国家自然科学基金(81000901)
- 作品数：15 被引量：73H指数：4
- 相关作者：姜忠敏刘晓智刘振林陈镭苏治国更多>>
- 相关机构：天津市第五中心医院天津市神经病学研究所杜克大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金天津市卫生局科技基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- CD133^+胶质母细胞瘤细胞的分离与恶性行为特征被引量：4
- 2012年
- 背景与目的:在恶性胶质瘤中存在一类恶性度极高的前体细胞,它们控制着肿瘤的生长与恶性演进,也是肿瘤复发的根源。本研究对胶质母细胞瘤进行肿瘤干细胞的分离与恶性行为特征分析,旨在验证胶质瘤干细胞的存在,并为未来该领域研究打下基础。方法:充分消化术中切除的胶质母细胞瘤组织块至单细胞悬液,流式细胞术检测CD133+肿瘤细胞百分率,免疫磁珠分选法分离CD133+和CD133-胶质母细胞瘤细胞;免疫荧光法检测两类细胞中巢蛋白(nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达水平;Transwell双室培养体系检测两类瘤细胞的侵袭能力,血清依赖实验检测两类瘤细胞在低营养条件下的生存能力,软琼脂克隆形成实验检测瘤细胞的克隆形成能力;去胸腺小鼠腹股沟皮下接种瘤细胞,观察成瘤率。结果:流式细胞术检测CD133+肿瘤细胞百分率为(2.31±0.57)%。CD133+细胞高表达nestin,低表达GFAP和NSE;CD133-细胞则相反。与CD133-细胞比较,CD133+细胞具有更高的细胞侵袭能力、低营养耐受能力和克隆形成能力。CD133+细胞在小鼠体内成瘤率为87%(26/30),CD133-细胞为7%(2/30)。结论:CD133+胶质母细胞瘤细胞具有更高的恶性细胞表型,提示其具有高度研究价值。
- 刘振林刘晓智陈镭姜忠敏刘洪赵玉军史万超李罡
- 关键词：胶质母细胞瘤干细胞侵袭力
- Par-6／aPKC极性蛋白重排促进胶质瘤侧群细胞快速增殖与分化被引量：1
- 2014年
- 目的 探讨Par-6/非典型蛋白激酶C（atypical protein kinase C,aPKC）极性蛋白重分布是否能促进胶质瘤侧群细胞快速增殖与分化.方法 实验分为对照组、无义序列组和siR-PKCξ组3组.免疫细胞荧光方法检测aPKC、Par-6和TRIM32（tripartite motif-containing protein 32 gene）在细胞中的定位,绘制细胞球体生长曲线,Ki67免疫荧光方法检测细胞核增殖活性,免疫荧光方法检测细胞标记蛋白的表达.结果 与对照组和无义序列组比较,siR-PKCξ组PKCζ蛋白表达水平明显降低（0.07±0.03,P＜0.01）,Par-6极性消失,TRIM32发生核转移.基因转染24 h,siR-PKCξ组Ki67阳性百分率为（48.65±11.34）％,均高于其他两组（P＜0.05）,转染72 h,siR-PKCζ组低表达CD133和Nestin,高表达GFAP（P ＜0.05）,β-tubulinⅢ和myelin表达无明显变化（P＞0.05）.结论 通过诱导Par-6/aPKC极性蛋白重排可促进胶质瘤侧群细胞快速增殖与分化.
