国家自然科学基金(30171020)
- 作品数：8 被引量：12H指数：3
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- 相关机构：广州市第一人民医院四川大学华西口腔医院更多>>
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- 地塞米松对体外培养A系小鼠腭突腭中嵴上皮融合的影响被引量：5
- 2005年
- 目的 研究在腭间充质存在的情况下,地塞米松对腭中嵴上皮细胞分化、转归的影响,以探讨地塞米松引起腭裂畸形的发病机制。方法 A系小鼠妊娠14d 8h在体视显微镜下,解剖分离出A系小鼠胚胎腭突,应用半浸静式腭突体外培养方法,通过光学显微镜和透射电镜观察在腭突接触融合时,地塞米松对腭中嵴上皮细胞的影响。结果 地塞米松促进了腭中嵴上皮分化成复层鳞状上皮,加速了腭间充质分化过程,影响了腭突的正常发育,阻碍腭突融合。结论 地塞米松可能通过加速腭间充质分化和抑制腭中嵴上皮正常转归的双重作用,阻碍腭的正常发育过程。
- 黄磊石冰孙晋虎王
- 关键词：腭裂腭突地塞米松
- 腭裂相关基因TTF-2转基因小鼠载体的构建及体外表达被引量：1
- 2011年
- 目的扩增及克隆C57BL/6j小鼠titf-2基因并利用小鼠骨髓间充质细胞进行表达.方法从C57BL/6j小鼠肝脏组织中提取基因组DNA,用PCR从中扩增出titf-2基因片段.将titf-2基因片段插入载体pMD18-T中,经全自动序列分析仪测序正确后,再克隆至表达载体pBROAD3-mcs中,构建重组表达载体pBROAD3-mcs-titf-2,并转染小鼠骨髓间充质细胞进行表达.用羊抗鼠TTF-2多抗IgG对表达产物进行Western Blot签定.结果 DNA测序结果证实,获得titf-2基因片段,大小与理论值相符;Western Blot分析表明,表达出TTF-2约为4.2KDa大小的蛋白.结论成功扩增、克隆titf-2基因,并在小鼠骨髓间充质细胞中得到表达,为下一步建立titf-2转基因小鼠模型奠定了基础.
- 黄磊石冰郑谦王龑宋庆高
- 关键词：克隆WESTERN
- TTF-2和TGFβ3在C57BL/6J小鼠腭突发育过程中的表达变化被引量：5
- 2011年
- 目的探讨C57BL/6J小鼠继发腭发育过程中,甲状腺转录因子-2(TTF-2)和重组人转化生长因子β3(TGFβ3)的表达及其相互作用规律。方法于妊娠12、13、14d分别断颈处死各6只孕鼠,无菌条件取出胚胎,解离腭突。应用免疫组织化学染色和Western印记方法检测TTF-2和TGFβ3在腭突中嵴上皮细胞的表达。结果在G57BL/6J小鼠胚胎的腭突形成、上抬和融合的发育过程中均有TTF-2的表达,以13d为最高,免疫组织化学和Western印记结果一致。TGFβ3在腭突形成时,腭突中嵴上皮细胞未检测到其表达。腭突上抬时,首次在腭中山嵴上皮细胞中发现TGFβ3表达,两侧腭突融合时,TGFβ3在腭中嵴上皮中的表达最明显,当腭突融合完成后,TGFβ3在腭中嵴上皮中表达减少。结论 TTF-2和TGFβ3两种细胞因子均在腭突中嵴上皮细胞中表达,表明与其分化转归相关。
- 黄磊石冰宋庆高王龑郑谦
- TTF-2在甲状腺转录因子-2转基因小鼠腭突发育过程中的表达
- 2015年
- 目的探讨甲状腺转录因子-2转基因小鼠继发腭发育过程中,TTF-2 m RNA及蛋白表达的规律.方法于妊娠12 d、13 d、14 d、15 d分别断颈处死各3只孕鼠,无菌条件取出胚胎,解离腭突.应用RT-PCR技术和Western印记方法检测TTF-2在腭突中的表达.结果在甲状腺转录因子-2转基因小鼠胚胎的腭突形成、上抬和融合的发育过程中均有TTF-2的表达,但m RNA及蛋白表达水平变化无统计学意义(P>0.05),RT-PCR检测和Western印记结果一致.结论甲状腺转录因子-2转基因小鼠继发腭发育过程中,TTF-2在腭突中的持续高表达,这可能是甲状腺转录因子-2转基因小鼠出现腭裂的原因之一.
