上海第二医科大学发育生物学研究中心
- 作品数：13 被引量：89H指数：6
- 相关作者：杨庆章徐晓军卢勇刘爱莲褚建新更多>>
- 相关机构：苏州大学生命科学学院华中农业大学动物科学技术学院南京农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：上海市科技兴农重点攻关项目国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 影响猕猴体外受精与胚胎移植成功率的因素分析被引量：1
- 2004年
- 将电刺激采集的精液用两种方法优选后进行精子获能处理,然后与超排获得的成熟卵母细胞进行体外受精。受精卵用不同培养体系进行体外发育培养,并对发育到8细胞的11枚胚胎进行冷冻保存,将其中3枚胚胎解冻后移植给一只受体猕猴。结果表明: 上浮法和percoll法都是有效的精子优选法,对受精率的影响差异不显著; 咖啡因和dbcAMP在精子体外获能过程中缺一不可; 理想的受精密度应在2×105精子/ml左右; 在超促排卵后采集的卵母细胞进一步成熟过程中,添加血清和激素会取得更好的结果; 胚胎的发育过程中,血清和氨基酸都是必需的。冷冻保存后的解冻存活率虽然很高,但可能受受体猕猴数量或其他多种因素的影响,移植后并未受孕。
- 熊成培陈学进陈永昌张琼桂建峰陈丽华
- 关键词：猕猴体外受精胚胎移植受精率精子获能
- 不同激活方法对小鼠卵母细胞孤雌激活的实验观察被引量：9
- 2005年
- 目的 建立合适的小鼠卵母细胞孤雌激活方法。方法 取不同卵龄小鼠卵母细胞 ,运用不同浓度的氯化锶和不同强度的电脉冲对其进行活化 ,观察小鼠卵母细胞激活率和体外发育状况。结果 ① 14、16和 18h卵龄组卵母细胞经 10mmol LSrCl2 处理后 ,三组的激活率随卵龄的增长而提高 ,分别为 2 1 1%、4 1 8%和 73 7% ,组间差异有统计学意义 (P <0 0 5 ) ;卵母细胞离体后在激活前体外培养 3h也能提高其激活率 ,但当卵龄达到一定时 (18h) ,体外培养激活率不再提高。② 5 0、10 0、15 0mmol L三种浓度的SrCl2 均能有效地激活小鼠卵母细胞 ,激活率分别为 5 8 5 %、6 8 95和 70 9% ,与对照组和 1 6mmol L组相比差异有统计学意义 (P <0 0 5 )。③卵母细胞的激活率随处理时间的延长而提高 ,30、6 0、12 0、2 4 0minSrCl2 处理时间的激活率分别为 4 4 9%、5 6 1%、6 8 9%、77 0 % ,相隔两组之间差异有统计学意义 (P <0 0 5 )。④ 1 5kV cm ,16 0 μs和 1 0kV cm ,32 0 μs脉冲刺激下的卵母细胞激活率显著高于 1 8kv cm ,90 μs脉冲刺激组 (5 8 5 %vs2 7 1%、6 9 1%vs2 7 1% ,P <0 0 5 ) ,前两组之间差异无统计学意义 (P >0 0 5 )。结论 小鼠卵母细胞孤雌激活率与卵龄和激活方案有关 ;氯化锶浓度。
- 叶荣陈学进杨利国
- 关键词：孤雌激活活率氯化锶体外培养卵母细胞
- 猕猴精子优选及体外获能的研究
- 2005年
- 选择活率高的精子并进行体外获能是开展猕猴体外受精研究的必要程序 ,是研究猕猴受精生物学的重要手段。本实验采用上浮法和Percoll梯度离心法对猕猴精液进行了优选 ,并对处理后的精子形态正常率、精子活率、密度及受精率作了比较 ,发现二者差异不显著 ;用dbcAMP和咖啡因使精子获能 ,发现只有两种获能剂同时存在才能使猕猴精子获能并使卵母细胞受精。结论为 :上浮法和Percoll法都是有效的精子优选法 ,对受精率的影响差异不显著 ;
- 陈永昌陈学进
- 关键词：猕猴精子获能猴体精子体外获能
- 再生障碍性贫血患儿骨髓间充质干细胞的生物学特点被引量：20
- 2005年
- 为了观察和比较再生障碍性贫血患儿、正常同年龄段儿童和胎儿3种来源的骨髓间充质干细胞(MSC)的体外增殖能力及表面标志的表达,利用体外培养的方法从再生障碍性贫血患儿的骨髓分离培养MSC,以胎儿和儿童的MSC作为对照;通过对细胞形态和生长特性的观察,并用流式细胞术和免疫细胞化学方法进行检测以比较三者之间的异同。结果表明:从再生障碍性贫血患儿骨髓中分离、培养、扩增得到了MSC,与胎儿和正常儿童骨髓来源的MSC在细胞形态、流式表达模式和免疫细胞化学表达方面基本一致,但再生障碍性贫血患儿骨髓MSC的体外扩增能力有别于胎儿及正常儿童。虽然在早期培养时再生障碍性贫血患儿的骨髓MSC具有与正常儿童相似的扩增速度,但当群体倍增值(populationdoubling,PD)达20之后基本不再有增殖能力了,而正常儿童和胎儿来源的MSC却可稳定扩增到30PD。结论:再生障碍性贫血患儿骨髓MSC在表面抗原标志方面与对照组相比无明显异常,但体外增殖能力弱于对照组。
