辽宁省自然科学基金(20042082)
- 作品数：12 被引量：57H指数：5
- 相关作者：孔垂泽时京刘奔王侠孙志熙更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第一医院中国医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 丝裂霉素C联合C_2-神经酰胺对人膀胱癌T_(24)细胞生长的抑制作用被引量：1
- 2006年
- 目的探讨丝裂霉素C(mitomycinC,MMC)与C2-神经酰胺(C2-ceramide,C2-cer)联合应用对人膀胱癌T24细胞生长的抑制作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazole-2yl)-2,5-diphenylte-trazoliumbromid,MTT]比色法测定MMC和C2-cer单独或联合应用对人膀胱癌T24细胞生长的抑制作用,并应用Chou-Tala-lay联合指数法定量分析药物之间相互作用的效果。结果MMC、C2-cer单独应用时,随药物浓度增加对T24细胞生长的抑制作用也增加,中效浓度分别为153.426、27.797μmol/L。MMC与C2-cer联合应用时,相互作用的效果表现为在低浓度(01),中效浓度为89.536μmol/L(其中MMC74.048μmol/L,C2-cer15.488μmol/L)。结论MMC和C2-cer相互作用的效果与药物浓度相关,低浓度时呈协同作用,高浓度时呈拮抗作用。
- 时京孔垂泽孙志熙张莹刘博刘奔
- 关键词：丝裂霉素CC2-神经酰胺
- 转基因法建立膀胱癌多药耐药细胞株被引量：3
- 2007年
- 目的:建立高效、稳定的人膀胱癌多药耐药性细胞模型。方法:采用基因重组技术构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/bcl-2,通过脂质体将人bcl-2基因转染膀胱癌细胞BIU-87,RT-PCR检测基因转录水平,应用MTT比色法进行耐药性检验。结果:酶切鉴定和基因测序证明真核表达载体pcDNA3.1(+)/bcl-2构建成功;RT-PCR分析表明,转染bcl-2基因的BIU-87/bcl-2细胞的bcl-2基因表达水平较BIU-87细胞和转染空载体的BIU-87/neo细胞显著提高;与BIU-87细胞和BIU-87/neo细胞相比,BIU-87/bcl-2细胞具有较高的耐药性。结论:基因转染法是建立人膀胱癌多药耐药细胞模型的理想方法。
- 刘贤奎孔垂泽时京
- 关键词：膀胱肿瘤BCL-2基因多药耐药性转染
- bcl-2过表达对阿霉素诱导的膀胱癌细胞凋亡和活性氧产生的影响被引量：17
- 2006年
- 目的探讨凋亡相关基因bcl-2过表达对阿霉素(ADR)诱导的膀胱癌细胞凋亡的影响。方法采用脂质体转染法将bcl-2基因转入膀胱癌BIU87细胞,G418筛选获得抗性亚克隆细胞株,逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)法检测bcl-2基因的表达。比较BIU87、BIU87/neo和BIU87/bcl-2细胞对ADR的敏感性。用ADR分别作用于上述细胞24 h,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞内活性氧(ROS)产生情况。结果建立分别稳定表达bcl-2基因、新霉素抗性基因(neo)的膀胱癌亚克隆细胞株BIU87/bcl-2、BIU87/neo。RT-PCR BIU87/bcl-2细胞的bcl-2 mRNA水平显著高于BIU87、BIU87/neo(P＜0．01)。噻唑蓝(MTT)检测显示BIU87/bcl-2细胞对ADR的化疗敏感性明显降低(P＜0．01)。ADR作用24 h后,BIU87、BIU87/neo细胞凋亡率分别为(23．75±3．72)%、(21．94±1．27)%,而BIU87/bcl-2细胞为(3．38±0．95)%(P＜0．01)；ROS分别为(90．45±1．96)%、(88．41±3．88)%和(77．00±3．86)%,BIU87/bcl-2细胞较前两者明显降低(P＜0．01)。结论bcl-2基因能够抑制ADR诱导的膀胱癌BIU87细胞凋亡,降低细胞内ROS水平是其发挥抗凋亡作用的重要机制。
- 刘奔孔垂泽高建时京李振华
- 关键词：膀胱肿瘤BCL-2脱噬作用
- 丝裂霉素C联合抗Fas单抗、C_2神经酰胺对人膀胱癌T24细胞的抑制作用被引量：5
- 2005年
- 时京孔垂泽孙志熙王侠杨绍波
- 关键词：膀胱癌T24细胞丝裂霉素C神经酰胺四甲基偶氮唑蓝术后治疗细胞株生长
- 神经酰胺对人膀胱癌细胞凋亡诱导作用及其机制被引量：10
