国家科技支撑计划(2007BAD43B08)
- 作品数：19 被引量：157H指数：8
- 相关作者：王日昕廖智徐田军鲁涛刘梅更多>>
- 相关机构：浙江海洋学院宁波大学杭州师范大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划浙江省科技厅面上科研农业项目舟山市科技局科技项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学经济管理更多>>
- 厚壳贻贝足腺cDNA文库的构建及部分EST序列分析被引量：4
- 2010年
- 为获得厚壳贻贝足腺组织的EST序列标签以及可能的功能基因序列,以pCMVsport6质粒为载体构建了高质量的厚壳贻贝足腺组织cDNA文库,文库滴度为1.31×107pfu/mL,重组率为98%,平均插入片段为1.3kb.通过对文库部分克隆的序列测定,获得了11个新基因和17个功能基因,其中包括部分与厚壳贻贝足丝相关的基因.厚壳贻足腺组织cD-NA文库的成功构建为将来筛选与厚壳贻贝足丝蛋白相关的新基因,系统研究其黏附机制奠定了基础.
- 鲁涛廖智刘梅武梅叶茂王日昕
- 关键词：厚壳贻贝CDNA文库EST
- 环介导恒温扩增技术快速检测溶藻弧菌被引量：18
- 2009年
- 溶藻弧菌是中国南部水产养殖业中弧菌病的最主要病原菌,其快速检测具有重要意义。根据溶藻弧菌外膜蛋白OmpK基因序列,设计一套引物,通过条件优化,成功建立了针对致病性溶藻弧菌的环介导恒温扩增检测技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)。应用LAMP技术,在65℃温育1h的条件下扩增溶藻弧菌基因组DNA,琼脂糖凝胶电泳得到特异性梯度条带。该研究建立的LAMP法特异性检出致病性溶藻弧菌,其检测下限比PCR法低一个数量级,相当于n(cell)=38/mL的菌液浓度,灵敏度更高。综合分析表明,LAMP技术是快速、简易、实地诊断溶藻弧菌的理想工具。
- 丁文超胡健饶史雨红李明云陈炯
- 关键词：溶藻弧菌
- 厚壳贻贝抗菌肽mytilin和myticin的cDNA基因的克隆与序列分析被引量：13
- 2010年
- 抗菌肽是贻贝免疫系统中的一个重要组成部分,也是目前海洋生物抗菌肽研究的重要内容。在贻贝抗菌肽家族中,mytilin和myticin是目前贻贝抗菌肽研究中发现成员最多,丰度最高的两个家族,在贻贝免疫系统中占有重要的地位。为了解厚壳贻贝抗菌肽mytilin和myticin的基因组成及其多样性机制,通过设计特异性引物,以厚壳贻贝血细胞cDNA文库为模板进行PCR扩增以筛选文库,共克隆到8条mytilin的同源cDNA序列和9条myticin的同源cDNA序列,并对其基因序列及推导的氨基酸序列进行了序列比对和变异位点初步分析。上述研究为将来深入研究厚壳贻贝的免疫机制及筛选具有开发价值的抗菌肽分子奠定了理论基础。
- 廖智刘梅王日昕武梅杨丽佳鲁涛徐田军石戈
- 关键词：厚壳贻贝抗菌肽CDNA
- 基于厚壳贻贝Mytilin-1的抗菌肽设计、固相合成及抗菌谱分析被引量：5
- 2010年
- 贻贝抗菌肽Mytilin是贻贝免疫系统的重要组成部分,对其结构与功能的研究表明,其序列中连接两段β-折叠的发夹区域是其抗菌功能的关键所在。为验证该区域是否具有抗菌活性,通过对厚壳贻贝Mytilus coruscus抗菌肽Mytilin进行空间结构模拟,选取其中β-发夹部分肽段,采用了固相化学合成的方法合成了两条10肽,分别命名为Mytilin Derived Peptide-1(MDP-1)和Mytilin Derived Peptide-2(MDP-2)。高效液相色谱以及质谱检测结果表明,合成是成功的。抗菌谱研究表明,MDP-1和MDP-2对革兰氏阳性菌、阴性菌以及真菌均具有明显的抑制作用,同时,合成的MDP由于序列短且有两对二硫键,因此对于温度及人血浆均表现出很强的稳定性。上述研究结果为深入了解厚壳贻贝抗菌肽Mytilin的抗菌机制以及在此基础上开发具有应用价值的新型抗菌肽奠定了基础。
- 刘梅武梅周世权高鹏鲁涛王日昕石戈廖智
- 关键词：MDP抗菌谱
- 脊尾白虾仿生态规模养殖试验被引量：4
- 2009年
- 在养殖面积达到234.53hm^2的130口海水养殖池塘,进行以脊尾白虾为主的仿生态养殖试验。结果表明：放养白虾苗7.5～15.0kg/hm^2,养殖期间轮捕2～3次,不同混养种类的效益分别为白虾11 243.6元/hm^2、青蟹9 184.2元/hm^2、蛏6 865.5元/hm^2、蚶9 943.2元/hm^2。养殖期间平均投喂人工配饵及鲜活小杂鱼10.05t/hm^2,饵料系数为1.75。生产成本为7.67万元/hm^2,平均利润逾3.85万元/hm^2,取得了较好的社会、经济和生态效益。
