山东省自然科学基金(Y2002004)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 相关作者：齐眉周亚滨赵蔚明王红郑燕更多>>
- 相关机构：山东大学曼尼托巴大学更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 促进乳头状瘤病毒L1蛋白表达和DNA疫苗免疫效应的研究
- 2006年
- 目的探讨促进乳头状瘤病毒(PV)晚期基因L1的蛋白表达和DNA疫苗免疫效应的途径及可能的机制。方法分别将含人源化优化密码BPVL1-GFP融合基因(HL1-GFP)和野生型BPVL1-GFP融合基因(WL1-GFP)的真核表达质粒体外单独转染或与tRNAser真核表达质粒共转染人角质形成细胞HaCAT,荧光显微镜及Western blot方法观察L1-GFP融合蛋白的瞬时表达情况。半定量RT-PCR分析不同PV L1基因mRNA的表达。BALB／c小鼠股四头肌内分别接种野生型、优化密码L1 DNA疫苗,同时将L1 DNA疫苗与tRNAser真核表达质粒混合后接种小鼠,观察诱导产生的体液免疫反应。结果野生型WL1-GFP融合基因在HaCAT细胞中未能有效表达,优化密码HL1-GFP基因在HaCAT细胞中的蛋白表达水平明显增强;但两者在mRNA水平差异无统计学意义。WL1-GFP与tRNAser真核表达质粒共转染细胞中L1蛋白的表达较单独转染WL1-GFP基因时增强。动物DNA免疫结果表明,优化密码HL1 DNA疫苗接种可使小鼠特异性L1中和抗体水平明显升高;而野生型WL1 DNA疫苗接种组小鼠仅产生低滴度的L1抗体,WL1 DNA疫苗与tRNAser真核表达质粒混合接种使小鼠的L1抗体水平增加。结论优化密码能显著促进乳头状瘤病毒晚期基因L1在哺乳动物细胞中的表达和DNA疫苗的免疫反应;补充外源tRNAser基因能够提高野生型L1基因的蛋白表达和DNA疫苗诱导的体液免疫应答。
- 王红赵蔚明齐眉周亚滨栾怡程轶喆于修平
- 关键词：乳头状瘤病毒L1基因TRNA蛋白表达DNA免疫
- 优化密码沙眼衣原体主要外膜蛋白基因的设计合成与表达
- 2005年
- 目的:设计合成优化密码沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因,克隆构建优化密码MOMP(HuMOMP)基因的真核表达质粒及EGFP-HuMOMP融合基因表达质粒。方法:利用软件分析比较鼠肺炎沙眼衣原体(MoPn)与人类等哺乳动物基因组密码子使用的差异,根据所得数据对MOMP基因进行优化设计与合成。双酶切pUC-HuMOMP质粒,游离HuMOMP片段,定向克隆入pcDNA3的相应位点,构建重组真核表达质粒pcDNA3-HuMOMP;双酶切游离pcDNA3-HuMOMP中的HuMOMP片段,定向克隆入pEGFP-C1的相应位点,构建重组真核表达质粒pEGFP-HuMOMP;pEGFP-HuMOMP质粒体外脂质体转染COS-1细胞,24h后观察荧光蛋白的表达。结果:合成的HuMOMP基因全长1125bp,经DNA测序无误。酶切鉴定pcDNA3-HuMOMP及pEGFP-HuMOMP质粒获得预期分子量DNA片段。EGFP-HuMOMP融合基因在COS-1细胞中获得明显表达,表达产物定位于胞浆。结论:设计合成的优化密码HuMOMP基因能够在哺乳动物细胞中成功表达。
- 郑燕赵蔚明王红周亚滨栾怡齐眉程轶喆贾继辉于修平
- 关键词：基因表达遗传密码
- 密码修饰可增强沙眼衣原体MOMP DNA质粒免疫小鼠的免疫应答
- 2006年
