上海市结核重点实验室
- 作品数：10 被引量：47H指数：4
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- 两种方法诊断梅花鹿结核病
- 2007年
- 钟志军彭广能白永平胡忠义
- 关键词：鹿结核病梅花抗生素治疗病原分离细菌培养
- 结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6融合基因的表达及其多克隆抗体的制备被引量：13
- 2006年
- 以结核分枝杆菌标准株H37Rv的基因组DNA为模板,经重叠PCR扩增获得CFP10-ESAT-6融合基因片段,克隆于pET21a表达载体中,获得了重组质粒pET21a-CFP10-ESAT-6,将其转化大肠杆菌BL21细胞,经IPTG诱导表达,得到了25 ku的目的蛋白。表达产物经纯化和定量分析后免疫新西兰大白兔,收集兔血清进行抗体ELISA检测。结果显示,成功构建了CFP10-ESAT-6融合基因的原核表达质粒,获得了CFP10-ESAT-6融合蛋白,以此蛋白免疫动物可产生高效价的抗体。
- 唐宇龙刘湘新杨华丁元生胡忠义
- 关键词：结核分枝杆菌多克隆抗体
- 检测牛分枝杆菌的噬菌体生物扩增法的建立及初步应用
- 建立噬菌体生物扩增法检测牛分枝杆菌的检测技术，将建立的方法用于22株牛分枝杆菌临床分离株及20种常见分枝杆菌及5种非分枝杆菌，同时对203头疑患牛结核病奶牛的奶样进行检测，其结果与皮内变态试验、涂片法、罗氏培养进行比较。...
- 钟志军秦莲花杨华彭广能唐明霞白永平石梅马晓平胡忠义王洁
- 关键词：分枝杆菌噬菌体牛乳噬菌体生物扩增法
- 文献传递
- 互花米草内生真菌Fusarium sp.F4中的活性代谢物被引量：13
- 2007年
- 目的:研究海草Spartina alterniflora中内生真菌Fusarium sp.F4中的活性代谢物。方法:经硅胶、Sephadex LH-20反复柱层析分离纯化并通过波谱分析鉴定了6个化合物。结果:6个化合物分别被鉴定为麦角甾醇(Ⅰ)、过氧化麦角甾醇(Ⅱ)、白僵菌素(Ⅲ),T-2毒素(Ⅳ),ilicicolin H(Ⅴ),alcaligin(Ⅵ)。结论:化合物Ⅴ、Ⅵ为首次从该属真菌中发现。全归属了化合物V的氢谱数据。药理实验表明化合物III对结核分枝杆菌毒株(Mycorbacterium tuberculosis H37RV)有显著抑制。
- 邵志宇冯永红邓云霞徐德强洪枫
- 关键词：FUSARIUM代谢物药理活性
- 检测牛分枝杆菌的噬菌体生物扩增法的建立及初步应用
- 2007年
- 建立噬菌体生物扩增法（PhaB）检测牛分枝杆菌,将建立的方法用于22株牛分枝杆菌临床分离株及20种常见非结核分枝杆菌（NTM）及5种非分枝杆菌,同时对203头疑患牛结核病奶牛的奶样进行检测,其结果与皮内变态试验、涂片法、罗氏培养进行比较。结果表明,噬菌体工作浓度为1×10^9 PFU/mL、37℃感染2 h为最佳检测条件;杀毒剂浓度为100 mmol/L,室温作用10 min即可完全杀灭受试噬菌体;加热灭活的细菌和指示细菌不被噬菌体感染;牛分枝杆菌、耻垢分枝杆菌和22株牛分枝杆菌临床分离株检测结果均为阳性,16种NTM和5种非分枝杆菌为阴性,4种NTM（偶然、胞内、金色、草分枝杆菌）在高浓度时（〉10^5CFU/mL）检测结果为阳性;该法可检测出60-120 CFU/mL牛分枝杆菌;批内、批间变异系数均小于15%,重复性良好;203头检测奶牛中,PhaB法、涂片法、皮内变态试验和罗氏培养结果分别有14头（6.9%）、17头（8.4%）、21头（10.3%）和12头（6.0%）为阳性,PhaB法与其他3种方法比较,阳性准确性、特异性都在96%以上,敏感性在71%-100%。该法检测牛分枝杆菌具有快速、简便、灵敏、特异性高等特点。
- 钟志军彭广能唐明霞白永平石梅马晓平胡忠义王洁秦莲花杨华
- 关键词：分枝杆菌噬菌体牛分枝杆菌牛乳
- 噬菌体生物扩增法检测犬结核病
- 2007年
- 2006年4月12日．四川省崇州市张某将两只贵宾犬（价值80余万元）送四川农业大学兽医院就诊。病犬在成都某宠物医院按照肺炎医治16天．但效果不佳，且症状加剧。在我院经实验室检测．最后确诊为犬结核病。其中一条犬因病情严重．来我院后第3天死亡。另一疑患结核病犬采取治疗．40天后出院．3个月后随访基本恢复健康。现报告如下．
- 钟志军彭广能白永平唐明霞石梅胡忠义
- 关键词：结核病病犬噬菌体
