国家自然科学基金(30171067)
- 作品数：17 被引量：55H指数：5
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- NF-κB信号通路介导结肠癌多细胞耐药的作用研究被引量：7
- 2008年
- 目的探讨NF-κB信号通路在结肠癌HT-29细胞多细胞耐药中的作用及可能机制。方法采用液体重叠培养系统和常规贴壁法对HT-29细胞进行三维(3D)和单层(2D)培养。采用倒置相差显微镜、扫描电镜观察3D培养的HT-29细胞形态,并采用免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。电泳迁移率改变测定法(EMSA)测定3D和2D培养细胞中NF-κB的活性差异。将3D培养细胞分为两组:3D组(培养液中不加干扰因素)和3D+SN50组(培养液中加入50μg/ml SN50处理24h),采用EMSA测定两组NF-κB活性差异,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白(Caspase-3、Bcl-2和Bax)的表达并对蛋白条带的光密度值进行半定量分析,外生半径测定法测定3D培养细胞对氟尿嘧啶的敏感性。结果3D培养的HT-29细胞悬浮生长,细胞相互聚集增殖形成多细胞球,中心为坏死区,周围由多层异型性细胞组成,外围细胞PCNA阳性染色明显。与2D培养细胞相比,3D细胞中NF-κB活性条带颜色较深。EMSA显示3D+SN50组NF-κB活性较3D组低,TUNEL法显示3D组细胞凋亡率(8.71%±0.73%)较3D+SN50组(15.75%±1.02%)明显降低(P<0.01)。3D+SN50组和3D组中,Caspase-3活化片段光密度值分别为126.79±13.48和87.24±10.68(P<0.01),Bax蛋白为129.73±15.28和89.26±14.31(P<0.01),Bcl-2蛋白为97.27±12.63和131.24±14.53(P<0.01)。结论NF-κB活性升高是导致结肠癌HT-29细胞多细胞耐药的重要原因之一,其机制可能与凋亡相关蛋白的表达调控有关。
- 李建军潘凤黄海辉胡绍毅边志衡梁后杰
- 关键词：结肠肿瘤NF-ΚB多药耐药相关蛋白质类
- 透明质酸酶增强5-FU对结肠癌抗癌作用的动物实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的:观察透明质酸酶(Hyaluronidase,Hyase)在氟尿嘧啶(5-FU)对裸小鼠结肠癌移植瘤生长影响中的作用,并探讨其作用的可能机制。方法:18只雄性裸小鼠左侧腹壁皮下移植三维培养人结肠癌HT-29细胞,随机分为6组,每组3只:Ⅰ组(对照组)、Ⅱ组[Hyase200U/(kg.d)]、Ⅲ组[5-FU30mg/(kg.d)]、Ⅳ组[Hyase50U/(kg.d)+5-FU30mg/(kg.d)]、Ⅴ组[Hyase100U/(kg.d)+5-FU30mg/(kg.d)]和Ⅵ组[Hyase200U/(kg.d)+5-FU30mg/(kg.d)],Hyase于肿瘤细胞移植处第1、5天皮下注射,5-FU于第1～5天右侧腹腔注射。每周以游标卡尺测定瘤体最长径和最短径,计算肿瘤体积和抑瘤率,第6周杀鼠称瘤重,取瘤组织行HE染色,Westernblotting法检测瘤组织中E-钙黏素(E-cadherin)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和NF-κBp65蛋白的表达并对蛋白条带的光密度(OD)进行半定量分析。结果:裸小鼠均成功移植皮下肿瘤,与对照组(Ⅰ组)比较,单纯Hyase治疗组(Ⅱ组)肿瘤体积减小不明显(P>0.05),单纯5-FU治疗组(Ⅲ组)自第3周开始肿瘤体积明显减小(P<0.05),而不同剂量Hyase联合5-FU治疗组(Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组)瘤体积减小更明显(P<0.05);与单纯5-FU治疗组(Ⅲ组)比较,第3周开始联合治疗组(Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组)瘤体积明显减小(P<0.05);第6周Ⅱ～Ⅵ组抑瘤率分别为6.8%、17.5%、34.1%、46.3%和56.6%;Ⅲ～Ⅵ组瘤重均低于Ⅰ组(P<0.05或P<0.01);Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组瘤组织内E-cadherin和ICAM-1蛋白条带OD值均较Ⅰ组有不同程度减低,而NF-κBp65蛋白条带OD值在各组间无明显变化(P>0.05)。结论:透明质酸酶可能通过抗细胞黏附在结肠癌化疗中具有增敏作用。