- 刘晓智姜忠敏于士柱黄建永怀鹏李艳霞刘振林
- 关键词：神经胶质瘤细胞极性RNA干扰
- RNAi沉默AQP-4技术治疗胶质瘤性脑水肿的实验研究被引量：2
- 2012年
- 目的应用RNA干扰（RNAi）技术靶向沉默胶质瘤内水通道蛋白4（AQP-4）的表达，观察其对胶质瘤源性脑水肿的治疗效果。方法构建靶向AQP-4的siRNA质粒，免疫荧光化学方法检测其对C6细胞AQP-4的沉默效果；建立sD大鼠颅内c6胶质瘤模型，分对照组、空载组、无义序列组和siRNA组；聚合酶链式反应和蛋白印迹方法分别检测第3、6、9、12天AQP-4的mRNA和蛋白水平；干／湿比重法和Evans蓝测定法检测不同时相脑组织含水量和血脑屏障通透性改变；比较动物生存期。结果siRNA可沉默AQP-4表达；siRNA组脑组织水含量和血脑屏障通透性均明显低于对照组、空载组和无义序列组，动物生存期最长。结论靶向AQP-4的RNAi技术可在-定程度上减轻胶质瘤性脑水肿的发生和发展，为胶质瘤脑水肿提供了-种新的治疗策略选择。
- 梁冰刘晓智张赛苏治国陈镭姜忠敏于士柱刘振林
- 关键词：神经胶质瘤脑水肿水通道蛋白RNA干扰
- 早期乳腺癌超声诊断中血流动力学表现与EB病毒感染对BI-RADS分级的影响及相关性分析被引量：22
- 2019年
- 目的观察早期乳腺癌患者在超声诊断中的血流动力学表现特征,并就合并EB病毒感染患者对BI-RADS分级的影响及与乳腺癌发生的相关性进行分析。方法选取医院2016年8月-2018年1月收治确诊的68例早期乳腺癌患者为研究对象,同时选择60例乳腺良性病变患者进行对照研究,观察良、恶性肿瘤患者彩色多普勒血流显像(CDFI)血流信号差异,分析乳腺癌患者EB病毒感染情况以及对BI-RADS分级的影响及与乳腺癌发生的相关性。结果乳腺癌患者与乳腺良性病变患者胸廓动脉血流动力学各项参数比较均无统计学意义;研究组患者血流信号丰富,CDIF血流分级组间检验结果差异有统计学意义(P<0.05);68例乳腺癌患者中检出EB病毒感染19例,良性病变患者中未检出,比较差异有统计学意义(P<0.05);EB病毒与BI-RADS分级无明显相关,合并EB感染患者多为BI-RADS4/5级。结论多普勒超声能够有效鉴别乳腺良、恶性病变的血流情况,测定血流动力学参数可作为主要诊断标准,且合并EB感染患者多为BI-RADS高分级患者,但无明显相关性。
- 刘丽郑末陈霰姜忠敏陈敬一
- 关键词：乳腺癌血流动力学EB病毒超声诊断
- 脑胶质瘤中miR-7与EGFR/PI3K信号通路相关基因蛋白表达的关系被引量：4
- 2014年
- 目的观察脑胶质瘤组织、U251细胞中miR-7、EGFR/PI3K信号通路相关基因蛋白(EGFR、PI3K和AKT2)的表达关系。方法 42例脑胶质瘤患者,手术切除取肿瘤组织,其中8例选取癌旁正常脑组织。培养脑胶质瘤U251细胞,分为空白对照组(仅加入脂质体)、无义序列组(加入无义序列和脂质体)、miR-7转染组(转染miR-7基因片段)。采用RT-PCR法检测脑胶质瘤组织、各组U251细胞中的miR-7;免疫组化法检测胶质瘤组织中的EGFR、PI3K和AKT蛋白,RT-PCR和Western blotting法分别检测各组U251细胞EGFR、PI3K、AKT2 mRNA和蛋白。结果脑胶质瘤和正常脑组织中的miR-7 mRNA表达分别为1.47±0.27和3.47±0.15,两者比较,P<0.05。随着脑胶质瘤WHO级别的增加,miR-7表达逐渐减少,EGFR、PI3K和AKT2表达增加(P均<0.05)。脑胶质瘤组织中miR-7与EGFR、PI3K、pAKT表达呈负相关(r分别为-0.754、-0.528、-0.467,P均<0.05)。U251细胞转染miR-7后EGFR、PI3K和AKT表达降低(P均<0.05)。结论脑胶质瘤组织中miR-7表达减少,与EGFR/PI3K通路成员表达呈负相关;U251细胞转染miR-7后EGFR、PI3K和AKT表达降低。EGFR/PI3K通路可能是miR-7调控胶质瘤发生发展的重要机制之一。
