湖南省自然科学基金(14JJ7003) 作品数:11 被引量:75 H指数:5 相关作者: 李军 邹明祥 王海晨 胡咏梅 刘文恩 更多>> 相关机构: 中南大学 更多>> 发文基金: 湖南省自然科学基金 中央高校基本科研业务费专项资金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
长沙地区产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的分子流行病学特征 被引量:5 2016年 目的了解长沙地区多重耐药铜绿假单胞菌(PA)产金属β-内酰胺酶(MBL)菌株基因型和流行情况。方法收集该地区7所综合医院临床分离的PA,对菌株进行鉴定和药敏试验,采用EDTA协同试验、E-test MBL进行MBL表型筛选,聚合酶连反应(PCR)明确其基因型,肠杆菌科基因间重复序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)进行同源性分析。结果经EDTA协同和E-test MBL初步筛查,81株PA中仅10株为强阳性;PCR结果显示,18株PA MBL基因阳性,其中IMP-9型11株,IMP-1型1株和VIM-2型6株,未检测出SIM、SPM、GIM和NDM-1基因型。ERIC-PCR分型结果显示,12株产IMP PA存在多个型别,而6株产VIM-2菌株为同一型别。结论长沙地区多重耐药PA以IMP-9和VIM-2基因型最常见。 邬靖敏 邹明祥 李军关键词:铜绿假单胞菌 金属Β-内酰胺酶 金属酶 耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌转座子基因检测及同源性分析 被引量:1 2017年 目的探讨耐碳青霉烯类药物鲍曼不动杆菌的转座子基因Tn2006、Tn2008分布及其同源性,为医院感染控制提供实验室依据。方法收集91株对碳青霉烯类药物耐药的非重复鲍曼不动杆菌,PCR检测转座子基因Tn2006和Tn2008,并对扩增产物进行测序及BLAST分析;采用重复序列引物聚合酶链反应(REP-PCR)分析CRAB同源性;采用多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术对23株CRAB进行同源性分析,利用Bio Numerics软件分析最小生成树。结果在检测的91株CRAB中,40株菌Tn2006基因阳性,Tn2008基因均为阴性;利用REP-PCR方法可将91株CRAB分为A、B、C、D、E、F和G 7个型别,菌株数分别为79株、4株、2株、2株、1株、2株和1株,A型又分为A1和A2两个亚型,分别为46株和33株,所有被检测医院均出现A型菌株;利用MLST分型方法可将23株CRAB分为8个序列型别(ST型),其中ST92型9株、ST195型5株、ST365型3株、ST138型2株、ST75型和ST381型各1株,发现2个新STs型,即STnl(1-15-3-2-2-56-3)和STn2(1-81-3-2-2-3-3)。结论本地区临床分离CRAB存在克隆流行,以A型为主,主要通过转座子Tn2006进行传播,ST92和ST195是本地区CRAB主要ST分型。 豆清娅 邹明祥 李军 胡咏梅 王海晨 沈辉关键词:鲍曼不动杆菌 CRAB 碳青霉烯类药物 同源性 转座子 一株广泛耐药恶臭假单胞菌耐药机制研究 被引量:5 2016年 目的研究一株临床分离广泛耐药恶臭假单胞菌(extensively drug resistant Pseudomonas putida,XDR-PP)的耐药机制,以期指导临床合理使用抗菌药物。方法采用VITEK-2compact全自动微生物分析系统对菌株进行鉴定及药敏试验;改良Hodge试验初筛碳青霉烯酶;EDTA-亚胺培南协同试验和亚胺培南双纸片增效法初筛金属酶;PCR检测16SrRNA甲基化酶基因、金属β-内酰胺酶基因及可移动性遗传元件基因,产物测序,结果经BLAST软件比对分析。结果该菌株对所检测的抗菌药物均耐药。改良Hodge试验、EDTA-亚胺培南协同试验和亚胺培南双纸片增效法结果均为阳性。基因检测结果显示,金属β-内酰胺酶基因阳性的有blaVIM-2和blaIMP-4两种基因,16SrRNA甲基化酶基因阳性的有armA基因,13种可移动性遗传元件中,intI、tnpU和merA基因阳性,其余均为阴性。