内蒙古自治区自然科学基金(200408020908)
- 作品数：8 被引量：68H指数：5
- 相关作者：刘小雷刘小玲张勇魏青孙建军更多>>
- 相关机构：内蒙古医学院内蒙古自治区医院内蒙古医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：教育部“春晖计划”内蒙古自治区自然科学基金内蒙古自治区科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 广枣总黄酮体外抗CVB_3病毒活性被引量：14
- 2007年
- 目的:研究广枣总黄酮(TFFC)体外抗柯萨奇B组3型病毒(CVB3)作用及其作用机制,探究其作用靶点,为TFFC进一步开发利用奠定基础。方法:采用差速贴壁法培养原代乳鼠心肌细胞,镜下观察心肌细胞搏动次数,使用α-actin免疫组化法鉴定培养心肌细胞的纯度;在细胞水平测定阳性药盐酸胍以及TFFC的药物毒性;以CVB3感染心肌细胞建立病毒性心肌炎细胞模型;MTT染色分析TFFC对病毒感染后的Hela细胞及心肌细胞是否有保护作用;病毒繁殖抑制实验比较不同分组间TCID50的差别以验证TFFC在Hela细胞及心肌细胞上的抗病毒活性;测定各实验组心肌细胞培养上清液中心肌酶LDH、CK-MB的变化;测定各实验组心肌细胞培养上清液中肿瘤坏死因子TNF-α含量的变化;运用逆转录聚合酶链式反应测定心肌细胞内病毒相关基因的表达。结果:经过在Hela细胞及心肌细胞水平的初筛,确定TFFC具有保护细胞免受CVB3病毒侵袭的作用。病毒繁殖抑制实验显示TFFC的高、中剂量组TCID50与病毒对照组TCID50相差一个以上对数值;TFFC能使心肌酶(LDH、CK-MB)的释放较病毒组显著降低(P<0.05),还可抑制被病毒感染的心肌细胞TNF-α的分泌;同时,TFFC还可明显抑制CVB3相关基因c-Myc、TNF-α、Fas的表达。结论:通过建立病毒性心肌炎细胞模型,证实TFFC在体外细胞培养物上具有抗CVB3病毒活性作用。
- 刘小玲梁彬张勇刘小雷
- 关键词：广枣总黄酮心肌酶
- 黄芪多糖体外抗CVB_3病毒活性被引量：10
- 2011年
- 目的研究黄芪多糖(ASP)对柯萨奇B3病毒(CVB3)所致的VERO和乳鼠原代心肌细胞病变抑制作用及病毒繁殖抑制反应,并测定其对乳鼠原代心肌细胞培养上清液中乳酸脱氢酶和血清肌酸磷酸激酶(LDH、CK-MB)活性的影响。方法在VERO细胞、大鼠原代心肌细胞中加入不同稀释度ASP后,感染CVB3病毒,观察细胞病变,MTT染色比较各组间活细胞数的变化,病毒繁殖抑制实验比较半数组织感染量(TCID50)的差别;紫外分光光度法测定心肌细胞培养上清液LDH和CK-MB活性。结果 ASP在上述实验中可降低CVB3病毒造成的细胞凋亡(P<0.01)及抑制病毒的繁殖对心肌细胞释放心肌酶也有一定的抑制作用(P<0.05)。结论 ASP对CVB3病毒感染的VERO和乳鼠心肌细胞具有保护作用。在一定浓度下可降低心肌酶的释放,其作用机制尚需做进一步实验来探讨。
- 郑兰兵魏青刘小玲刘小雷
- 关键词：黄芪多糖细胞病变LDHCK-MB
- 黄芪三萜皂苷对CVB3病毒所致细胞凋亡的保护作用被引量：2
- 2012年