- 2006年
- 目的探讨神经酰胺(cer)对人膀胱癌细胞的凋亡诱导作用及其机制。方法不同浓度C_2-神经酰胺(C_2-cer)作用于膀胱癌T24细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,吖啶橙(AO)荧光染色、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,并对半胱天冬酶(Caspase)-3活性、bcl-2蛋白含量和细胞色素C在细胞内的分布变化进行检测。结果T24细胞存活率与C_2-cer浓度呈负相关(r=-0．973,P＜0．01)。对照组和5、10、20、40μmol/L的C_2-cer处理组凋亡率分别为2．95％、9．18％、14．23％、29．12％、48．46％,C_2-cer处理组凋亡率显著高于对照组(P＜0．01)。Caspase-3活性随C_2-cer浓度增加而增加,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0．05)。在C_2-cer作用下,T24细胞内bcl-2蛋白含量下降,细胞色素C向细胞质释放。结论降低bcl-2蛋白表达水平,从而促进线粒体细胞色素C释放和Caspase-3激活可能是C_2-cer诱导膀胱癌细胞凋亡的重要机制。
- 孔垂泽时京王侠李振华朱育焱曾宇
- 关键词：神经酰胺膀胱肿瘤脱噬作用
- 尿液中DD3 mRNA检测对前列腺癌早期诊断意义的研究被引量：7
- 2008年
- 目的:探讨二氢二醇脱氢酶3(DD3)在前列腺癌患者早期诊断和预后判断中的作用。方法:收集非前列腺疾病患者、前列腺良性增生和前列腺癌患者的尿液标本沉淀,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对其中的DD3 mRNA表达进行研究,应用SPSS13.0结合临床数据进行相关分析,并与前列腺特异性抗原(PSA)比较。结果:前列腺癌患者尿液标本中DD3 mRNA表达的相对含量是非前列腺疾病患者的4.5倍、前列腺良性增生患者的2.7倍;DD3mRNA相对含量值与Gleason评分均呈正相关,各个Gleason评分/分化程度中,DD3 mRNA相对含量值有明显差异,分化程度越低,DD3 mRNA相对含量值越高;用受试者工作特征曲线分析,各指标PSA、F/T和DD3 mRNA相对含量值的曲线下面积分别为0.744、0.788和0.921,DD3 mRNA相对含量值的检验效能最大。结论:尿液中DD3 mRNA的检测应用于前列腺良性增生和前列腺癌的鉴别时,可能要比PSA强,而且是一种预测前列腺癌预后的标志之一。
- 潘朝阳曹孙琼孔垂泽周宝森
- 关键词：逆转录聚合酶链反应
- 丝裂霉素C与C_2-神经酰胺联合应用治疗膀胱癌被引量：5
- 2006年
- 目的观察丝裂霉素C(MMC)与C2-神经酰胺(C_2-cer)联合应用对人膀胱癌细胞的作用效果,并探讨其机制。方法不同浓度MMC与C_2-cer单独及联合作用于人膀胱癌BIU-87细胞后,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长抑制率,计算合用指数(CI),流式细胞仪(FCM)检测BIU-87细胞凋亡率,吖啶橙(AO)荧光染色观察凋亡形态学变化,Western blot检测细胞色素C在细胞内分布变化,并检测Caspase-3活性改变。结果单独应用时MMC与C_2-cer的中效浓度分别是159和28μmol/L,联合用药时下降为55和11μmol/L,CI=0．74。MMC与G_2-cer单独及联合应用均可导致BIU-87细胞出现凋亡的形态学变化。两种药物联合应用时的凋亡率高于各自单用(P＜0．05)。线粒体细胞色素C含量在MMC与C_2-cer单独及联合应用时均较对照组减少,联合用药时减少最为明显,细胞质内细胞色素C含量在联合用药时增加也最为明显(P＜0．05)。Caspase-3活性在MMC与C_2-cer单独及联合应用时均较对照组升高,联合用药时升高最为明显(P＜0．05)。结论MMC与C_2-cer联合应用可以通过共同诱导细胞凋亡,协同抑制膀胱癌细胞生长。线粒体细胞色素C释放和Caspase-3活性变化可能发挥重要作用。
- 时京孔垂泽孙志熙王侠罗阳刘奔张莹刘博
- 关键词：膀胱肿瘤丝裂霉素C神经酰胺脱噬作用
- 转染Bcl-2基因的膀胱癌细胞多药耐药性研究被引量：5
- 2006年