结论blaVIM-2、blaIMP-4、armA、intI、tnpU以及merA基因是导致其广泛耐药的重要机制。恶臭假单胞菌中同时检出blaVIM-2和blaIMP-4两种金属β-内酰胺酶基因及armA基因为国内首次报道。 李军 邹明祥 王海晨 胡咏梅 豆清娅 晏群 刘文恩关键词:广泛耐药 恶臭假单胞菌 白细胞、降钙素原和C反应蛋白在血流感染早期诊断中的应用价值研究 被引量:19 2016年 目的探索白细胞(WBC)、C-反应蛋白(CRP)和降钙素原(PCT)在血流感染(BSI)早期诊断中的临床应用价值,为BSI的早期诊断提供依据。方法回顾性分析48例血液培养阳性患者(血培养阳性组)与50例血液培养阴性患者(血培养阴性组)WBC、PCT和CRP测定结果,比较两组及血培养阳性组中革兰阳性菌与革兰阴性菌感染者各指标检测结果;绘制受试者工作特征(ROC)曲线并计算ROC曲线下面积(AUC);采用二分类Logistic回归对3项指标预测血培养阳性的作用大小进行方程拟合。结果血培养阳性组PCT和CRP水平明显高于血培养阴性组,差异有统计学意义(P<0.05),而两组WBC计数比较差异无统计学意义(P>0.05)。血培养阳性组中革兰阳性菌与革兰阴性菌感染者仅PCT水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。WBC、PCT和CRP的AUC分别为0.579、0.746和0.624。二分类Logistic回归显示仅PCT对预测诊断具有统计学意义(P=0.013);三者联合预测诊断的阳性率为71.4%。结论三者均可作为BSI的早期诊断指标,而PCT和CRP较WBC有更重要的意义,并且PCT能较好地区分革兰阳性菌与革兰阴性菌感染。 李军 邹明祥 豆清娅 胡咏梅 王海晨 晏群 刘文恩关键词:血流感染 白细胞 降钙素原 C反应蛋白 肺炎克雷伯菌CS309耐药基因检测和NDM-1基因的克隆及原核表达 2017年 目的检测产NDM-1肺炎克雷伯菌CS309是否同时携带产IMP、VIM型金属β-内酰胺酶或KPC型碳青霉烯酶的耐药基因,同时构建NDM-1基因原核表达质粒,并在大肠埃希菌中进行表达。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增IMP、VIM和KPC耐药基因;以产NDM-1肺炎克雷伯菌CS309为DNA模板,PCR扩增NDM-1全长,并将其与pGEM-T克隆载体连接后转化至大肠埃希菌DH5α,继而对阳性克隆进行双酶切,将酶切片段与pET-28α(+)表达载体连接,并转化大肠埃希菌BL21,再用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,并采用SDS-PAGE和Western blot技术验证NDM-1蛋白。结果经PCR和测序证实,该菌同时携带NDM-1和IMP-4两种金属酶基因,未扩增出VIM、KPC耐药基因。经双酶切和测序证实,原核表达质粒pET-28α(+)-NDM-1构建成功。SDS-PAGE发现,重组菌株经诱导后在28 kDa附近有明显条带,与预期蛋白大小27.9 kDa一致。Western blot表明诱导产生的融合蛋白可与NDM-1抗体特异性结合。结论肺炎克雷伯菌CS309同时携带NDM-1和IMP-4两种金属酶基因;成功构建了NDM-1基因的原核表达质粒,该质粒在大肠埃希菌BL21中高效融合表达。 邬靖敏 邹明祥 王海晨 李军关键词:肺炎克雷伯菌 克隆 融合蛋白 耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌碳青霉烯酶基因型及插入序列ISAba1研究 被引量:2 2014年 目的了解耐碳青霉烯类药物鲍氏不动杆菌的临床分布及耐药特征,探讨插入序列ISAba1和碳青霉烯酶与其耐药的关系。方法收集270株耐碳青霉烯类药物的鲍氏不动杆菌,K-B法检测菌株的药物敏感性;改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;双纸片协同试验检测金属酶;多重PCR检测OXA-51、OXA-23、OXA-58、OXA-24、IMP、VIM、SIM,PCR检测ISAbal-OXA-23、ISAbal-OXA-51基因并进行测序分析;采用WHONET 5.6软件对菌株药敏结果进行统计分析。