国家自然科学基金(30400112)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：邢薇代维吴砂沈关心朱慧芬更多>>
- 相关机构：华中科技大学华中科技大学同济医学院附属协和医院更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- pAd-SIG腺病毒质粒构建及其在MCF-7细胞中的表达被引量：1
- 2007年
- 目的含人生长抑素受体2亚型(human somatostatin receptor subtype2,hSSTr2)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的腺病毒重组质粒的构建及表达。方法采用PCR方法将hSSTr2以及IRES-EGFP基因亚克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV中,获得pShuttle-CMV/hSSTr2-EGFP,经PmeⅠ酶切,去磷酸化后转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183菌,细菌内同源重组构建腺病毒质粒pAdeasy-1/hSSTr2-EGFP(pAd-SIG),将其转染HEK293细胞进行病毒包装与滴度测定。重组腺病毒感染MCF-7细胞,流式细胞术检测其表达。结果酶切、PCR及基因测序证实重组腺病毒质粒pAd-SIG构建成功,病毒滴度为8.2×109IU/ml,流式细胞术结果显示hSSTr2在MCF-7细胞中表达阳性率为86.59%。结论成功构建了重组腺病毒质粒pAd-SIG,并能在真核细胞表达,为体内外研究hSSTr2效应提供了基础。
- 袁晓梅何勇雷萍邢薇吴砂代维朱慧芬沈关心
- 关键词：同源重组
