国家科技重大专项(2002AA2Z345B)
- 作品数：11 被引量：158H指数：6
- 相关作者：刘志敏薛冲赵洪亮张伟闫训友更多>>
- 相关机构：军事医学科学院西南农业大学廊坊师范学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程轻工技术与工程更多>>
- 重组人载脂蛋白AI米兰突变体在大肠杆菌中的可溶性表达
- 2005年
- 载脂蛋白AI米兰突变体(apoliproteinA_I_Milano ,AIM)是载脂蛋白AI的天然突变体,具有比载脂蛋白AI更强的抗动脉粥样硬化症的作用。将AIM基因N_末端的氨基酸密码子优化后,克隆至表达载体pET2 2b ,重组质粒转化BL2 1(DE3)宿主菌,用IPTG诱导表达。AIM以可溶形式表达,约占菌体总蛋白的38%。表达产物经ButylSepharose 4F .F疏水层析和QSepharoseH .P .阴离子交换层析后,再用Vivaspin2 0 (30 0 0 0MW)进行超滤,AIM单体的纯度达95 %以上。AIM单体与脂结合活性表明,AIM单体结合脂的速度比apoA_I慢,但结合脂的量比apoA_I高。这项研究为AIM的结构和功能,特别是临床应用研究奠定了基础。
- 黎明赵洪亮薛冲张伟张士猛刘志敏
- 载脂蛋白A-Ⅰ抗动脉粥样硬化的研究进展被引量：14
- 2003年
- 载脂蛋白A Ⅰ是HDL最主要的结构成分 ,是卵磷脂胆固醇酰基转移酶的主要激活剂。它决定了HDL的代谢和在血浆中的浓度。实验已经证明 ,载脂蛋白A Ⅰ具有抗动脉粥样硬化症的功能。在这里阐述了载脂蛋白A Ⅰ的结构和制备 ;载脂蛋白A Ⅰ和HDL的关系以及它在抗动脉粥样硬化方面的作用和可能的机理 :胆固醇的逆向转运。
- 黎明刘志敏
- 关键词：载脂蛋白A-I动脉粥样硬化高密度脂蛋白卵磷脂胆固醇酰基转移酶
- 二硫键异构酶被引量：10
- 2005年
- 天然二硫键的形成是许多蛋白正确折叠中的限速步骤,在稳定蛋白质构象和保持蛋白质 活性方面起重要作用。讨论的二硫键异构酶是内质网中一种重要的蛋白折叠催化剂,它催化蛋 白二硫键的形成和错误配对二硫键的重排,并有抑制错误折叠蛋白聚集的分子伴侣活性。PDI 广泛应用于基因工程上提高外源蛋白表达水平。
- 熊向华刘志敏
- 关键词：二硫键异构酶蛋白折叠分子伴侣
- 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)在毕赤酵母中的高效表达
- 2004年
- 从人胎盘总RNA中通过RT PCR方法获得sTRAIL基因的cDNA ,并通过构建高拷贝表达载体在毕赤酵母中获得了高效表达 ,表达量可达 4 0 1mg L。并对表达产物进行了分离纯化和生物学活性分析 ,获得了纯度大于 90 %的纯品 ,该样品能明显表现出诱导L92 9肿瘤细胞凋亡的作用 ,半数致死量为 0 1 8μg mL 。
- 张伟赵洪亮薛冲刘志敏黎明张士猛
- 关键词：TRAIL毕赤酵母
- 新型载体蛋白P64K在大肠杆菌中的可溶性表达与纯化被引量：8
- 2004年
- 用常规PCR方法从脑膜炎球菌中克隆出P64K基因,构建重组质粒pET28a-P64K转化BL21穴DE3雪宿主菌,经IPTG诱导表达筛选P64K蛋白的高表达菌株。结果证实P64K蛋白为胞内可溶性表达,表达量约占胞内总蛋白的30%。重组P64K蛋白经Butyl疏水柱、G200分子筛柱和Q阴离子柱三步层析后纯度达到95%以上,为今后进一步的功能和应用研究打下了良好的基础。
- 熊向华赵洪亮薛冲张伟杨秉芬刘志敏
- 关键词：载体蛋白大肠杆菌可溶性表达纯化重组质粒
- 基质金属蛋白酶组织抑制剂-2基因的人工合成与克隆被引量：1
- 2005年
- 根据GenBank报道的基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)氨基酸序列和毕赤酵母偏爱密码子设计,通过化学方法合成得到适合在毕赤酵母中表达的目的TIMP-2基因序列,并将其克隆到质粒pPIC9中,构建了pPIC9-T2表达载体,PCR鉴定及测序结果表明得到了正确的TIMP-2基因序列。
- 闫训友赵洪亮张惟广薛冲熊向华刘志敏
- 关键词：基质金属蛋白酶组织抑制剂克隆GENBANK偏爱密码子PCR鉴定
- 重组人载脂蛋白AI米兰突变体在大肠杆菌中的高表达被引量：3
- 2003年
- 用RT-PCR法从人肝总RNA库中克隆出人载脂蛋白AI的cDNA序列,再通过重叠PCR将载脂蛋白AI的第179位精氨酸密码子突变成半胱氨酸密码子,即载脂蛋白AI米兰突变体基因。将此目的基因克隆至表达载体pQE30,重组质粒转化JM109宿主菌,经表达试验筛选出高表达克隆;工程菌经诱导后表达出含6个氨基酸前肽的载脂蛋白AI米兰突变体。表达产物主要以可溶形式存在,但也有部分为包涵体。
- 黎明赵洪亮薛冲张伟张士猛熊向华刘志敏
- 关键词：大肠杆菌
- TIMP-2在毕赤酵母中的克隆与表达被引量：2
- 2006年
- 为了克隆人基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)基因,并在Pichia pastoris中表达,根据GenBank上的TIMP-2的氨基酸序列和毕赤酵母偏爱密码子,通过化学合成和PCR相结合的方法获得了人的TIMP-2基因全长序列,构建了pPIC9-T2表达载体,电击转化到毕赤酵母,通过表型筛选和诱导表达得到蛋白表达工程菌,并对表达产物进行了分离纯化和生物学活性分析。
- 闫训友赵洪亮张惟广薛冲刘志敏
- 关键词：活性
- 阿尔茨海默氏症的研究进展被引量：6
- 2003年
- 阿尔茨海默氏症是影响人类健康的主要疾病之一 ,也是目前人们研究的热点。除对人们普遍接受的阿尔茨海默氏症的病因———Aβ假说进行了综述分析 ,还对目前流行的阿尔茨海默氏症的几种治疗方法 (如 :β、γ分泌酶抑制剂、抗炎症药物、降低胆固醇水平药物、金属螯合剂、抗神经退化药物等 )的研究进行了介绍 ,特别是对Aβ疫苗的最新研究进展和前景进行综述分析 。
- 张伟刘志敏
- 关键词：阿尔茨海默氏症病因
- 纤维素酶在食品工业中的应用进展被引量：65
- 2004年
- 纤维素酶在食品工业中具有广泛的应用价值。本文就纤维素酶的理化性质进行了阐述;探讨了纤维素酶的来源、制备及提取方法;重点论述了纤维素酶在发酵、食品加工以及其他方面的应用;对该酶在食品工业中的潜在应用价值作了展望。
- 闫训友史振霞张惟广刘志敏
- 关键词：纤维素酶食品工业食品加工发酵理化性质重点论