- 刘亮洪张洪云刘晓智张立东姜忠敏
- 关键词：脑肿瘤胶质瘤EGFRPI3K信号通路
- 叶酸/聚酰胺-胺作为miR-7基因载体的胶质瘤靶向性研究被引量：1
- 2012年
- 目的检测叶酸/聚酰胺-胺(FA/PAMAM)作为miR-7基因载体的细胞转染效率及其胶质瘤靶向功能,为研发高效小分子靶向投递药物奠定基础。方法透析法制备FA/PAMAM络合物,透射电子显微镜观察粒子形貌;以其为载体转染miR-7至人脑胶质瘤细胞系U251,荧光显微镜观察络合物转染效率,qRT-PCR方法检测miR-7水平;制作去胸腺小鼠颅内U251胶质瘤模型,分别经尾静脉、颈内动脉及肿瘤原位进行络合物移植,48 h后取脑制作冰冻切片,荧光显微镜观察络合物在肿瘤内的聚集程度;蛋白印记(Western blot)法检测miR-7靶基因EGFR和细胞增殖活性抗原(PCNA)的蛋白表达。结果粒子形貌规整,与U251细胞共培养48 h后可获得高效转染,并显著提高miR-7水平。经尾静脉、颈内动脉及肿瘤原位三种途径移植后获得的冰冻切片中均可发现络合物粒子在肿瘤部位的聚集,但聚集程度为尾静脉<颈内动脉<肿瘤原位。Western blot结果示EGFR和PCNA水平较对照组均有不同程度下降(P<0.05)。结论 FA/PAMAM能够高效投递miR-7基因至体内、外胶质瘤细胞,有望成为一种新的高效小分子靶向投递药物进行胶质瘤基因治疗。
- 刘振林李罡苏治国王骏飞赵玉军陈镭刘洪良姜忠敏刘晓智
- 关键词：胶质瘤微小RNA表皮生长因子受体
- 叶酸／聚酰胺-胺介导miR-7治疗小鼠胶质瘤被引量：14
- 2012年
- 目的探讨叶酸／聚酰胺-胺（FA／PAMAM）介导的微小RNA-7（miR-7）基因治疗体内胶质瘤的实际效果。方法以络合物FA／PAMAM为基因载体转染miR-7至人脑胶质瘤细胞系U251，荧光下观察转染效率，逆转录定量PCR（qRT-PCR）检测miR-7水平。制备去胸腺小鼠颅内U251胶质瘤模型，于成瘤后第3天在肿瘤原位实施络合物移植，M砒动态观察荷瘤小鼠颅内肿瘤体积及水肿变化，记录小鼠生存期。荷瘤小鼠瘤组织切片行原位凋亡检测，免疫组织化学法检测细胞增殖活性抗原（PCNA）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）和MMP-9的表达，Westernblot法检测表皮生长因子受体（ECFR）和丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶2（AKT-2）的蛋白表达量。结果与脂质体转染比较，FA／PAMAM对miR-7具有更高的基因转染效率。M砌显示，FA/PAMAh量／miR-7组的肿瘤体积增长速度明显低于脂质体／mia-7组，小鼠生存期延长。对照组的细胞凋亡率为（5．3±0．9）％，脂质体／miR-7组的细胞凋亡率为（11．4±2．4）％，FA／PAMAM／miR-7组的细胞凋亡率为（17．7±3．7）％，FA／PAMAM／miR-7组的细胞凋亡率明显增加。免疫组化结果显示，PCNA、MMP-2和MMP-9在对照组中的阳性率分别为（57．3±7．4）％、（45．4±6．9）％和（55．1±7．3）％，在脂质体／miR-7组中分别为（49．3±5．9）％、（31．7±7．1）％和（39．4±6．4）％，在FA／PAMAM／miR-7组中分别为（34．6±5．4）％、（24．5s4．1）％和（25．4S5．1）％。EC,FR和AKT-2蛋白在对照组中的相对表达强度分别为1．09±0．12和0．62±0．10，在脂质体/miR-7组中分别为0．63±0．11和0．43s0．07，在FA／PMM／面R-7组中分别为0．47s0．09和O．31S0．04。FA／PAMAM／miR-7组中PCNA、MMP-2、MMP-9、EGFR和AKT-2蛋白的表达水平均有不同程度下降（均P〈0．05）。结论FA／PAMAM具有较脂质体更高的基因转染效率，药物作用时间�
