国家自然科学基金(20736008)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：浙江大学杭州九源基因工程有限公司华南理工大学更多>>
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- 精确测定rhG-CSF产品化学稳定性的RP-HPLC新方法
- 2011年
- 研究重组人粒细胞集落刺激因子的化学稳定性,需要寻找一种可靠的分析方法用于纯度测定,特别是用于准确测定其氧化产物。采用两种反相色谱柱C4柱和C18柱,探索出了一种新方法,并与《中国药典》2010版和《欧洲药典》EP6.3版,EP6.8版中的有关物质分析方法进行比较研究,通过对不同储藏条件下的样品进行检测,确定了新方法的最佳操作条件,包括柱温60℃、上样体积20~50μL和柱长15 cm,虽然柱长25 cm具有更高的氧化产物检出灵敏度,但是分离度有所下降。C4柱与C18柱相比,具有更好的灵敏度和分离度。还对新RP-HPLC方法进行了方法学验证,如检测限,专属性和耐用性等,该方法优于现行的《中国药典》2010版和《欧洲药典》EP6.8版的有关物质分析方法。
- 郭旺明陈海红王同映李辉黄磊蔡谨徐志南岑沛霖
- 关键词：化学稳定性
- 重组人粒细胞刺激因子化学稳定性的影响因素探讨被引量：1
- 2011年
- 重组人粒细胞刺激因子是一种非常重要的重组蛋白质药物,它容易发生蛋白质氧化。采用反相色谱法测定37℃加速试验和4℃长期稳定性试验中该产品的纯度变化,研究其保藏过程中的化学稳定性。考察了添加氧化剂和还原剂对产品的短期和长期稳定性作用,结果表明所有氧化剂包括过氧化氢和亚硝酸盐都具有较强的浓度效应而还原剂具有较强的pH依赖性。当亚硝酸盐浓度大于0.1 ppm时,具有明显的氧化作用。进一步考察了不同包装材料和过渡态金属离子对化学稳定性的作用。安瓿瓶火焰融封时会导致过渡态金属离子的溶出,结果表明亚铁离子催化活性最强,在0.05 ppm浓度下就具有明显的氧化作用。加入抗氧化剂L-Met能在一定程度上降低长期保藏过程中化学不稳定性,而添加金属螯合剂EDTA二钠能够明显提高该重组蛋白药物的化学稳定性。
- 郭旺明蔡谨黄磊徐志南岑沛霖
- 关键词：重组人粒细胞刺激因子化学稳定性
- 高效合成蛋白质的新策略-从体内到体外
- 近年来一种以外源mRNA或DNA为模板,通过在细胞抽提物中补充底物和能量物质的体外无细胞蛋白质合成系统越来越引起重视。与传统的体内系统相比,无细胞体系具有众多的优越性:1)反应简便,只需加入抽提物、DNA模板
- 徐志南
- 关键词：蛋白质合成合成生物学
- 文献传递
- Migrastatin族抗生素的研究进展
- 2010年
- Migrastatin族抗生素属于戊二酰亚胺大环内酯类抗真菌抗生素,具有抑制癌细胞迁移的活性,是很有发展潜力的新型抗肿瘤药物。文章对Migrastatin族抗生素的化学结构、生物合成、化学合成、生物活性等研究现状进行综述。
- 杨冬蔡谨黄磊徐志南
- 关键词：化学结构生物合成化学合成生物活性
- 小鼠白细胞介素6的克隆表达纯化及鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的构建小鼠白细胞介素6(mIL-6)工程菌,通过诱导表达和纯化,得到较高纯度的重组mIL-6融合蛋白。方法提取小鼠脾脏淋巴细胞总RNA,RT-PCR扩增得到mIL-6基因片段,克隆入pReceiver-B56x表达载体,转化BL21,诱导表达重组蛋白,采用亲和层析纯化。结果工程菌采用LB培养基,14℃、1mmol/L的IPTG诱导,表达量占菌体蛋白总量的33.3%,部分为可溶表达。超声破碎菌体,离心后取上清液,经过亲和层析一步纯化,目的蛋白纯度达91.3%。结论构建了高效表达mIL-6的工程菌,目的蛋白部分为可溶表达,为进一步研究白细胞介素6在促进凝血、造血等方面的生物学功能以及其与疾病发生发展的相互关系,并基于此基础上的相关药物开发研究奠定了基础。
- 华江舟王菊芳王小宁
- 关键词：白细胞介素6融合蛋白纯化