结果在检测的18种药物中,14种药物耐药率超过90.0%,哌拉西林耐药率最高为100.0%,头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低为48.9%;改良Hodge试验阳性156株,阳性率57.8%;金属酶表型检测均为阴性;270株菌均检测到了OXA-51基因,267株菌检测到OXA-23基因,1株检测到OXA-58基因,未检测到OXA-24、IMP、VIM、SIM基因;267株菌的OXA-23基因上游均检测到插入序列ISAbal,所有OXA-51基因上游均未检测到ISAbal。结论耐碳青霉烯类药物鲍氏不动杆菌耐药十分严重;OXA-51和OXA-23型碳青霉烯酶是本地区鲍氏不动杆菌的主要碳青霉烯酶;ISAba1常在OXA-23基因上游出现,ISAbalOXA-23是鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要机制。 豆清娅 邹明祥 李军 胡咏梅 王海晨 刘文恩关键词:鲍氏不动杆菌 碳青霉烯酶 耐药性 耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药机制的研究 被引量:10 2016年 目的 研究耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的耐药机制,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法 连续收集某院2011年1月-12月临床分离菌中非重复的肠杆菌科细菌2 203株,VITEK-2全自动微生物分析系统对其进行鉴定及药敏试验;改良Hodge试验初筛碳青霉烯酶;EDTA-亚胺培南(IPM)协同法和亚胺培南双纸片增效法确认金属酶表型;PCR法检测β-内酰胺酶基因及整合子基因,产物测序,BLAST软件比对分析。结果 2 203株肠杆菌科细菌中共检出17株CRE,检出率为0.7%;药敏结果显示,17株CRE菌株对常用抗菌药物高度耐药,除对阿米卡星和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率低,分别为35.3%和47.1%,对其他抗菌药物的耐药率在76.4%~100.0%;17株菌均检出blaTEM基因,6株肺炎克雷伯菌同时检出blaSHV基因,并且其中1株肺炎克雷伯菌同时携带blaKPC-2基因,其余基因均阴性;3种整合子中intⅠ基因为阳性,检出率高达70.6%。结论 携带blaTEM、blaSHV和blaKPC-2基因是导致该院肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的重要原因,Ⅰ类整合子在其耐药基因的转移方面起了十分重要的作用。 李军 邹明祥 王海晨 胡咏梅 豆清娅 晏群 刘文恩关键词:碳青霉烯类抗菌药物 肠杆菌科细菌 耐药性 耐药机制 整合子 某院2016年ICU与普通病房铜绿假单胞菌耐药性对比分析 被引量:19 2018年 目的了解某院2016年重症监护病房(ICU)与普通病房铜绿假单胞菌分布状况及其耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供科学依据。方法采用VITEK2 Compact全自动微生物分析系统对该院2016年临床分离菌株进行鉴定及药敏试验,比较ICU与普通病房铜绿假单胞菌耐药性的差异。结果 ICU与普通病房送检标本均以痰为主,分别占78.7%、66.5%。ICU铜绿假单胞菌的检出率(11.7%)与普通病房(11.0%)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ICU检出的铜绿假单胞菌对氨曲南耐药率最高,达73.8%,对哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、头孢他啶、亚胺培南、美罗培南的耐药率也高达50%以上;普通病房检出的铜绿假单胞菌对氨曲南耐药率最高,达59.6%,其次是哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南,分别为48.0%、44.3%;ICU铜绿假单胞菌对被检测的12种抗菌药物耐药率均高于普通病房(P<0.05)。