- 目的:探讨转染Bcl-2基因后膀胱癌细胞的多药耐药变化。方法:采用基因重组技术构建Bcl-2基因的真核表达载体pcD-NA3.1(+)/Bcl-2,经酶切和基因测序分析对构建结果进行鉴定;通过脂质体将含Bcl-2基因的表达载体转染膀胱癌细胞BIU-87,RT-PCR检测基因转录水平;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞在不同化疗药物作用下的细胞耐药性。结果:经酶切鉴定和基因测序分析证明真核表达载体pcDNA3·1(+)/Bcl-2构建成功。将该表达载体转染BIU-87细胞后,Bcl-2基因的表达水平与野生型BIU-87细胞和转染空载体的BIU-87/neo细胞相比显著提高(P<0·01)。与BIU-87细胞和BIU-87/neo细胞相比,BIU-87/Bcl-2细胞对MMC、PHA和DDP等化疗药物的耐药性也明显增强(P<0·01)。结论:Bcl-2基因高表达是膀胱癌多药耐药的原因之一。
- 刘贤奎孔垂泽时京
- 关键词：基因多药转染
- Bcl-2基因对丝裂霉素C诱导的膀胱癌细胞凋亡抑制及其机制的研究被引量：4
- 2008年
- 目的:探讨Bcl-2基因对丝裂霉素C(MMC)诱导的膀胱癌细胞凋亡的抑制作用及其分子机制。方法:采用DNA重组技术构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/Bcl-2;利用脂质体将重组载体pcDNA3.1(+)/Bcl-2和空载体pcDNA3.1(+)转入人膀胱癌BIU-87细胞,RT-PCR检测基因转录水平;MMC作用于转染前、后的细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、吖啶橙(AO)荧光染色法、Westernblot技术对细胞生长、凋亡、Caspase-3活性及细胞色素C在细胞内分布的变化进行检测。结果:1)成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/Bcl-2,建立Bcl-2基因高表达的膀胱癌细胞株BIU-87/Bcl-2。2)在MMC作用下,与未转染Bcl-2基因的膀胱癌细胞株BIU-87和BIU-87/neo相比,BIU-87/Bcl-2细胞株存活率上升,P<0.01,其IC50是后者的15倍,q=6.41,P<0.01;BIU-87/Bcl-2的凋亡率显著降低,q值分别为22.62和20.45,P值均<0.01,Caspase-3激活和线粒体细胞色素C的释放受到抑制,BIU-87/Bcl-2的A405显著低于BIU-87和BIU-87/neo,q值分别为28.20和26.70,P值均<0.01,表明BIU-87/Bcl-2的Caspase-3激活受限。结论:Bcl-2基因高表达通过抑制线粒体细胞色素C的释放和Caspase-3的激活,使膀胱癌细胞对MMC诱导的凋亡产生抗性,导致耐药性的产生。
- 王侠时京刘奔孔垂泽
- 关键词：基因丝裂霉素类
- Bcl-2基因在人膀胱癌细胞中表达对CTL凋亡诱导作用的影响被引量：3
- 2007年
- 目的:探讨Bcl-2基因在人膀胱癌细胞中表达对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)凋亡诱导作用的影响。方法:采用基因重组技术构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/Bcl-2;应用脂质体介导的基因转染技术将pcDNA3.1(+)/Bcl-2导入膀胱癌BIU-87细胞,RT-PCR检测Bcl-2基因表达水平;不同浓度抗Fas单克隆抗体(Anti-Fasmab)模拟CTL的Fas-配体(Fas-L)处理转染与未转染Bcl-2基因的膀胱癌细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、吖啶橙(AO)荧光染色法和流式细胞检测仪(FCM)分析细胞存活和凋亡情况。结果:酶切和核酸测序证明真核表达载体pcDNA3.1(+)/Bcl-2构建成功。将重组质粒转染膀胱癌细胞后,RT-PCR分析表明,转染Bcl-2基因的BIU-87/Bcl-2细胞的Bcl-2基因表达水平较BIU-87细胞和转染空载体的BIU-87/neo细胞显著增高,P<0.01。An-ti-Fasmab作用后,BIU87/Bcl-2细胞的存活率显著高于BIU-87和BIU-87/neo细胞,P<0.05或P<0.01。3种细胞虽均发生凋亡的形态学改变,但BIU87和BIU87/neo细胞改变更为明显,两者的凋亡率分别为(25.33±3.00)%和(27.05±1.75)%,而BIU-87/Bcl-2细胞的凋亡率为(18.06±1.41)%,显著低于前两者,P<0.01。结论:Bcl-2基因高表达通过阻断CTL杀伤膀胱癌细胞的Fas/Fas-L途径,使膀胱癌细胞能够抵御免疫系统中CTL的攻击。
- 时京孔垂泽刘贤奎刘奔张莹孙志熙
- 关键词：基因流式细胞术