- 检测结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6分泌蛋白双抗体夹心ELISA的建立被引量：2
- 2008年
- 用重组蛋白CFP10-ESAT-6免疫新西兰大白兔,通过ELISA方法检测抗体效价水平;高效价抗体用DEAE-32阴离子交换柱纯化后,一部分抗体为包被所用,另一部分抗体用辣根过氧化物酶标记后,作为检测用,建立双抗体夹心法,进行了初步鉴定,确定该方法的可行性。结果表明:抗CFP10-ESAT-6多克隆抗体的效价在1∶16000稀释后D450值基本都达到1.0左右,在纯化、酶标记后,分别以1∶5000为包被工作浓度,1∶3000为酶标工作浓度时,能较高特异性检测结核杆菌培养上清分泌的CFP10-ESAT-6抗原。
- 唐宇龙刘湘新杨华柳彬胡忠义
- 关键词：结核分枝杆菌ELISA
- SLC11A1基因多态性在新发和复发肺结核患者中的分布被引量：5
- 2008年
- 目的探讨SLC11A1基因多态性在中国汉族人群新发和复发肺结核患者中的分布。方法在中国汉族人群中,选择新发肺结核患者、复发肺结核患者和健康对照者各30例,应用SNaPshot SNP分型技术检测以上人群SLC11A1基因多态性位点INT4、D543N和3′UTR的基因型,采用Logistic回归分析和2χ检验进行统计学处理。结果病例组3′UTR位点TGTG+/del基因型频率显著高于对照组(P=0.038),病例组与对照组INT4和D543N位点各基因型频率无显著性差异,病例组D543N和3′UTR位点联合分析显示GG/+del及GA/+del基因型频率均显著高于对照组(P=0.048和P=0.034)。新发肺结核患者与复发肺结核患者3′UTR和D543N/3′UTR基因型频率无显著性差异。结论SLC11A1基因3′UTR位点多态性和D543N/3′UTR单倍体型可能是中国汉族人群肺结核发病的易感因素,但与肺结核复发的关系有待进一步研究。
- 刘轾彬肖和平沙巍郑瑞娟刘一典胡忠义
- 关键词：多态性结核复发
- 三种结核分枝杆菌分泌蛋白的抗体制备及其在抗原检测中的应用被引量：11
- 2007年
- 目的制备结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6、MPT84和MPT63-MPT70重组蛋白抗体,探讨其在检测结核抗原中的应用价值。方法应用重组蛋白CFP10-ESAT-6、MPT64和MPT63- MPT70免疫血清,制备包被抗体和标记抗体,建立检测3种蛋白的双抗体夹心法,并将其用于17种分枝杆菌培养上清液和341份临床血清标本的检测。结果CFP10-ESAT-6的最低检出浓度为25 ng/mL,MPT64和MPT63-MPT70均为50 ng/mL。CFP10-ESAT-6检测17种分枝杆菌培养上清液,只有结核分枝杆菌为阳性;而MPT64和MPT63-MPT70检测除结核分枝杆菌阳性外,还各有5种非结核分枝杆菌培养上清液为阳性结果。CFP10-ESAT6、MPT64和MPT63-MPT70检测165例临床诊断的肺结核患者血清标本阳性率分别为33.9%、41.2%和47.9%;检测112例非结核患者血清标本的假阳性率分别为1.8%、7.1%和10.7%;检测64例健康对照的假阳性率分别为0、3.1%和7.8%。结论CFP10-ESAT-6、MPT64和MPT63-MPT70重组蛋白制备的抗体检测血清标本结核抗原的阳性率均不高,但特异性较好。
- 唐宇龙杨华刘湘新柳斌秦莲花郑瑞娟丁元生胡忠义
- 关键词：分枝杆菌结核重组蛋白质类结核分枝杆菌
- 结核分枝杆菌分泌蛋白MPT53基因的克隆、表达和纯化被引量：3
- 2007年
- 目的构建结核杆菌分泌蛋白MPT53原核表达载体并进行表达和纯化。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组DNA为模板扩增MPT53基因,产物经纯化回收后与载体pMD-T连接转化,酶切鉴定,克隆到pET32a原核表达载体,测序鉴定插入序列完全正确者转化大肠埃希菌BL21,诱导表达MPT53融合蛋白,亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE电泳鉴定。结果成功构建PET32a-MPT53重组质粒,转化BL21后经IPGT诱导成功表达分子质量单位为36ku的MPT53蛋白,与理论值相符。结论成功表达结核分枝杆菌MPT53蛋白,为其应用打下了基础。
- 唐宇龙杨华刘湘新秦莲花柳彬胡忠义
- 关键词：结核分枝杆菌克隆
