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虫媒黄病毒NS5蛋白的生物学功能研究进展被引量：4: 2012年; 虫媒黄病毒包括一大类对人类致病的病原体,基因组为单股正链RNA,依次编码3种结构蛋白和7种非结构蛋白。其中,非结构蛋白NS5具有RNA依赖性RNA聚合酶、甲基转移酶等多种酶活性,在病毒基因组的复制过程中发挥关键作用。最近的研究发现,NS5能够通过多种机制调控宿主的抗病毒反应。NS5的多功能特点使其成为潜在的抗病毒药物靶点并受到广泛关注。本文综述了虫媒黄病毒NS5蛋白生物学功能的主要进展。; 周希珍赵慧高岚秦成峰; 关键词：NS5 甲基转移酶

布鲁菌抗原的快速克隆与高效表达被引量：2: 2010年; 目的:通过Gateway技术构建布鲁菌抗原表达载体,并筛选出高效可溶性表达载体。方法:以山羊布鲁菌16M株染色体DNA为模板,扩增4个布鲁菌抗原基因BMEI2002、BMEI1069、BMEI1483和BMEI0748,利用GatewayBP反应将基因克隆到入门载体pDONR201中,构建重组质粒,然后用Gateway LR反应将基因重组到3种表达载体(pDEST17、pHXGWA、pHGGWA)中,构建相应的重组表达质粒,将重组质粒转化大肠杆菌ER2566(DE3)并诱导表达,分析利用3个不同载体所表达蛋白的表达量及表达形式。结果:利用BP反应构建了4个基因的重组质粒,用LR反应将这些基因分别克隆到表达载体,构建得到了相应的表达载体;诱导表达后的可溶性分析显示,含6×His和TRX标签的pHXGWA所表达的蛋白在表达量和可溶性方面均优于pDEST17和pHGGWA。结论:通过Gateway技术实现了布鲁菌抗原的快速克隆,筛选到的pHXGWA可作为后续大规模克隆表达载体,为布鲁菌抗原的大规模克隆表达和保护性抗原的筛选奠定了基础。; 徐杰于爽付思美钟志军王玉飞曲勍汪舟佳杜昕颖孙宏迪白耀霞黄留玉高岚陈泽良; 关键词：GATEWAY 布鲁菌蛋白表达

人趋化因子受体CCR6在HEK293细胞内的稳定表达及其功能分析被引量：1: 2011年; 目的:构建稳定表达人趋化因子受体6(CCR6)的HEK293细胞株。方法:将CCR6基因和Gα16质粒共转到HEK293细胞中,并挑取稳定表达CCR6基因的HEK293细胞克隆。采用体外趋化实验、钙流实验、RT-PCR、Western blot及免疫荧光染色法,检测CCR6在HEK293细胞表面的表达。结果:经上述实验证实,CCR6基因和Gα16质粒共转染的HEK293细胞上,可稳定表达CCR6,且具有生物学活性。结论:成功地在HEK293细胞表面稳定表达具有生物学活性的CCR6,为研究CCR6的生物学功能及筛选CCR6的拮抗剂奠定了基础。; 魏巍高岚张菲菲崔礼鑫谢欣; 关键词：HEK293细胞

酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5相互作用的蛋白: 2011年; 目的应用酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5蛋白相互作用的宿主蛋白。方法构建表达乙型脑炎病毒NS5蛋白的诱饵质粒pSos-NS5,经自激活和毒性实验后对人脐静脉内皮细胞cDNA文库进行筛选,挑取37℃条件下在缺失亮氨酸和尿嘧啶培养基上生长的克隆,利用一对一酵母回复性杂交实验进行验证,然后测定阳性克隆插入片段序列,通过Blast分析确定可能与NS5相互作用的蛋白。结果构建的诱饵载体pSos-NS5对酵母宿主无毒性,且无自激活活性。经过筛选得到3个阳性克隆(10,11,4′6号克隆),经测序和Blast分析,初步确定4′6号克隆编码的TC21蛋白可能与NS5发生相互作用。结论经酵母双杂交技术筛选到一种可能与NS5蛋白具有相互作用的人类蛋白,为深入探讨乙型脑炎病毒NS5蛋白的生物学功能奠定了基础。; 周希珍赵慧李晓峰邓永强秦成峰秦鄂德高岚; 关键词：酵母双杂交乙型脑炎病毒

毛细管电泳检测肺癌及癌旁正常组织蛋白质混合物差异被引量：2: 2011年; 以建立的毛细管电泳(CE)-激光诱导荧光(LIF)检测蛋白质的方法对提取肺癌及癌旁正常组织蛋白质混合物(变性/活性)差异进行检测.采用异硫氰酸荧光素(FITC)为衍生剂,电泳缓冲液为1×TBE(TBE为Tris-硼酸-EDTA,变性电泳pH 10.0,活性电泳为pH 8.3且含有2 mg/L考马斯亮蓝),分离电压15 kV,柱温15℃,电动进样(10 kV×10 s),激发波长/发射波长=488/520 nm检测时,肺癌及癌旁正常组织蛋白质混合物样品得到较好分离且有明显差异.与目前常用蛋白分析方法:变性SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)以及活性蓝绿温和胶电泳(BN-PAGE)进行比较.BN-PAGE结果显示肺癌组织相比正常组织有较明显蛋白种类差异;SDS-PAGE结果表明一些蛋白质表达量差异也是肺癌及癌旁正常组织的显著差别,且主要集中在20～116 kDa.CE-LIF检测结果与PAGE结果大致相同,且CE-LIF检测蛋白质的灵敏度高于PAGE,能更准确反映肺癌及癌旁正常组织的蛋白质差异.结论是CE-LIF可用于蛋白质差异检测,时间短,效果较好,对活性蛋白质进行分析体现了其优点:可提供较强的动力——电压,及强动力下良好的温度稳定性.; 刘勇刘勇王荣高岚贾正平谢华张军莉马骏张爱梅; 关键词：蛋白质组学毛细管电泳肺癌聚丙烯酰胺凝胶电泳

毛细管电泳分离筛分介质的选择: 近年来,毛细管电泳(CE)已成为分离生物大分子的重要手段,在分子生物学、分子医学、法医学等领域得到越来越广泛的应用。在CE分离生物大分子过程中,筛分介质的性能直接影响其迁移特性、分离度、读出长度、重现性、注入时间、注入压...; 王荣刘勇贾正平高岚谢华张强郭志强; 文献传递

无胶筛分毛细管电泳分离蛋白质的实验研究: 随着基因组计划的完成,功能基因组即蛋白质组计划逐渐拉开帷幕。对于蛋白质的研究首先在于蛋白质的分离,而分离后的检测更是重中之重。无论是非变性还是变性蛋白质,传统聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的检测方法已经比较成熟,但其检测...; 刘勇王荣贾正平高岚谢华张爱梅谢希晖马骏; 文献传递

甲型H1N1流感的特点及其防控被引量：6: 2010年; 甲型H1N1流感病毒是2009年3月墨西哥出现的一种新型流感病毒。此后不久,这种病毒造成世界范围内的蔓延。论文分析总结了甲型H1N1流感病毒与1918年流感病毒的相似性以及表现出的新特点,归纳了这种病毒的潜在危害性。此外,介绍了甲型H1N1流感的防控策略,主要包括加强猪群监控,流感疫苗和抗流感病毒药物治疗。; 王锋高岚; 关键词：甲型H1N1流感病毒疫苗抗流感病毒药物

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国家自然科学基金(30970312)