国家自然科学基金(81000979)
- 作品数：4 被引量：7H指数：1
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- H2B-RFP融合蛋白在观测肿瘤活细胞有丝分裂中的应用被引量：1
- 2011年
- 目的:肿瘤细胞染色体分裂异常是导致肿瘤基因组不稳定的根本原因,这种不稳定性促进了肿瘤的进展和恶化。本文旨在探讨H2B-RFP融合蛋白能够更好地观测肿瘤活细胞有丝分裂过程。方法:将携带H2B-RFP融合基因的质粒瞬时转染人宫颈癌细胞系Hela并利用抗性药物筛选得到阳性细胞克隆,利用激光共聚焦显微镜活细胞培养系统记录稳定筛选Hela细胞的细胞周期。结果:得到稳定表达H2B-RFP的Hela细胞且其与亲本Hela细胞相比对细胞周期的运行没有影响,并且可以展示Hela细胞有丝分裂的进程。结论:H2B-RFP融合蛋白可以非常敏感地显示肿瘤细胞的染色体并跟踪活体状态下肿瘤细胞有丝分裂过程。
- 陈平波墨青青王蓓蓓翁丹卉吴鹏陈刚
- 关键词：红色荧光蛋白有丝分裂
- 乳腺癌相关成纤维细胞的分离培养及鉴定
- 2011年
- 目的:分离培养和鉴定乳腺癌相关成纤维细胞及其与之配对的正常乳腺成纤维细胞,并初步探讨两者生物学性状的差异。方法:用胶原酶消化法获得原代乳腺癌相关成纤维细胞及其与之配对的正常乳腺成纤维细胞,通过显微镜观察细胞形态,免疫荧光观测上皮细胞和成纤维细胞标记,MTT及Western检测两者之间生物学性状差异。结果:分离得到乳腺癌相关成纤维细胞及其与之配对的正常乳腺成纤维细胞,两者均高表达Vimentin低表达cytokeratin,且两者在形态及生物学性状有一定差异。结论:与配对成纤维细胞相比,乳腺癌相关成纤维细胞高表达α-SMA,且增殖能力增强。
- 陈平波墨青青王蓓蓓翁丹卉吴鹏陈刚
- 关键词：乳腺肿瘤成纤维细胞
- 抑制共济失调毛细血管扩张突变基因RAD3相关蛋白逆转卵巢癌SKOV3细胞顺铂耐药被引量：5
- 2014年
- 目的 探讨共济失调毛细血管扩张突变基因RAD3相关蛋白（ATR）水平和活性对卵巢癌SKOV3细胞顺铂（DDP）敏感性的影响.方法 以ATR-siRNA转染SKOV3细胞48 h下调ATR蛋白水平,以VE-821预处理SKOV3细胞12 h下调ATR激酶活性.采用CCK8实验检测细胞活性,Western blot法检测ATR、磷酸化组蛋白2A变异体（γ-H2AX）和p-ATR蛋白表达,荧光共聚焦检测细胞γ-H2AX和DNA双链修复蛋白（RAD51）的表达,碱性慧星实验检测细胞内DNA双链损伤情况,流式细胞术检测细胞周期分布.结果 DDP可明显引起SKOV3细胞DNA双链损伤,并激活ATR激酶通路.ATR-siRNA可显著下调ATR蛋白水平.CCK8检测结果显示,NC-siRNA组和ATR-siRNA组经DDP作用48 h后,其半数抑制浓度（IC50）值分别为72.12 μmol/L和41.25 μmol/L（P＜ 0.05）.荧光共聚焦检测结果显示,40 μmol/L DDP处理24 h后,ATR-siRNA组RAD51募集明显减少.碱性彗星实验结果显示,与NC-siRNA组比较,ATR-siRNA组能够引起更长的拖尾效应,DNA双链损伤明显增加.DMSO组和VE-821组经DDP作用48 h后,其IC50值分别为75.32 μmol/L和45.64 μmol/L（P＜0.05）.荧光共聚焦检测结果显示,40 μmol/L DDP处理24 h后,VE-821组RAD51募集明显减少.碱性彗星实验结果显示,与DMSO组比较,VE-821组能够引起更长的拖尾效应,DNA双链损伤明显增加.细胞周期检测结果显示,40 μmol/L DDP作用于卵巢癌SKOV3细胞24h后,其G0/G1期、S期、G2/M期细胞比例分别为71.2％、13.4％和15.4％,而对照组分别为54.2％、21.3％和24.4％,DDP引起明显的G0/G1期阻滞.ATR-siRNA组和VE-821组经DDP作用后,其G0/G1期、S期、G2/M期细胞比例分别为43.2％、20.4％、36.4％和40.2％、22.5％、37.3％,干扰ATR表达和活性后能够逆转DDP引起的细胞周期阻滞。结论 抑制ATR可以影响SKOV3细胞同源重组修复过程,增加DNA双链损伤,缓解G0/G1期周期阻滞,增加其对DDP的敏感性。
- 杨宗元孙朝阳刘毅龚成陈刚翁丹卉
- 关键词：卵巢肿瘤顺铂细胞系
- MYC下调人整合素分子β1抑制卵巢癌细胞黏附侵袭能力被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨MYC对卵巢癌细胞黏附侵袭能力的影响,以及整合素分子β1(ITGB1)参与调控的机制。方法:比较NCI-60细胞信息库中60种细胞系MYC与ITGB1的mRNA水平的相关性;Western blot比较卵巢癌细胞系中MYC与ITGB1蛋白水平的相关性;免疫组化比较配对卵巢癌原位转移灶MYC和ITGB1表达水平;体外黏附试验比较改变MYC或ITGB1水平后卵巢癌细胞对不同ECM蛋白如Fibronectin、CollagenⅠ、Laminin的黏附能力;Transwell试验比较改变MYC或ITGB1水平后卵巢癌细胞的侵袭能力。结果 :NCI-60细胞库中MYC与ITGB1在mRNA水平显著负相关(P<0.01);卵巢癌细胞系中MYC和ITGB1蛋白水平负相关;卵巢癌配对临床标本原位灶低表达ITGB1,高表达MYC,而转移灶高表达ITGB1低表达MYC;下调ITGB1降低卵巢癌细胞黏附和侵袭能力,过表达ITGB1则促进黏附和侵袭能力;下调MYC后上调ITGB1表达,促进黏附和侵袭能力,抑制ITGB1的升高可以逆转黏附和侵袭能力的提高。结论:卵巢癌细胞中MYC与ITGB1负相关,抑制卵巢癌细胞黏附与侵袭,下调MYC可以通过升高ITGB1促进其侵袭和黏附能力。
- 杨宗元周晓水魏晓刘毅龚成陈刚翁丹卉
- 关键词：卵巢肿瘤MYC整合素Β1