- 李建军黄海辉潘凤边志衡胡绍毅梁后杰
- 关键词：透明质酸酶氟尿嘧啶结肠癌
- 细胞间粘附在肺腺癌细胞株A549群集耐药中作用探讨
- 2004年
- 目的 检测肺腺癌细胞株A5 49单层培养与三维培养时对阿霉素 (adriamycin ,ADM)药物敏感性的差异 ,并探讨细胞间粘附在肺腺癌群集耐药 (multicellulardrugresistance)中可能的作用机制。方法 以多细胞球 (multicellularspheroids ,MCSs)为模型 ,比较MCSs与单层细胞 (monolayercells ,MCs)对ADM药物敏感性的差异。透射电镜观察细胞超微结构。间接免疫荧光法流式细胞术检测Bcl 2 ,Bcl xL ,Bax的表达。结果 MCSs由多层细胞组成 ,细胞间粘附广泛而紧密 ;可见镶嵌连接。与MCs相比 ,MCSs的药物敏感性显著减弱。MCSs的Bcl 2 ,Bcl xL表达量显著高于MCs ,ADM处理后表达显著升高。结论 MCSs能够较好地模拟体内实体瘤的细胞间粘附 ,具有群集耐药性 ;其机制可能与Bcl xL ,Bcl 2高表达相关。
- 何建明梁后杰边志衡胡绍毅
- 关键词：肿瘤耐药
- 不同培养方式中肺腺癌细胞系A549表达E-钙粘素的差异及其意义被引量：6
- 2004年
- 目的 初步探讨E 钙粘素在肿瘤群集耐药中的可能机制。方法 采用旋转培养瓶结合台式水浴恒温振荡器旋转培养的方法 ,进行肺腺癌细胞A5 49体外立体培养 ,同时进行普通平面培养 ,通过流式细胞技术、Westernblot、原位细胞凋亡检测试剂盒、四唑盐 (MTT)比色法及血球计数器计数法检测细胞周期 ,E 钙粘素的表达 ,细胞凋亡率及对阿霉素(ADM)敏感性。结果 ①立体培养细胞存在E 钙粘素的高表达 ;②同平面培养比较 ,立体培养细胞出现细胞周期G1 期阻滞、细胞凋亡率低、对ADM敏感性低等表现 ,给予E 钙粘素阻滞剂SHE78 7后 ,两者差异明显缩小。结论 E 钙粘素介导的细胞 细胞粘附作用可通过调控细胞周期以及细胞凋亡 ,影响肺腺癌A5 49细胞对ADM的敏感性 ,在肿瘤群集耐药中发挥作用。
- 黄海辉胡绍毅边志衡何建明梁后杰
- 关键词：肺腺癌细胞系A549E-钙粘素细胞周期细胞凋亡
- 两种体外培养条件下肺腺癌A549细胞生物学特性的变化被引量：6
- 2004年
- 目的 比较体外肺腺癌A5 4 9细胞在平面及立体培养条件下细胞周期、细胞凋亡及对化疗药物敏感性的变化。方法 采用旋转培养瓶结合台式水浴恒温振荡器旋转培养的方法 ,进行肺腺癌A5 4 9细胞体外立体培养 ,并通过流式细胞技术、原位细胞凋亡检测试剂盒、四唑盐 (MTT)比色法及血球计数器计数法比较两种培养条件下肺腺癌A5 4 9细胞在细胞周期、细胞凋亡及对阿霉素 (ADM)敏感性方面的差异。结果 通过倒置显微镜、电镜观察及照相 ,确定了体外三维立体培养模型的建立 ;同平面培养比较 ,立体培养细胞存在细胞周期中G1期阻滞现象、细胞凋亡率低 ,对阿霉素的敏感性低的特征。结论 腺癌A5 4 9细胞在两种体外培养条件下生物学特性存在明显差异 ,三维立体细胞培养模型更接近实体瘤的体内实际情况。
- 黄海辉胡绍毅边志衡何建明梁后杰
- 关键词：肺腺癌A549细胞药物敏感性
- 结肠癌HT29多细胞球的培养及其结构与生物学特性的观察
- 2010年
- 目的建立结肠癌体外三维细胞培养模型HT29多细胞球,鉴定并检测其基本生物学特性。方法琼脂糖抑制细胞贴壁、水平回旋振荡法培养HT29多细胞球;扫描电镜、HE染色、免疫组化检测多细胞球的组织病理学性质;透射电镜检测细胞超微结构;Cell counting kit-8检测药物敏感性。结果成功培养由细胞相互黏附形成的多层细胞构成的结肠癌多细胞球模型;多细胞球内细胞接触广泛而紧密,可见大量细胞连接;多细胞球局部可见腺腔样结构,细胞角蛋白表达强弱与腺腔样结构有关;多细胞球药物敏感性显性降低,在500μg/L奥沙利铂处理48h条件下,单层细胞生存分数为(9.3±2.0)%,而多细胞球则为(42.9±4.0)%,二者相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功建立了结肠癌多细胞球模型,此模型是研究体内无血管的微小结肠癌及结肠癌无血管区的较理想模型。