结论 ICU铜绿假单胞菌的耐药率高于普通病房,应引起临床高度重视;临床上治疗其感染时,应根据药敏试验结果合理选用抗菌药物。 税剑 邹明祥 李军 王海晨 黄紫嫣 胡咏梅 刘文恩关键词:ICU 普通病房 铜绿假单胞菌 耐药性 携带bla_(NDM-1)基因革兰阴性杆菌的分子流行病学研究 被引量:1 2016年 目的了解临床分离碳青霉烯类不敏感革兰阴性杆菌中bla_(NDM-1)基因的分布,探讨NDM-1阳性菌株的分子流行病学特征。方法收集长沙地区2011年1月—2012年8月临床分离非重复碳青霉烯类不敏感革兰阴性杆菌,聚合酶链反应(PCR)技术筛查bla_(NDM-1)基因,扩增产物测序和BLAST软件分析。对bla_(NDM-1)基因阳性菌株,采用E试验法检测其药物敏感性、PCR法检测β内酰胺酶基因(包括bla_(DHA)、bla_(VIM)、bla_(IMP)、bla_(GIM)、bla_(CTX-M)、bla_(KPC)、bla_(TEM)和bla_(SHV)等)和16S r RNA甲基化酶基因、脉冲场凝胶电泳(PFGE)及多位点序列分型(MLST)技术进行分子生物学分型。结果共收集到687株碳青霉烯类不敏感的革兰阴性杆菌,其中3株被证实为bla_(NDM-1)基因阳性菌株,包括2株肺炎克雷伯菌(菌株编号CS11495和CS610)和1株阴沟肠杆菌(菌株编号CS30754)。该3株菌均来源于湘雅医院。在测试的12种抗菌药物中,除对阿米卡星和多黏菌素B敏感外,对其余抗菌药物几乎全耐药。菌株CS11495同时检出bla_(SHV-12)、bla_(TEM-1)、bla_(CTX-M-15)和bla_(IMP-4),菌株CS610携带bla_(DHA)、bla_(SHV-12)和bla_(TEM-1),菌株CS30754中bla_(SHV-12)和bla_(TEM-1)基因阳性。其余基因均为阴性。2株肺炎克雷伯菌PFGE分型可分为A、B两型。MLST显示,菌株CS11495、CS610和CS30754分别属于ST629、ST490及ST214,其中ST490为国内首次报道。结论 bla_(NDM-1)阳性菌株具有广泛的耐药谱,与其同时携带多种耐药基因有关。尽管本地区不存在克隆传播,但分布于同一医院的不同科室,应预防其播散。 李军 邹明祥 王海晨 胡咏梅 豆清娅 晏群 刘文恩关键词:革兰阴性杆菌 脉冲场凝胶电泳 多位点序列分型 同一患者不同部位分离耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制研究及同源性分析 被引量:10 2017年 目的对临床分离自同一患者不同部位的3株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌进行耐药机制研究及同源性分析。方法对某严重烧伤患者的股静脉导管尖端、创面分泌物及痰液标本中分离到的3株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌,采用改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,双纸片协同及增效试验检测金属β-内酰胺酶;PCR筛查耐药基因;肠杆菌科基因间重复序列-聚合酶链反应(ERIC-PCR)进行同源性分析,多位点序列分型技术(MLST)对肺炎克雷伯菌进行分子生物学分型。结果 3株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的改良Hodge试验均为阴性,双纸片协同及增效试验均为阳性;3株菌均检出blaNDM-1基因,而未检出bla_(KPC)、bla_(GES)、bla_(IMP)、bla_(SPM)、bla_(VIM)、bla_(GIM)及bla_(OXA-48)等耐药基因;ERIC-PCR显示3株菌为同一型别,MLST分型结果显示3株菌均属于ST17型。结论 3株肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制为携带bla_(NDM-1)基因,且这3株菌为同一克隆。 胡咏梅 邹明祥 李军 豆清娅 王海晨 晏群 刘文恩关键词:肺炎克雷伯菌 多位点序列分型