国家自然科学基金(81161120549)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：黄娜胡丽丽刘利英杨阳王爱英更多>>
- 相关机构：西安交通大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- SCN5A基因L812Q突变体细胞模型的建立与细胞定位被引量：1
- 2016年
- 目的建立SCN5A基因L812Q突变体细胞模型,并细胞定位。方法应用重叠PCR的方法构建SCN5A基因L812Q突变;以p MD19-T载体克隆SCN5A基因L812Q突变体;SCN5A-L812Q通过EcoRⅠ和ACCⅠ限制性内切酶位点插入表达载体质粒p EGFP-C1-h H1中,测序鉴定;将构建好的p EGFP-C1-h H1-L812Q突变型质粒、p EGFP-C1-h H1野生型质粒瞬时转染进入HEK293细胞,通过免疫荧光检测L812Q突变的细胞定位;将p EGFP-C1-h H1、p EGFP-C1-h H1-L812Q和p EGFP-C1-h H1+p EGFP-C1-h H1-L812Q分别转染进入HEK293细胞,用Western blot方法分析L812Q突变体的表达。结果测序结果显示p EGFP-C1-h H1-L812Q表达载体构建成功。荧光检测验证,野生型SCN5A主要定位在细胞膜上,而突变型定位在细胞质中。通过Western blot分析发现,突变型通道蛋白在细胞质中的表达量高于野生型。结论本研究成功构建了SCN5A基因突变载体p EGFP-C1-h H1-L812Q,证明SCN5A基因L812Q突变型主要定位在细胞质中。
- 倪磊许德晖刘利英王爱英汪鲁敏
- 关键词：BRUGADA综合征SCN5A基因基因突变细胞定位
- HERG基因G572R突变体表达载体的构建及其稳定转染细胞系的建立被引量：1
- 2014年
- 目的构建HERG基因G572R突变体表达载体并建立其稳定转染HEK293的细胞系。方法应用重叠延伸PCR构建HERG-G572R突变体表达载体,经G418筛选稳定转染细胞系,通过Real-Time PCR,Western blot及测序鉴定稳定转染细胞系。结果经序列比对,证明HEK-HERG-G572R突变体表达载体构建成功,Real-Time PCR,Western blot及测序证明稳定转染细胞系构建成功。结论该方法可成功构建的HKE-HERG-G572R细胞株,为药物个体化治疗提供工具。
- 杨阳黄娜高岭常素娥郭波胡丽丽宋土生黄辰
- 关键词：HERG基因HEK293转染突变体
