞质和量的需要。
- 石润杰柴岗崔磊
- 关键词：细胞培养成骨细胞软骨细胞脂细胞