- 林吉才徐军超
- 关键词：脊尾白虾规模养殖
- 三疣梭子蟹幼蟹配合饲料中蛋白质、脂肪、粗纤维适宜含量研究被引量：12
- 2009年
- 以初始平均体重为7．1g的三疣梭子蟹（Portunw trituberculatus）幼蟹为试验对象，以粗蛋白、粗脂肪和粗纤维为试验因素，各设3个水平，采用正交试验设计L9（3^4），配制成9种饲料，在室内水族箱进行为期4周的饲养试验，以探讨三疣梭子蟹幼蟹配合饲料中蛋白质、脂肪和粗纤维的适宜含量。结果表明，三疣梭子蟹幼蟹配合饲料中蛋白质、脂肪和粗纤维的适宜含量分别为40％、6％～8％和≤5％时，三疣梭子蟹幼蟹增重率和蜕壳率高，饲料系数低和蛋白质效率较高。
- 高红建何中央丁雪燕袁琰黄福勇
- 关键词：三疣梭子蟹配合饲料蛋白质脂肪粗纤维
- 三疣梭子蟹生物学特性及氨基酸含量的研究被引量：4
- 2010年
- 对分别投喂配合饲料和鲜杂饲料养殖的三疣梭子蟹与同时期采集的野生三疣梭子蟹的可食部分指数、肌肉指数、肝指数、性腺指数及氨基酸含量进行比较研究。结果表明:配合饲料组三疣梭子蟹的肝指数、性腺指数、氨基酸总量、必需氨基酸含量、鲜味氨基酸和甘味氨基酸含量都高于鲜杂饲料组三疣梭子蟹,试验证明:配合饲料组三疣梭子蟹品质优于鲜杂饲料组三疣梭子蟹。对野生三疣梭子蟹氨基酸模式进行研究,确定饲料中第一限制性氨基酸和改善饲料品质的方法。
- 黄福勇丁雪燕何中央薛辉利郑天伦
- 关键词：三疣梭子蟹生物学特性氨基酸
- 厚壳贻贝抗菌肽Mytilin的初步鉴定被引量：15
- 2010年
- 厚壳贻贝是我国具有重大经济价值的水产养殖贝类,对其抗菌肽的研究有助于人们了解厚壳贻贝的免疫机制。为了解厚壳贻贝血清中抗菌肽Mytilin的分子组成和特性,采用多维高效液相色谱对厚壳贻贝血清进行分离纯化,从中获得3种对革兰氏阳性菌以及阴性菌均有抑制作用的抗菌肽分子,序列分析表明3种抗菌肽具有较高的序列相似性,均属于贻贝抗菌肽Mytilin家族,分别命名为Mytilin-1,Mytilin-2和Mytilin-3。其中,Mytilin-1为34个氨基酸残基构成的多肽,其分子量为3885.17u,含8个半胱氨酸,形成4对二硫键。根据所测Mytilin-1的氨基酸序列设计特异性引物,通过菌落PCR方法筛选厚壳贻贝cDNA文库,获得Mytilin-1的cDNA基因并进行了序列分析。以上研究结果表明,作为贻贝的主要抗菌肽家族,Mytilin在厚壳贻贝血清中具有较高丰度,对其蛋白质序列以及基因序列的研究为深入了解厚壳贻贝Mytilin抗菌肽的分子多样性奠定了基础。
- 王日昕刘梅廖智鲁涛武梅何光源
- 关键词：厚壳贻贝抗菌肽CDNA
- 加速溶剂萃取-气相色谱/质谱法测定鳓鱼肌肉中脂肪酸
- 2013年
- 采用加速溶剂萃取-气相色谱/质谱法对鳓鱼肌肉中脂肪酸组成进行分析。共检测到17种脂肪酸,其中饱和脂肪酸5种,相对含量为30.92%,不饱和脂肪酸12种,相对含量为69.08%,其中单不饱和脂肪酸7种,相对含量为40.68%,多不饱和脂肪酸5种,相对含量为28.40%。鳓鱼富含EPA(Eicosa pentaenoic Acid)和DHA(Docosahexaenoic acid),EPA+DHA含量达24.43%,鳓鱼肌肉中棕榈酸含量较高,达21.6%。
- 黄福勇何晓明张晓辉
- 关键词：加速溶剂萃取质谱鳓鱼肌肉脂肪酸
- 溶藻弧菌外膜蛋白OmpK基因表达和间接ELISA检测方法的初步建立被引量：10
- 2010年
- 溶藻弧菌是中国南部水产养殖业中弧菌病的最主要病原菌,数量居海洋类弧菌之首,其快速检测具有重要意义。以溶藻弧菌国内标准株ATCC17749基因组DNA为模板,PCR扩增出外膜蛋白OmpK基因,将其克隆入表达载体pET-28a中,获得重组质粒pET-28a-OmpK,限制性内切酶结合琼脂糖凝胶电泳分析和序列测定结果表明,该序列开放读码框正确且与已发表的OmpK结构编码序列完全一致。将重组质粒pET-28a-OmpK转化大肠杆菌BL21pLysE,高效表达重组蛋白,将其纯化后免疫小鼠所得的高免血清能外膜蛋白OmpK特异性结合,表明体外表达的重组蛋白OmpK具有良好的免疫原性和反应原性。利用该抗溶藻弧菌外膜蛋白OmpK的抗血清建立了间接ELISA检测方法,检测灵敏度为104CFU/mL,能特异性检测出溶藻弧菌,与其他菌株无交叉反应。
- 李明云丁文超陈炯史雨红
- 关键词：溶藻弧菌原核表达
