国家自然科学基金(30400138)
- 作品数：13 被引量：52H指数：6
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- 相关机构：河北医科大学第一医院河北省脑老化与认知神经科学实验室上海体育学院更多>>
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- 骨髓基质细胞条件培养液通过p38信号转导通路诱导中脑神经干细胞分化被引量：2
- 2007年
- 目的:骨髓基质细胞条件培养液能够诱导中脑神经干细胞分化为高比例神经元,但具体机制尚不十分清楚。选择p38信号转导通路作为观察切入点,剖析其在诱导分化途径中所扮演的角色。方法:实验于2006-04/2007-03在河北省脑老化与认知神经科学实验室完成。①实验方法:将SD大鼠麻醉后处死,分离股骨和胫骨,冲洗骨髓腔,将洗出的细胞悬液离心,悬浮后接种,培养48h后弃去未贴壁细胞,更换新的培养基,6d左右可进行传代,约铺满85%瓶底后弃去培养液,更换为含2%B27的Neurobasal培养液,24h后经过离心的上清液即为骨髓基质细胞条件培养液。取新生SD大鼠中脑,机械分散成单细胞后离心弃上清,加入培养液分散过滤,接种时加入含2%B27的DMEM/F12培养基和20μg/L碱性成纤维细胞生长因子,7d左右的单个神经干细胞便可增殖形成球体。将第2～3代神经干细胞球种植于预先包被多聚赖氨酸的培养皿中,贴壁后更换培养液。设立对照组和抑制剂组,均加入骨髓基质细胞条件培养液,此外抑制剂组还加入p38信号转导通路抑制剂SB203580至终浓度4μmol/L。②实验评估:第7天进行免疫细胞化学染色,检测表达微管相关蛋白2的神经元与表达胶质原纤维酸性蛋白的星形胶质细胞在分化细胞中所占的比例。结果:①神经干细胞分化过程中的形态学变化及p38信号转导通路抑制剂的影响:加入抑制剂后24h,光镜下可见神经干细胞长出的细胞有两种类型:一类细胞体积较小,边缘整齐,立体感强,周围有光晕并在两极有突起,免疫荧光染色显示这类细胞微管相关蛋白2呈阳性表达,即为神经元;另一类细胞突起较粗大,不规则,多聚集在神经干细胞球的中央,呈放射状排列,免疫荧光染色表明这类细胞为胶质原纤维酸性蛋白阳性的星形胶质细胞。②神经元及星形胶质细胞在分化细胞中所占的比例:p38信号转导通路抑制剂作�
- 顾平温雅马芹颖王彦永崔冬生王铭维
- 关键词：转导干细胞细胞分化
- 骨髓基质干细胞和神经干细胞移植治疗帕金森病大鼠的效果比较被引量：13
- 2008年
- 目的：目前对应用神经干细胞和骨髓基质干细胞移植治疗帕金森病效果进行对比的研究很少,实验观察比较同种异体来源的中脑神经干细胞和骨髓基质干细胞对帕金森大鼠行为学及损伤脑组织形态学的影响。方法：实验于2006-03/2007-09在河北医科大学第一医院脑老化与认知神经科学实验室完成。SD大鼠麻醉后建立右侧帕金森病模型,随机分为神经干细胞组14只、骨髓基质干细胞组10只、空白对照组10只。选取右侧纹状体2个坐标点（inmm：A＋0.6;R＋4.0;V-5.0）、（inmm：A-0.7;R＋3.0;V-5.0）,前两组每个坐标点分别注入经Brd-U标记的神经干细胞悬液、骨髓基质干细胞悬液5μL,约1×10^6个细胞,空白对照组注射等量磷酸盐缓冲液。细胞移植后各组大鼠腹腔注射阿朴吗啡诱导旋转。结果：①行为学改变：与空白对照组比较,移植2～8周神经干细胞组和骨髓基质干细胞组大鼠的旋转次数均明显减少（P〈0.01）。