- 陈静王茜施英唐周晓飞徐晓军刘爱莲
- 关键词：再生障碍性贫血胎儿骨髓间充质干细胞
- 牛成纤维细胞的分离与体外培养被引量：10
- 2005年
- 研究了牛胎儿和成年牛皮肤组织成纤维细胞的分离、培养、纯化方法和生长特征。通过组织块贴壁培养和分离单细胞接种培养均能获得原代牛皮肤细胞。用2.5 g/L胰蛋白酶+1mmol/L EDTA和5 g/L胶原酶I联合消化牛皮肤组织较2.5 g/L胰蛋白酶+1 mmol/L EDTA消化,得到更多的单个细胞,两者之间差异极显著(P<0.01),但其死细胞比率却有较大升高;2.5 g/L胰蛋白酶+1 mmol/L EDTA消化牛胎儿组织得到的单细胞数显著高于皮肤组织消化后得到的细胞数(P<0.01),死细胞比率也高于同种酶消化的皮肤组织。分离纯化的胎儿和皮肤成纤维细胞的生长曲线都正常且相似。2.5 g/L胰蛋白酶+1 mmol/L EDTA消化贴壁细胞后死细胞率明显高于用0.5g/L胰蛋白酶+0.53 mmol/L EDTA消化的细胞(P<0.05);培养24 h后细胞贴壁率前者要明显低于后者(P<0.05)。用0.5 g/L胰蛋白酶轻度消化混杂生长的成纤维细胞和上皮样细胞,经过反复贴壁传代2～3代,可得到较纯的成纤维细胞。
- 叶荣陈学进杨利国
- 关键词：皮肤组织胰蛋白酶体外培养轻度成年牛接种培养
- 牛体外成熟卵母细胞孤雌激活的研究被引量：7
- 2004年
- 比较 3种化学激活方法和 4种电化学激活方法对牛体外成熟卵母细胞进行孤雌激活的效果。结果显示 ,单独用离子霉素和用离子霉素 + 6 DMAP +CB或 +CHX +CB激活牛卵母细胞 ,两者之间差异极显著 (P <0 0 1) ;用不同强度电脉冲 + 6 DMAP +CB激活牛卵母细胞 ,各组间卵裂率差异均不显著 (P >0 0 5 )。结果表明 ,虽然电化学激活方法最高可获得 82 9%的卵裂率 ,比化学激活方法中最好的高 4 8% ,但后者不需电融合仪 ,操作相对简便。
- 叶荣陈学进郭宪杨利国
- 关键词：体外成熟卵母细胞孤雌激活电脉冲
- 猕猴-兔重构胚的线粒体定量分析
- 在同种和近缘异种体细胞克隆中,线粒体主要来源于受体卵母细胞。然而在远缘异种克隆中,由于核供体和胞质受体来源于两个遗传上关系较远的种或属,两种不同来源的线粒体DNA(mtDNA)在重构胚早期发育中的动态变化还不清楚。实时荧...
- 杨彩侠寇朝辉王凯姜岩毛文伟孙青原盛慧珍陈大元
- 文献传递
- 体细胞起源的人胚胎干细胞被引量：6
- 2003年
- 根据治疗性克隆假设 ,可以通过体细胞核移植技术获得与病人具同样基因型的细胞或组织 ,这样起源的细胞或组织植回病人将不会引起免疫排斥反应。本研究将 5岁、42岁、52岁和60岁 4个不同年龄的人体细胞核植入去核的兔卵母细胞中重新启动 ,发育至囊胚 ,并分离人胚胎干细胞。研究结果提示 ,年龄不影响体细胞被重新启动的效率。经过核型分析 ,同源染色体分析 ,原位杂交 ,PCR和免疫组化染色等多种鉴定 ,ntES细胞具有人染色体。ntES细胞可以长期增殖并保持不分化状态 ,也可以形成类胚体并分化出包括神经和肌肉在内的多种细胞类型。由类胚体诱导生成的混合细胞群体表达所有三个胚层 (外、中、内胚层 )细胞类型标记 ,说明ntES细胞具有分化成所有三个胚层的潜力。因此 。
- 陈莹何志旭刘爱莲王凯毛文伟褚建新卢勇方贞付施英唐杨庆章陈大元王敏康李劲松黄绍良孔祥银史耀洲王志强夏家辉龙志高薛志刚丁文祥盛慧珍
- 关键词：体细胞人胚胎干细胞核移植体细胞核移植治疗性克隆
- 哺乳动物早期胚胎体外发育阻滞的产生与克服被引量：8
- 2004年
- 哺乳动物早期胚胎发育阻滞是体外培养条件下普遍存在的现象。文中就离体情况下由于生长环境的变化使早期胚胎所遭受到外界因素的影响进行了探析。综合国内外研究报道 ,提出通过改善培养条件和利用体细胞共培养 ,克服早期胚胎的体外发育阻滞。旨在为哺乳动物胚胎的体外培养提供一些参考。
- 叶荣陈学进杨利国
- 关键词：哺乳动物早期胚胎体外发育发育阻滞氧自由基
- 基因打靶技术及其发展和应用被引量：6
- 2005年
- 通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定位点的基因打靶技术,已经成为哺乳动物遗传学领域的重要工具。本文拟针对胚胎干细胞和体细胞的基因打靶的原理、技术路线及基因打靶技术的发展和应用作一综述。
- 窦薇
- 关键词：基因打靶同源重组胚胎干细胞基因打靶技术动物遗传学靶细胞
