国家科技重大专项(2009ZX09103-643)
- 作品数：13 被引量：56H指数：6
- 相关作者：刁勇许瑞安王启钊吕颖慧李招发更多>>
- 相关机构：华侨大学教育部广西师范大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 重组腺相关病毒载体诱导的天然免疫反应及机制被引量：7
- 2012年
- 重组腺相关病毒(rAAV)已成为基因治疗领域应用最广泛的载体之一。临床前研究显示其具有很高的安全性,但人体免疫毒性仍是制约其临床疗效的关键,因此有关rAAV免疫机制的研究成为近期热点。尽管天然免疫在获得性免疫反应中发挥重要作用,但与rAAV有关的天然免疫研究过去一直未被重视。直到最近,才确认有至少3种人体细胞(树突状细胞、巨噬细胞和内皮细胞)参与了rAAV的天然免疫,作用机制为可识别载体基因组的TLR9或病毒衣壳TLR2所介导,NF-κB或干扰素调节因子(IRFs)信号通路被激活,导致各种炎性因子及I型干扰素的大量表达。自身互补型rAAV诱导的TLR9依赖性天然免疫较单链rAAV更为强烈。本文重点对近期发现的激活天然免疫反应的宿主与rAAV的相互作用、涉及的信号通路、天然免疫对获得性免疫以及转基因表达的影响进行综述。
- 刁勇许瑞安
- 关键词：重组腺相关病毒基因治疗免疫信号通路
- 重组人可溶性TRAIL在毕赤酵母中表达与纯化及其抗肿瘤细胞活性
- 2010年
- 目的研究重组人可溶性TRAIL(sTRAIL)蛋白的表达和纯化,以及对HepG2细胞增殖与凋亡的影响。方法将人sTRAIL基因插入毕赤酵母表达载体pPIC9中,构建甲醇酵母分泌型表达载体pPIC9-sTRAIL,电击转化至GS115(his4),MD平板筛选出阳性菌株。对工程菌株发酵培养基成分、pH、甲醇浓度、诱导表达时间等条件进行优化,并初步分析重组sTRAIL蛋白的体外抗肿瘤活性。结果工程菌株在BMMY培养基(pH6.0)、1%甲醇条件下诱导表达48h目的蛋白浓度最高可达(58.7±2.4)mg/L。重组人sTRAIL蛋白能抑制HepG2细胞的增殖、诱导HepG2细胞的凋亡。结论优化了人sTRAIL的表达和纯化工艺条件,所生产的sTRAIL可用于抗肝癌新药的开发。
- 黄晓平王晓董浩赵小峰李招发王启钊许瑞安刁勇
- 关键词：STRAIL毕赤酵母纯化肿瘤
- 不同抗原修复方法对Ki-67蛋白检测结果的影响被引量：5
- 2011年
- 目的:探讨不同抗原修复对A549肿瘤组织内Ki-67蛋白检测结果的影响。方法:采用酶修复法、柠檬酸微波修复法、柠檬酸高压修复法、Tris/EDTA微波修复法、Tris/EDTA高压修复法等对肿瘤组织的石蜡切片进行修复,采用二步法进行免疫组织化学染色。结果:肿瘤组织的核蛋白Ki-67经柠檬酸微波修复后,染色效果较其他修复方法明显增强,且定位佳,对比度清晰。结论:在核蛋白Ki-67免疫组织化学染色中,柠檬酸微波修复法优于其他抗原修复方法。
- 邹金李亨芬邢咏梅聂金梅白如玉刁勇
- 关键词：免疫组织化学KI-67抗原修复
- 重组人kallistatin蛋白在毕赤酵母中的高效表达及生物活性分析被引量：10
- 2010年
- 为了研究kallistatin(Kal)的生物活性,本实验构建了可分泌表达Kal的毕赤酵母菌株。首先通过PCR方法从pAAV-Kal中扩增出KalcDNA,并克隆至酵母表达载体pPIC9,得到甲醇酵母分泌型表达载体pPIC9-Kal,然后将载体线性化并电击转化毕赤酵母GS115(his4),通过MD平板筛选出阳性表达菌株。阳性表达菌株在BMMY培养基(pH7.0)中29℃培养,经2%甲醇诱导表达96h,摇瓶表达量可达14mg/L。表达上清经PhenylSuperose、Heparin SepharoseFF分离纯化,目的蛋白纯度达到98%,分子量为58kDa。生物活性实验显示,所得到的Kal蛋白具有较好的抗氧化活性,过氧化物酶活性达到(163±4)U/(mg·min),可有效降低H2O2对LX-2细胞的氧化损伤。另外,重组产生的Kal还能抑制HUVEC细胞的增殖。本研究首次成功地利用毕赤酵母表达系统分泌表达了有生物活性的Kal,为继续开展其抗肿瘤活性奠定了基础。
- 黄晓平王晓董浩赵小峰李招发王启钊许瑞安刁勇