②纹状体切片免疫组织化学荧光染色鉴定：移植8周后,神经干细胞组和骨髓基质干细胞组均可见一定数量双标的神经元、星形胶质细胞和酪氨酸羟化酶阳性细胞,且后者的双标细胞相对多于前者。空白对照组未发现Brd-U阳性细胞、微管相关蛋白2阳性细胞及酪氨酸羟化酶阳性细胞的表达。各组损毁侧黑质酪氨酸羟化酶阳性细胞残存率基本相似（P〉0.05）。结论：神经干细胞和骨髓基质干细胞移植均可改善帕金森病大鼠的旋转行为,且至少在脑内存活8周,并可分化成神经元、星形胶质细胞和多巴胺能神经元。
- 顾平王坤王彦永王铭维崔冬生耿媛
- 关键词：骨髓基质干细胞神经干细胞帕金森病
- 骨髓基质细胞条件培养液诱导神经干细胞分化的信号转导机制被引量：3
- 2009年
- 研究MAPK信号转导通路在骨髓基质细胞条件培养液诱导神经干细胞分化中的作用及机制。用骨髓基质细胞条件培养液培养神经干细胞,并在培养体系中加入MAPK信号转导通路抑制剂PD98059(ERK1/2通路抑制剂)、SB203580(p38通路抑制剂)和genistin(JNK通路抑制剂),7天后经免疫荧光染色鉴定其后代中神经元和星形胶质细胞的比例,并将骨髓基质细胞条件培养液进行蛋白质微阵列检测。结果发现与对照组相比,PD98059和SB203580组神经干细胞分化为神经元比例降低,而星形胶质细胞比例增高,蛋白质微阵列测检发现骨髓基质细胞条件培养液中含有IL-4、IL-6、LIX和TNF-α4种细胞因子。研究结果显示骨髓基质细胞分泌的IL-4、IL-6、LIX和TNF-α4种细胞因子可能通过ERK1/2和p38信号转导通路调节神经干细胞的分化。
- 马芹颖温雅顾平王彦永王铭维崔冬生刘力
- 关键词：MAPK信号转导通路神经干细胞骨髓基质细胞
- ERK1/2信号转导通路对骨髓基质细胞条件培养液诱导大鼠中脑神经干细胞分化作用的影响被引量：3
- 2007年
- 目的:探讨ERK1/2信号转导通路在骨髓基质细胞条件培养液(BMSCs-CM)诱导大鼠中脑神经干细胞(NSCs)分化中的作用。方法:将神经干细胞球种植干预先包被多聚赖氨酸的35 mm的培养皿中.神经干细胞球约30 min后贴壁.自然分化组将培养液换为含2%B27的neurobasal培养液,对照组换为BMSCs-CM.抑制剂组将培养液换为含有信号转导通路抑制剂PD98059(5μmol/L)的BMSCs-CM.7 d后采用免疫荧光染色方法观察NSCs后代细胞中神经元和星形胶质细胞的数量比例与形态差别。结果:用成年大鼠BMSCs-CM体外培养新生大鼠中脑NSCs.自然分化组NSCs分化的神经元为(15.7±10.3)%[低干对照组的(51.17±10.30)%.P<0.05],星形胶质细胞为(66.9±14.8)%[明显高于对照组的(23.26±5.60)%.P<0.05]。而抑制剂组神经元所占比例为(39.48±7.29)%[明显低于对照组.P<0.01].星形胶质细胞的比例为(31.01±8.96)%[明显高干对照组,P<0.01]。结论:BMSCs-CM可以提高神经干细胞分化为神经元的比例.并且同时降低了其分化为星形胶质细胞的比例,这两种作用很可能是通过ERK1/2信号转导通路实现的。
- 顾平王彦永马芹颖温雅崔冬生刘力王铭维张振清
- 关键词：骨髓基质细胞条件培养液神经干细胞
- 中脑神经干细胞分化的神经元体外表达突触素的动态分析被引量：11
- 2005年
