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ATR-Chk1-Cdc25信号通路参与盘基网柄菌G2/M转变期的调控: 2014年; 显微镜观察盘基网柄菌野生型KAx--3细胞和突变型RNAi-allC细胞,计数结果表明后者的单细胞繁殖速度约为前者的8倍.为探究该突变型盘基网柄菌细胞周期缩短的原因,用荧光定量PCR和western blot研究了ATR-Chk1Cdc25信号通路在其中的可能作用.实验结果表明:RNAi-allC细胞中cdc25基因相对表达量约为KAx-3细胞的8倍,而其Chk1与ATR基因的相对表达量却明显低于KAx-3细胞.突变细胞中Cdc25蛋白含量高于KAx-3细胞,但其Chk1蛋白含量却显著低于KAx-3细胞.这些数据表明,两种类型细胞之间的ATR、Chk1、Cdc25在mRNA水平和蛋白表达上均存在差异,特别是ATR基因表达量的不同明显影响ChK1和Cdc25的表达量,提示ATR-Chk1-Cdc25信号通路应该在一定程度上参与了盘基网柄菌细胞周期G2/M期的调控.; 程小凤侯连生; 关键词：Q-PCR WESTERNBLOT

盘基网柄菌KAx-3中类免疫细胞的初步研究被引量：1: 2012年; 以Ethidium bromide(EB)代替盘基网柄菌生长环境中所遇到的毒物,检测盘基网柄菌中是否存在能吞噬毒物的特定细胞.荧光显微镜下观察,细胞丘时期仅能看到EB加入后显现的暗红色轮廓;Hoechst33342定位细胞核,以确证EB被吞噬进细胞内;蛞蝓体时期少数细胞有明显的强荧光反应,随着蛞蝓体的爬行,含EB的细胞团被丢弃在遗弃的粘液鞘中.表明多细胞发育至蛞蝓体阶段存在一种能吞噬EB的细胞,最终将EB排出体外.流式细胞术检测发现,该类特殊的细胞主要来自于前柄细胞.结果显示,盘基网柄菌中存在简单的内在免疫细胞,为研究免疫系统在生物体的发生和发展提供了研究基础.; 梁静静田莉李丽侯连生; 关键词：盘基网柄菌 ETHIDIUM

细胞色素c在盘基网柄菌细胞凋亡中的作用被引量：1: 2011年; 细胞色素c在细胞凋亡中发挥着重要的作用,其作用机理在高等真核生物及低等真核生物酵母中已经比较清楚,但在盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)中的作用却没有相关报道。所以我们用western blot和实时荧光定量PCR的方法分别测定了盘基网柄菌前柄细胞和前孢子细胞中细胞色素c的含量及表达量的变化,来探讨细胞色素c在盘基网柄菌前柄细胞凋亡中的作用。结果显示,①凋亡的前柄细胞发育16～20 h的过程中,线粒体内细胞色素c含量呈递减趋势,与之相反的是胞质中细胞色素c的含量却呈现出递增趋势。前柄细胞细胞色素c总含量高于前孢子细胞。②前柄细胞中细胞色素c基因的表达水平明显高于前孢子细胞,并且呈现出递增的趋势,而在前孢子细胞中细胞色素c基因的表达量比较稳定。两个研究结果相互印证,说明细胞色素c在一定程度上参与了盘基网柄菌前柄细胞的凋亡过程。; 叶平宋金辉侯连生; 关键词：盘基网柄菌细胞色素C 线粒体细胞凋亡

盘基网柄菌突变型细胞allC的细胞周期异常被引量：1: 2014年; 研究盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)细胞周期的相关问题可以为真核生物细胞周期调控研究提供理论基础。细胞计数和细胞倍增时间计算的结果表明,突变allC细胞的倍增时间为2.36 h,仅为KAx-3细胞倍增时间的1/3。进一步利用流式细胞术测定两种细胞的细胞周期,并结合实时荧光定量PCR技术测定cycB1和cdk1基因的相对表达量的比值,我们发现,培养16 h的allC细胞处于G2期的数目(1.51%)显著少于KAx-3细胞(16.61%)(P<0.05)。allC细胞和KAx-3细胞的细胞周期素B1(cyclinB1,cycB1)基因相对表达量分别是2.5和0.24(P<0.05),两者相差10倍。两种类型细胞中处于G2期的细胞数目差异十分明显,cycB1的相对表达量也存在显著差异,表明cycB1的过表达可能在一定程度上影响allC细胞的细胞周期正常的调控机制,与突变细胞的G2期异常有一定关系,但具体机制仍需进一步探究。; 周子康罗倩侯连生; 关键词：流式细胞细胞周期异常 CYCLINB1

RasG及相关蛋白与盘基网柄菌细胞增殖相关性的研究: 2013年; RasG是盘基网柄菌单细胞增殖过程中的关键蛋白,其基因的异常表达常会导致细胞增殖速度的改变。经观察发现,尿囊酸酶基因干扰后的盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)细胞(RNAi-allC)的分裂速度明显快于野生型KAx-3细胞。为探讨RasG及相关蛋白参与盘基网柄菌细胞增殖的调控机制,该文使用实时荧光定量PCR检测受体酪氨酸激酶/Ras途径的disc I、myo I、gef R、rasG、mkk A、mek A及erk A在KAx-3和RNAi-allC细胞中mRNA水平上的表达情况。蛋白免疫印迹检测两细胞中Disc I和RasG的蛋白含量。实时荧光定量PCR结果显示,所有检测的基因在两种类型细胞中的表达均存在差异;相对于KAx-3细胞,RNAi-allC细胞除disc I和rasG显著下调外,其他基因均明显上调。蛋白免疫印迹结果显示,RNAi-allC细胞中Disc I和RasG的蛋白含量明显少于野生型细胞(P<0.05)。这些数据提示,尿囊酸酶基因的干扰引起了RasG和RasG上下游蛋白含量的变化,最终导致细胞周期缩短,细胞增殖加快。说明RasG及相关蛋白可能参与了盘基网柄菌细胞增殖的调控。; 许苏娟侯连生; 关键词：盘基网柄菌受体酪氨酸激酶尿囊酸酶细胞增殖

盘基网柄菌细胞黏附分子cadA/DdCAD-1在细胞分化及细胞命运决定中的作用: 2013年; 盘基网柄菌细胞黏附分子DdCAD-1是在细胞发育过程中最先表达的黏附分子,为了研究DdCAD-1在盘基网柄菌细胞发育中的作用,将cadA基因的突变株cadA-细胞用中性红染料染色,发育成的蛞蝓体显示cadA-细胞的前柄细胞/前孢子细胞的分化出现明显的障碍,外源表达的重组蛋白His6-DdCAD-1与cadA-细胞作用一段时间后,这种现象得到了改善。另外,cadA-细胞的孢子产率也有所降低,外源重组蛋白也可以拯救该表现型。表达DdCAD-1的细胞与cadA-细胞共同发育所形成的嵌合体显示表达DdCAD-1的细胞占据在拔顶期结构的顶端及尾部,而这些结构都在非孢子区,最终会死亡。提示DdCAD-1对于细胞分化及细胞命运决定有重要意义。; 杨春霞侯连生; 关键词：细胞黏附分子细胞分化

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