- 关键词：KALLISTATIN毕赤酵母活性
- Kallistatin的研究进展
- 2009年
- Kallistatin（KAL）是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂（serpin），可以与Kallikrein（血管舒缓素）特异性的结合并抑制其功能的发挥^[1,2]。近年研究发现，KAL还具有抑制血管生成、抗高血压、抗炎和抗肿瘤活性，并且这些功能的发挥并不依赖其与Kallikrein的结合。
- 董浩李亨芬赵小峰黄晓平刁勇
- 关键词：KALLISTATIN丝氨酸蛋白酶抑制剂抑制血管生成血管舒缓素抗肿瘤活性抗高血压
- 腺相关病毒的衣壳装配和DNA衣壳化机制被引量：7
- 2011年
- 重组腺相关病毒载体(rAAV)是基因治疗临床应用载体的选择之一。在简述野生型AAV基因组结构和复制机制的基础上,阐述了AAV包装过程中两个主要事件:衣壳蛋白的装配和基因组DNA的衣壳化。虽然对AAV的包装机制总体上已有一定的认识,但其详细的分子机制、构效关系仍需完善和充实。AAV病毒本身相关机制的深入研究有助于改善rAAV载体的制备技术,促进rAAV基因药物研发。
- 王启钊吕颖慧李招发刁勇许瑞安
- 关键词：腺相关病毒基因治疗
- 重组腺相关病毒载体相关性杂质被引量：8
- 2011年
- 可以稳定表达治疗基因而无明显不良反应的重组腺相关病毒(rAAV)载体被认为是最有发展前景的基因治疗载体。但如何建立可以有效去除rAAV载体内具有潜在致病危害的杂质、产品质量符合临床使用要求的纯化工艺是研究人员面临的巨大挑战。其中针对载体相关性杂质的纯化工艺尤为关键,因为该类杂质的性质与真正的rAAV载体极其相似,一旦存在便难以去除,且会引起严重不良反应。以下总结了该类杂质形成的过程及有别于rAAV载体的特点,并对可以防止其生成或将其与rAAV载体有效分离的技术手段进行了评价。
- 刁勇王启钊肖卫东许瑞安
- 关键词：腺相关病毒纯化基因治疗
- 重组腺相关病毒基因药物的细胞免疫毒性及对策被引量：8
- 2010年
- 重组腺相关病毒 (rAAV) 因具有在体内可以长期稳定表达转基因、安全性高等优点, 迅速成为基因治疗的首选载体之一。最近采用 rAAV 基因药物进行的血友病临床实验所暴露的细胞免疫毒性引起人们高度关注, 此问题能否顺利解决直接关系该类药物的发展前景。之后的研究发现针对 AAV 衣壳蛋白的 T 细胞免疫反应是毒性反应的原因。本文针对 rAAV 细胞免疫毒性的各种假说进行了分析, 总结了 AAV 衣壳蛋白抗原肽如何在靶细胞递呈并激活细胞毒性 T 淋巴细胞的研究结果, 并针对该免疫毒性的各关键环节提出了可能的解决方案, 包括免疫抑制、载体优化、提高纯度等, 期望有助于提高 rAAV 基因药物的临床安全性和有效性。
- 刁勇王启钊肖卫东许瑞安
- 关键词：基因药物腺相关病毒
- 抗肿瘤适体药物的研究进展被引量：6
- 2009年
- 适体,也称为化学抗体,是近年来开发的颇具潜力的一类新型药物。适体由较短的DNA或RNA寡聚核酸组成,在体内形成专一和稳定的三维结构,可以与特定的靶蛋白结合。已批准上市的第1个适体药物为抗血管内皮生长因子的RNA分子Macugen,在临床上玻璃体内注射用于治疗年龄相关性黄斑变性。细胞和动物模型研究证明一些适体具有很好的抗癌作用,有几个适体药物已进入临床研究阶段。此文对近年来抗肿瘤适体药物的进展做一综述。
- 刁勇王立强邱飞
- 关键词：适体肿瘤药物
- 重组腺相关病毒基因药物的病毒滴度定量测定被引量：3
- 2010年
- 重组腺相关病毒(rAAV)具有免疫原性低、在各种细胞中介导的转基因表达时间长等优点,将成为最广泛应用的基因治疗载体之一。rAAV基因药物临床研究历经16年,其有效性和安全性已得到充分证实,但其准确、可靠的定量测定标准方法仍未建立。目前采用的rAAV滴度测定方法按照原理可分为生物测定和物理测定两大类。生物测定主要评估载体传递转基因的能力,包括转导和感染滴度测定。物理测定则基于其物理性质,可细分为病毒颗粒和基因组滴度测定。本文对现有rAAV滴度测定方法的基本概念、原理、优点、缺点和适用范围等作一详细介绍。
- 刁勇王启钊吕颖慧许瑞安
- 关键词：生物学鉴定法依赖病毒腺相关病毒