- 刘晓智苏治国姜忠敏李罡宋军黄凯王亮陈镭刘振林
- 关键词：胶质瘤微小RNA表皮生长因子受体小鼠络合物
- 水通道蛋白4和缝隙连接蛋白43的表达及与胶质瘤性脑水肿的关系被引量：3
- 2013年
- 目的研究水通道蛋白4(AQP4)和缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达以及其在胶质瘤性脑水肿间的关系和两者的相关性。方法选择胶质瘤患者40例,瘤周相对正常脑组织20例。利用免疫组织化学方法检测胶质瘤及对照组中AQP4和Cx43的表达水平,同时结合患者影像学资料计算瘤周水肿指数(EI),分析AQP4和Cx43表达与胶质瘤性水肿的关系及两者的相关性。结果随着胶质瘤水肿程度的增加,AQP4表达随之增加,Cx43表达随之减少。胶质瘤各组间两两比较,无水肿与轻度水肿间差异均无统计学意义,其余各组间差异均有统计学意义。两者间无显著相关性。结论 AQP4和Cx43在胶质瘤脑水肿的发生发展过程中起着重要作用,两者作用机制是否相关及能否成为新的治疗靶点尚需进一步研究。
- 曹欣成平姜忠敏刘晓智曾雅清
- 关键词：水通道蛋白4缝隙连接蛋白43
- miR-7沉默EGFR/PI3K通路逆转脑胶质瘤U251细胞的恶性表型被引量：11
- 2011年
- 目的:探讨利用微RNA(microRNA-7,miR-7)靶向沉默表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)/磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol kinase-3,PI3K)通路途径逆转脑胶质瘤的恶性表型。方法:利用脂质体转染法将带有miR-7基因序列的表达质粒转入人脑胶质瘤细胞株U251中;采用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)方法检测转染细胞中miR-7的表达水平;免疫细胞化学法和蛋白质印迹法检测EGFR、PI3K和AKT2蛋白的表达情况;绘制细胞生长曲线,FCM法检测细胞周期变化,Transwell小室法检测瘤细胞迁移能力,软琼脂克隆形成实验检测肿瘤细胞致瘤性。结果:RFQ-PCR结果显示,miR-7基因转染组细胞中miR-7水平明显高于对照组和无义序列组;蛋白质印迹法检测结果显示,转染组U251细胞中EGFR、PI3K和AKT2蛋白的水平较对照组均有明显降低(P<0.05);U251细胞增殖速度减慢,处于S期的细胞所占比例减少,细胞迁移及软琼脂克隆形成能力均有明显降低(P<0.05)。结论:转染miR-7可有效沉默胶质瘤U251细胞中EGFR/PI3K通路主要成员蛋白的表达,进而逆转其恶性表型,有望成为一种新的胶质瘤基因治疗方法。
- 刘晓智姜忠敏陈镭刘洪良史万超张合亮刘振林
- 关键词：神经胶质瘤U251细胞
- 不同物理密度介质诱导干细胞表达多种组织细胞标记蛋白被引量：3
- 2012年
- 干细胞凭借其多组织分化潜能，成为当前医学界包括血液科、神经科、心脏科、骨科、皮肤科等在内的多学科研究热点^[1-3]。我们在近期工作中偶然发现将干细胞移植到特定物理密度的材料表面时，干细胞有顺材质硬度分化的特性。
- 刘晓智刘振林姜忠敏陈镭苏治国王骏飞李罡
- 关键词：组织细胞标记蛋白干细胞移植介质分化潜能
