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排序方式：

携带神经导向因子netrin-1基因的重组腺病毒构建被引量：2: 2009年; 目的:制备并构建神经导向因子netrin-1(NT-1)和EGFP双基因共表达的重组腺病毒载体,为后续的基因转染做准备。方法:采用基因克隆技术克隆目的基因NT-1,并将目的基因克隆入含有报告基因EGFP的穿梭载体pDC316质粒;构建的质粒pDC316-netrin经酶切及测序鉴定正确后,通过脂质体lipofectamine2000的介导与腺病毒包装质粒pBHGlox_E1.3Cre共转染至人胚肾细胞HEK293,经同源重组后得到携带鼠NT-1的重组腺病毒Ad5-netrin-CMV-EGFP。应用PCR鉴定重组腺病毒,空斑传代纯化病毒并反复冻融扩增病毒。以50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定病毒滴度。结果:PCR鉴定证实重组腺病毒含有鼠NT-1基因,病毒滴度为5.2×109pfu/ml,EGFP活性检测腺病毒感染阳性细胞率在40%以上。结论:成功制备Ad5-netrin-CMV-EGFP腺病毒,为以后基因治疗研究打下基础。; 姚丹李倩朱剑马建华毛晓明丁新生; 关键词：腺病毒基因重组

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南京市卫生局资助项目(ZKM06040)