- 目的应用分子生物学技术探讨黄芪三萜皂苷(total extract of astragalus,TEA)对柯萨奇B组3型病毒(CVB3)致细胞凋亡的保护作用。方法利用CVB3感染Vero细胞建立细胞凋亡模型并使用TEA对模型进行治疗,检测DNA Ladder以了解凋亡细胞DNA断裂情况;通过TUNNEL标记法、Annexin-V/PI染色、Hoechst33258染色观察细胞凋亡程度,比较各组间细胞凋亡的差异。结果 CVB3感染后,Vero细胞DNA的紫外成像呈现阶梯状条带,TEA组可观察到DNA断裂程度降低;TUNNEL检测可看到凋亡存在,病毒组显色较深,细胞凋亡程度较TEA组严重;Annexin-V/PI染色可见病毒组Vero细胞膜呈绿色荧光,细胞核显红色,核凝聚及裂解,并有凋亡小体存在,TEA组细胞状态改善;Hoechst33258染色结果表明,病毒组Vero细胞核显蓝色荧光,可看到凋亡中期核染色质凝聚、边缘化及晚期凋亡小体的典型变化。TEA组细胞状态改善,凋亡细胞数目减少。正常细胞对照组的细胞贴壁状态良好。流式细胞仪检测结果表明,黄芪三萜皂苷能够显著的降低试验组Vero细胞的凋亡率。结论 TEA对CVB3病毒感染的Vero细胞具有一定的保护作用,抑制细胞凋亡,其作用机制尚需做进一步探讨。
- 魏青刘小玲郑兰兵刘小雷刘天龙孙建军
- 关键词：CVB3细胞凋亡
- 一种高通量免疫检测抗生素残留方法的建立被引量：9
- 2012年
- 目的将表面具有羧基的聚苯乙烯微球运用于悬液芯片系统中，建立一种高通量检测牛奶中卡那霉素和氯霉素残留的方法。方法将合成的卡那霉素和氯霉素全抗原包被在聚苯乙烯微球表面构成捕获抗原，并对整个包被过程进行优化。利用捕获抗原、单克隆抗体及检测物构建间接竞争免疫检测体系，并用荧光标记的二抗作为荧光探针标记与捕获抗原结合的单克隆抗体得到悬液芯片系统的检测物。由于不同型号的微球被悬液芯片系统的激光激发后所呈现的侧向散射荧光（side scatter，ssc）和前向散射荧光（forward scatter，FSC）不同，所以悬液芯片系统能够将不同的微球进行区分以达到分辨不同检测物的目的，悬液芯片系统上的另外一套检测系统能够对每个微球表面荧光探针的荧光强度进行检测以实现定量分析，双检测系统同时工作实现了高通量检测的目的。结果微球的包被优化实验结果表明，包被100gL微球需要卡那霉素和氯霉素全抗原的最佳量分别是12μg和17μg。单克隆抗体的最佳稀释倍数分别是800倍和1600倍；在牛奶基质中，该方法对卡那霉素和氯霉素的检测限分别是0．79ng／mL和52．01ng／mL，半数抑制浓度（IC50）分别为36．65ng／mL和626．03ng／mL，检测范围分别为9-900ng／mL和90-900ng／mL；抗体特异性实验表明两种单克隆抗体的特异性良好。该方法在牛奶基质中的标准添加回收率为80％～110％，满足检测方法建立的要求。结论利用基于微球技术的悬液芯片系统建立了一种高通量检测牛奶中抗生素残留的方法，该研究为下一步更多种抗生素残留的同步检测提供了数据依据。
- 刘爽王伟刘小雷
- 关键词：卡那霉素氯霉素免疫检测
- 细胞因子对细胞凋亡的影响被引量：1
- 2008年
- 郑兰兵于东升刘小雷
- 关键词：细胞因子细胞凋亡
- 苦参系列生物碱体外抗CVB_3病毒活性被引量：22
- 2006年