- 黄磊倪旭英石冰郑谦蒙田王龑
- 关键词：转基因小鼠腭突
- 腭裂相关基因甲状腺转录因子-2转基因小鼠的生物学特征被引量：4
- 2014年
- 目的建立腭裂相关基因甲状腺转录因子-2(TTF-2)转基因小鼠模型,利用转基因动物模型研究TTF-2基因的活动规律和表达模式发生变化时对腭突发育过程产生的影响。方法采用聚合酶链反应法扩增C57BL/6J小鼠基因组TTF-2基因,将其定向插入pBROAD3-mcs载体,构建重组表达质粒pBROAD3-TTF-2,利用显微注射技术把线性化表达载体注射到受精卵的雄原核中,建立TTF-2转基因小鼠。利用特异引物聚合酶链反应和Southern blot方法鉴定转基因小鼠的基因型,采用免疫组织化学法检测TTF-2基因在转基因小鼠腭突组织中的表达。结果共注射原核期受精卵982枚,发育为2-细胞胚胎的580枚,均移植入48个假孕受体昆明白小鼠中,得到胎鼠68只。提取基因组DNA,发现有13只转基因阳性的胎鼠。免疫组织化学法检测显示TTF-2在转基因小鼠腭突中持续表达。结论通过显微注射法使外源基因pBROAD3-TTF-2整合入小鼠基因组中,成功建立了腭突持续表达TTF-2的转基因小鼠模型,其表现型为腭裂。
- 黄磊石冰郑谦蒙田王
- 关键词：转基因小鼠腭裂
- 腭裂相关基因TTF-2转基因小鼠模型的制备过程
- 2015年
- 目的建立表达TTF-2的转基因小鼠。方法利用显微注射技术把线性化表达载体p BROAD3-TTF-2注射到小鼠受精卵的雄原核中,建立TTF-2转基因小鼠。采用PCR、Southern印迹的方法对转基因小鼠进行鉴定。结果得到胎鼠68只和2只腭裂新生鼠,切鼠尾提取基因组DNA经PCR和Southern印迹方法检测发现13只转基因阳性胎鼠,包括2只腭裂新生鼠。腭裂小鼠出生后24小时死亡。结论获得了TTF-2转基因小鼠,表现型为腭裂,为腭裂发生机制的研究提供一种良好的动物模型。
- 黄磊庄庆石冰蒙田郑谦
- 关键词：转基因动物显微注射
- 小鼠甲状腺转录因子-2转基因动物表达载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达被引量：1
- 2013年
- 目的构建小鼠甲状腺转录因子-2(TTF-2)转基因动物表达载体(pBROAD3-TTF-2),观察其在小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)中的表达。方法从C57BL/6J小鼠肝脏组织中提取基因组DNA,利用聚合酶链式反应方法扩增出TTF-2基因1 113 bp开放阅读框,通过DNA重组技术将TTF-2基因片段插入克隆载体pMD18-T中,经测序正确后,再重组于pBROAD3-mcs中,构建转基因动物表达载体pBROAD3-TTF-2,用酶切电泳分析对其进行鉴定。运用脂质体转染试剂将其转染BMSC后,蛋白质印迹法检测TTF-2基因的表达。结果①DNA测序证实目的基因序列正确无突变,酶切电泳分析得到相应的目的片段,大小与理论计算值一致,成功构建转基因动物表达载体pBROAD3-TTF-2。②蛋白质印迹法显示转染的BMSC高表达TTF-2蛋白。结论成功构建了pBROAD3-TTF-2转基因动物表达载体,显示其转染BMSC后TTF-2基因的表达,为下一步建立TTF-2转基因小鼠模型奠定了基础。
- 黄磊石冰郑谦蒙田王龑
- 关键词：骨髓间质干细胞转染基因小鼠
- 甲状腺转录因子-2在C57BL/6J小鼠腭突发育过程中的时空变化被引量：1
- 2015年
- 目的探讨C57BL／6J小鼠继发腭发育过程中，甲状腺转录因子（TTF）-2表达的时空变化规律，探讨TTF-2在腭突形成中的作用。方法于小鼠妊娠12、13、14、15d分别断颈处死各6只孕鼠，无菌条件取出胚胎，解离腭突。应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Westernblot和免疫组织化学染色方法定量、定位检测TTF-2在腭突中的表达。结果免疫组织化学定位检查在C57BL／6J小鼠的腭突发育过程（E12-E14）中，在腭突中嵴上皮细胞均有TTF-2的表达，而在腭突问充质细胞未见TTF-2的表达；腭突融合时，已不能检测到TTF-2表达。TTF-2在腭突形成、上抬、接触的表达差异具有统计学意义（P〈0．05），以E13为最高，RT-PCR和Westernblot结果一致。结论TTF．2在腭突发育过程中的表达有时空性，推测TTF-2与腭突中嵴上皮细胞的分化抑制和转归相关。
- 黄磊倪旭英石冰郑谦蒙田王
- 关键词：逆转录聚合酶链反应免疫组织化学