- 目的:观察中脑神经干细胞(NSCs)分化的神经元在不同条件下及不同时间内表达突触素的动态变化。方法:使用骨髓基质细胞(BMSCs)的条件液培养中脑NSCs,免疫细胞化学染色方法观察NSCs分化的神经元表达突触素的状态。结果:在NSCs分化后的12d,可观察到神经元能够表达突触素,但水平较低;18d,NSCs分化的神经元表达突触素的水平接近体外培养3d的海马神经元,并且也呈现典型的串珠样分布。结论:中脑NSCs分化而来的神经元在体外能够表达突触素,但与原代海马神经元相比,则需要更长的体外培养时间,提示NSCs分化的神经元发育成熟可能需要一定时间。
- 王彦永娄淑杰顾平王铭维路长林
- 关键词：神经干细胞分化突触素体外表达中脑神经干细胞NSCS神经元发育
- 自体骨髓间充质干细胞移植治疗橄榄-桥脑-小脑萎缩1例被引量：7
- 2008年
- 1例女性患者主因走路不稳17年,视物模糊13年,大小便控制不利8年入院治疗,诊断为橄榄-桥脑-小脑萎缩。患者症状呈进行性加重,言语困难加重,伴头晕,视物成双,吞咽困难等。入院后接受自体骨髓间充质干细胞体外增殖,蛛网膜下腔注射移植术。术后有轻微发热,无其他明显不良反应。术后3d,患者自觉说话较前省力,颈部发紧感减轻,复视消失,查体发现面部表情较前好转,表情肌较前协调,面部及颈部肌张力较前下降,双侧指鼻、跟膝胫试验较前好转。出院3个月后随访,症状仍在进一步恢复中。
- 马晓伟王彦永王培芝顾平王铭维
- 关键词：自体骨髓间充质干细胞橄榄-桥脑-小脑萎缩细胞体外增殖患者症状
- 软脑膜细胞诱导神经干细胞高比例分化为神经元的效应被引量：7
- 2005年
- 目的:观察软脑膜细胞对神经干细胞分化的影响。方法:实验于2004年在上海体育学院运动科学系实验中心完成。从脑组织分别分离和培养软脑膜细胞和神经干细胞,并进行两种细胞的共培养,同时按照免疫细胞化学染色方法,观察和鉴别神经干细胞在软脑膜细胞提供的微环境下的分化状态。结果:自然分化条件下,微管相关蛋白-2ab阳性的神经元、胶质纤维酸性蛋白阳性的星型胶质细胞和2,3-环核苷酸磷酸二酯酶阳性的寡突胶质细胞在神经干细胞后代中所占比例分别为(14.6±4.5)%,(11.3±3.8)%和(73.6±18.7)%。而在共培养条件下,神经元、星型胶质细胞和寡突胶质细胞在神经干细胞后代中所占比例分别为(40.5±15.8)%,(44.6±16.7)%和(15.3±4.1)%。结论:软脑膜细胞可诱导神经干细胞高比例分化为微管相关蛋白-2ab阳性的神经元。
- 娄淑杰顾平王铭维
- 关键词：神经干细胞神经元分化
- 骨髓基质细胞微环境诱导神经干细胞的分化被引量：4
- 2007年
- 学术背景:骨髓基质细胞能够表达多种细胞表面分子及分泌多种细胞生长因子,其共同组成的微环境可以调节造血干细胞的分化和发育。造血干细胞和神经干细胞可表达很多共同基因,提示二者存在类似的发育和分化机制。目的:深入认识骨髓基质细胞提供的微环境对神经干细胞的诱导分化作用。检索策略:由该论文的研究人员应用计算机检索Pubmed数据库1992-01/2007-03的相关文献,检索词"bonemarrowstemcells,microenvironment,neuralstemcells,differentiation",并限定文章语言种类为English。同时计算机检索CHKD期刊全文数据库1994-01/2006-12的相关文献,检索词"骨髓基质细胞,神经干细胞,分化",并限定文章语言种类为中文。