- 何建明江恒陈克力黄海辉庞学利梁后杰
- 关键词：结肠癌细胞黏附耐药
- 磷脂酰肌醇3激酶信号通路影响细胞凋亡在肺腺癌A549细胞群集耐药中的作用被引量：12
- 2004年
- 目的 探讨PI3K信号通路在肿瘤群集耐药中的作用。方法 采用旋转培养瓶结合台式水浴恒温振荡器旋转培养的方法 ,进行肺腺癌A5 49细胞体外立体培养 ,通过Westernblot、原位细胞凋亡检测、四唑盐 (MTT)比色法及血球计数器计数法检测Akt、Bcl 2、Bad的表达、细胞凋亡率及对阿霉素 (ADM )敏感性。结果 ①立体培养细胞存在Akt的高表达 ;②同平面培养比较 ,立体培养细胞存在Bcl 2高表达 ,Bad低表达 ,细胞凋亡率低 ,对ADM敏感性低的特征 ,阻断PI3K信号通路后 ,两者差异明显缩小。结论 PI3K信号通路可通过抑制细胞凋亡在肺腺癌A5 49细胞群集耐药中发挥作用 。
- 黄海辉梁后杰胡绍毅边志衡何建明
- 关键词：肺腺癌A549细胞PI3K信号通路细胞凋亡药物敏感性
- 肺腺癌细胞株体外三维培养模型的建立及其药物敏感性的观察被引量：5
- 2004年
- 目的 探讨肿瘤细胞三维培养的理想方法 ,为模拟体内实体瘤细胞间相互作用提供良好模型。方法 在抑制细胞贴壁、间断振荡条件下 ,培养无载体三维细胞模型 ;利用微载体CutiSpher进行多细胞球 (multicellularspheroids ,MCS)培养 ;MTT法检测单层细胞 (monolayercells ,MC)药物敏感性 ,细胞计数法检测MCS药物敏感性 ;利用透射电镜比较MCS与MC超微结构的差异。结果 无载体三维细胞培养在培养 4d后即可形成由多个细胞组成的细胞团。MCS在培养 0 5h后即可见细胞贴附于载体 ;培养 5d后 ,形成有多层细胞结构的细胞球。与MC相比 ,MCS药物敏感性显著下降 ;细胞器及微绒毛丰富 ;细胞间粘附广泛而紧密。结论 MCS细胞生长活性好 ,能较好地模拟体内实体瘤的细胞间相互作用 ,特别是细胞间粘附 ;
- 何建明梁后杰边志衡胡绍毅
- 关键词：细胞培养肿瘤药物敏感性
- 地塞米松影响结肠癌细胞对奥沙利铂与氟脲嘧啶化疗敏感性的实验研究被引量：5
- 2010年
- 目的:检测糖皮质激素受体在结肠癌组织及细胞株中的表达,探讨地塞米松共处理或预处理24h,结肠癌细胞株对奥沙利铂和氟脲嘧啶化疗敏感性的变化。方法:采用免疫组化检测糖皮质激素受体在61例结肠癌组织标本及4种结肠癌细胞株中的表达;Hoechst33342染色、流式细胞仪检测体外地塞米松对结肠癌细胞株的凋亡诱导作用;以MTT法检测地塞米松共处理或预处理24h后,结肠癌Lovo细胞株对奥沙利铂和氟脲嘧啶化疗敏感性的变化。结果:在57.3%的结肠癌组织标本中糖皮质激素受体呈阳性表达,在四种结肠癌细胞株中仅Lovo和HCT-116表达糖皮质激素受体,HT-29和SW-480细胞不表达。单独应用地塞米松后,对糖皮质激素受体阳性的Lovo和HCT-116细胞有较强的促凋亡作用,对不表达糖皮质激素受体的HT-29和SW-480细胞作用则不明显。以1×10^(-4)mol/L的地塞米松处理Lovo细胞24h,或与奥沙利铂共处理可使奥沙利铂的IC50从(13.7±1.3)μg/mL降低至(5.9±0.6)μg/mL和(4.8±0.7)μg/mL;同样处理可使氟脲嘧啶的IC50从(72.2±8.1)μg/mL降低至(21.1±4.1)μg/mL和(18.6±4.0)μg/mL。结论:部分结肠癌组织及细胞株表达糖皮质激素受体。地塞米松体外作用能够促进糖皮质激素受体阳性的结肠癌细胞发生凋亡,与奥沙利铂和氟脲嘧啶预处理或共处理后可以增加结肠癌细胞的化疗敏感性。
- 周进明钟大平周琪彭秋平潘凤何颖王雪梁后杰
- 关键词：结肠癌糖皮质激素受体地塞米松奥沙利铂氟脲嘧啶
- 细胞黏附介导的肿瘤多细胞耐药被引量：9
- 2004年
- 梁后杰黄海辉
- 关键词：肿瘤介导细胞耐药细胞黏附耐药机制