- 目的研究苦参系列生物碱(Sophora flavescens alkaloids)对柯萨奇B3病毒(CVB3)所致的Vero细胞和大鼠原代心肌细胞病变抑制作用、病毒繁殖抑制反应,并测定其对大鼠原代心肌细胞培养上清液中心肌酶(LDH、CK MB)活性的影响。方法在Vero细胞、大鼠原代心肌细胞中加入不同稀释度苦参系列生物碱后,感染CVB3病毒,观察细胞病变,MTT染色比较各组间活细胞数的变化,病毒繁殖抑制实验比较半数组织感染量(TCID50)的差别;紫外分光光度法测定心肌细胞培养液上清中LDH和CK MB活性。结果槐果碱、苦参碱、槐啶碱在Vero细胞和原代乳鼠心肌细胞试验中可有效抑制CVB3病毒引起的细胞病变(P<0.05,P<0.01);槐果碱对病毒的繁殖有抑制作用(对数值升高一个单位),并可降低心肌细胞释放心肌酶(P<0.05,P<0.01)。结论槐果碱、苦参碱、槐啶碱对CVB3病毒感染的Vero细胞和原代乳鼠心肌细胞具有一定保护作用。对细胞病变(CPE)的抑制作用强弱顺序为:槐果碱>苦参碱>槐定碱>氧化槐果碱、苦豆碱、槐胺碱、槐醇碱。槐果碱对CVB3病毒的繁殖有抑制作用,在一定浓度下可降低心肌酶的释放,其作用机制尚需做进一步探讨。
- 刘晓玲张勇刘小雷
- 关键词：病毒性心肌炎
- 红景天多糖体外抗CVB3病毒活性被引量：18
- 2009年
- 目的:应用细胞生物学技术探讨红景天多糖(RSP)体外抗柯萨奇B组3型病毒(CVB3)活性和对心肌细胞保护作用机制,探究其作用环节(药物靶点),为RSP的开发利用奠定基础。方法:VERO细胞感染CVB3病毒观察细胞病变;CVB3病毒感染乳鼠心肌细胞建立病毒性心肌炎细胞模型,分析RSP对VERO和心肌细胞的保护作用;病毒繁殖抑制实验验证RSP在VERO细胞及心肌细胞上的抗病毒活性;紫外分光光度法测定乳鼠心肌细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK-MB)的活性;流式细胞术和RT-PCR检测比较各组间细胞凋亡的差异。结果:RSP在VERO细胞和心肌细胞试验中可有效抑制CVB3病毒引起的细胞病变(P<0.05,P<0.01);且对病毒的繁殖有抑制作用(对数值升高一个以上数量级),降低心肌酶(LDH、CK-MB)的释放,对细胞凋亡有抑制作用(P<0.01)。结论:RSP对CVB3病毒感染的VERO细胞和原代乳鼠心肌细胞具有一定的保护作用。对CVB3病毒的繁殖有抑制作用,在一定浓度下可降低心肌酶的释放并抑制细胞凋亡,其作用机制尚需做进一步试验来探讨。
- 张勇刘小玲刘小雷
- 关键词：红景天多糖柯萨奇B组3型病毒乳酸脱氢酶磷酸肌酸激酶
- 基于悬液芯片系统的新城疫病毒强、弱毒高通量检测方法的建立被引量：1
- 2013年
- 目的:利用悬液芯片系统建立一种高通量检测新城疫病毒强、弱毒的方法并将该方法的灵敏度与传统的酶联免疫反应(ELISA)进行比较。方法:将F48E9和LaSota单克隆抗体通过共价偶联的方式连接到聚苯乙烯微球的表面构成捕获抗体,利用捕获抗体、检测物、生物素化的多抗及链霉亲和素化的藻红蛋白建立双抗夹心的免疫检测模式。检测物作为抗原与捕获抗体结合后与生物素化的新城疫多抗进行反应,反应完成后,用链霉亲和素标记的荧光探针对反应产物进行标记得到悬液芯片系统的检测物。结果:微球包被实验结果表明,包被100μL微球所需F48E9和LaSota单克隆抗体的最佳量分别是14.85μg和17.65μg;新城疫病毒多抗的最佳稀释倍数为400倍;悬液芯片检测方法检测NDV强毒的灵敏度为1:160,弱毒的灵敏度为1:320;抗体特异性实验表明,该方法所使用的两种捕获抗体的体异性良好。该方法与传统的ELISA在相同灵敏度的前提下,其在检测时间、检测步骤及高通量方面优于ELISA。结论:基于悬液芯片系统的新城疫强、弱毒高通量检测方法的建立对于该病毒的快速诊断具有重要的意义。
- 孙建军刘天龙郭浩刘小雷
- 关键词：新城疫病毒