共检索到125篇文献,对资料进行初审,纳入标准:①文章所述内容应与骨髓基质细胞密切相关。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准:①重复性研究。②Meta分析。文献评价:文献来源主要是通过对骨髓基质细胞所提供的微环境诱导神经干细胞分化方面的内容进行汇总分析。所选用的31篇文献中,7篇为综述,其余均为临床或基础实验研究。资料综合:①骨髓基质细胞易于分离培养,其分泌的各种细胞因子、生长因子和细胞外基质成分所构成的微环境能够调节神经干细胞的发育和分化。②从mRNA水平看,骨髓基质细胞不仅有脑源性神经生长因子和神经生长因子的表达,还有胶质细胞源性神经营养因子的表达。从蛋白水平看,采用ELISA法在骨髓基质细胞的培养液和细胞蛋白中均可检测到胶质细胞源性神经营养因子。在生理状态下,骨髓基质细胞能分泌具有神经营养活性的物质,对损伤的运动神经元具有保护作用。此外研究证实骨髓基质细胞分泌至细胞外的可溶性物质具有直接调节神经干细胞分化的能力。结论:骨髓基质细胞通过分泌各种细胞因子所
- 王彦永张振清顾平徐维维王铭维
- 关键词：干细胞
- 骨髓基质细胞分泌蛋白的蛋白质质谱分析被引量：1
- 2010年
- 目的通过Shotgun蛋白质组学分析,初步检测骨髓基质细胞(BMSCs)条件液中可能含有的蛋白质。方法将BMSCs条件液混匀后经超滤浓缩分为大于5kD和小于5kD两部分,并培养神经干细胞(NSCs),观察其后代中神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的比例,鉴定出能调节NSCs分化的部分,并进行Shotgun蛋白质组学分析。结果BMSCs条件液分子量大于5kD的部分可以调节NSCs向神经元和少突胶质细胞方向分化,这部分条件液先经过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)发现大部分蛋白集中在14kD以上,将蛋白条带酶解以后,经Shotgun分析共鉴定到456种蛋白质,其中154个相似蛋白质,17个假想蛋白质,56个未知蛋白质,剩余的229个蛋白质中大多为细胞骨架蛋白、分泌蛋白、信号转导蛋白、酶类和转运蛋白等。结论BMSCs分泌的多种蛋白质对NSCs的分化起调节作用,明确了BMSCs条件液中可能含有的成分。
- 马芹颖顾平王彦永王铭维崔冬生温雅刘力
- 关键词：骨髓基质细胞神经干细胞
- 新生大鼠不同脑区内神经前体细胞生物学特性比较被引量：1
- 2005年
- 为了观察海马、中脑和顶叶皮质内神经前体细胞的体外生长特性及其分化后所产生的神经元的形态特征,本研究使用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)体外扩增细胞技术和克隆形成实验分析了神经前体细胞的自我更新特性;采用神经前体细胞和骨髓基质细胞共培养方式,通过免疫细胞化学染色方法,研究了神经前体细胞的分化特点。结果发现:(1)新生大鼠海马、中脑和顶叶皮质内的神经前体细胞,在体外的分裂增殖能力无明显区别;(2)新生大鼠海马、中脑和顶叶皮质内的神经前体细胞在相同的条件下,其后代细胞中,神经元和胶质细胞所占的比例基本相同,但不同脑区内神经前体细胞所产生的神经元的形态却表现出明显不同。这些结果提示新生大鼠不同脑区内神经前体细胞的分化潜能已有了一定限制。
- 娄淑杰顾平王彦永王铭维路长林
- 关键词：神经前体细胞生物学特性碱性成纤维细胞生长因子骨髓基质细胞