- 目的探讨密码修饰对沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因表达和DNA质粒免疫的影响。方法根据人类密码子使用偏好对鼠肺炎沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis mouse pneumoni-tis)MOMP基因进行优化修饰,设计合成人源化MOMP基因(HuMOMP)。构建以pcDNA3为载体的含HuMOMP及含野生型MOMP基因(WtMOMP)的真核表达质粒。瞬时转染COS-1细胞,Western blot方法比较HuMOMP基因及WtMOMP基因在哺乳动物细胞中的蛋白表达水平。DNA质粒肌内免疫BALB/c小鼠,检测小鼠血清特异性抗体、DTH和淋巴细胞增殖反应,比较优化密码MOMP基因和野生型MOMP基因DNA质粒免疫的免疫效果。结果人工合成HuMOMP基因,成功构建重组真核表达质粒pcDNA3-HuMOMP及pcDNA3-WtMOMP。转染细胞Western blot结果显示,HuMOMP基因的蛋白表达水平明显高于WtMOMP基因。ELISA结果表明,HuMOMP DNA质粒免疫组小鼠血清特异性IgG抗体有所升高;细胞免疫检测结果显示,HuMOMP DNA质粒免疫组小鼠足垫肿胀程度增强、淋巴细胞增殖实验刺激指数(SI)增高,两者与WtMOMP DNA质粒免疫组相比P<0.05,差异均有统计学意义。结论人源化密码修饰能够增强沙眼衣原体MOMP基因在哺乳动物细胞中的蛋白表达及DNA质粒免疫小鼠的免疫反应,这对于新型衣原体DNA疫苗的研究具有重要意义。
- 郑燕赵蔚明王红周亚滨栾怡齐眉程轶喆唐伟于晗杨熙
- 关键词：沙眼衣原体MOMP密码子
- E型沙眼衣原体MOMP基因重组质粒的构建与表达被引量：2
- 2005年
- 目的:构建E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)基因重组真核表达质粒pVAX1-MOMP,为探索安全的E型CtDNA疫苗奠定基础。方法:根据Genebank中E型CtMOMP基因序列设计引物,用高保真PCR方法从E型Ct基因组DNA中扩增得到约1.1kb的MOMP片段,克隆至pcDNAII载体,测序后亚克隆至表达载体pVAX1,构建卡那霉素抗性真核重组表达质粒pVAX1-MOMP,并以重组质粒转染COS-1细胞进行表达,用Westernblotting方法鉴定表达产物。结果:从E型Ct基因组DNA中扩增出特异的MOMP基因片段,酶切鉴定及DNA序列测定证实pVAX1-MOMP重组质粒构建正确,能在COS-1细胞内表达,表达产物能与抗MOMP单克隆抗体特异性结合。结论:成功构建E型沙眼衣原体MOMP真核表达质粒pVAX1-MOMP,并在真核细胞内获得表达。
- 吕慧赵蔚明郑燕王红周亚滨齐眉栾怡程轶喆于晗杨熙于修平
- 关键词：衣原体沙眼基因表达基因MOMP
- E型沙眼衣原体MOMP基因重组腺病毒的构建及免疫原性研究被引量：5
- 2006年
- 目的:构建E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)基因重组腺病毒,为沙眼衣原体腺病毒疫苗的研究奠定基础。方法:根据Genebank中E型Ct MOMP基因序列设计引物,用高保真PCR方法从E型Ct基因组DNA中扩增得到MOMP基因片段,克隆至pcDNAII载体,测序后连接入腺病毒穿梭载体pDC316。穿梭载体pDC316-MOMP与含腺病毒基因组的辅助质粒PBHGlox△E1,3Cre共转染至HEK293细胞,在Cre-loxP重组酶作用下进行重组,包装成重组腺病毒颗粒,用PCR和RT-PCR方法进行鉴定。并用动物免疫试验检测重组腺病毒的免疫原性。结果:从E型Ct基因组DNA中扩增出约1.1 kb的特异MOMP基因片段,酶切鉴定及DNA序列测定证实穿梭载体pDC316-MOMP构建正确。穿梭载体pDC316-MOMP与含腺病毒基因组的辅助质粒PBHGlox△E1,3Cre共转染至293细胞,出现明显细胞病变效应。收集重组腺病毒,PCR法证实重组腺病毒含有MOMP基因,RT-PCR证实重组腺病毒在293细胞能表达MOMP基因。重组腺病毒免疫小鼠可诱导特异性抗体产生,证明重组腺病毒具有良好免疫原性。结论:成功构建了E型沙眼衣原体MOMP基因重组腺病毒,该重组腺病毒可诱导小鼠产生特异性抗体。
- 吕慧赵蔚明于修平郑燕王红周亚滨齐眉于晗杨熙
- 关键词：衣原体沙眼重组腺病毒MAJOR近交BALB
