国家教育部博士点基金(20102104110003)
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 相关作者：马晓春穆恩梁英健章志丹刘秀娟更多>>
- 相关机构：秦皇岛市第一医院中国医科大学中国医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金沈阳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脓毒症糖尿病大鼠肺脏血管内皮细胞损伤及DDAH2／NOS／NO系统变化被引量：4
- 2013年
- 目的探讨糖尿病脓毒症大鼠肺微血管内皮细胞损伤及一氧化氮系统在其发生机制中的作用。方法中国医科大学动物实验中心，清洁级Wistar大鼠64只随机（随机数字法）分为A、B、C、D四组，（健康对照组，n=16、糖尿病组，n=16、单纯脓毒症组，n=16、糖尿病发生脓毒症组，n=16）。糖尿病模型，一次性腹腔注射链脲左菌素60mg／kg，48h后随机测定尾静脉末梢血糖≥16．67mmol／L，为模型成功，饲养4周后下一步试验。脓毒症模型：一次性尾静脉注射大肠杆菌内毒素10mg／kg体质量。测定全血Tie-2mRNA表达，测定肺脏组织对伊文思蓝渗透性及肺脏干湿质量比、血清及肺组织NO含量，real-timePCR测定肺组织诱生型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS）、内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）、DDAH2mRNA水平。数据采用单因素方差分析，并用LSD法进行组问两两比较，P〈0．05为差异有统计学意义。结果糖尿病脓毒症组较单纯脓毒症组全血Tie-2mRNA表达增多（19．72±0．70）VS．（3．99±0．92），P=0．00，肺干湿质量比更为降低（0．19±0．01）VS．（0．22±0．01），P=0．000，肺脏对EBD通透性增加更为严重（3．76±0．77）vs．（1．74±0．24），P=0．000，血清一氧化氮水平增高水平D组低于C组，（123．13±4．24）VS．（188．30±5．18），P=0．000。在肺组织中表达，两组均显示出高NO水平（53．62±6．70），（23．63±3．92）vs．（10．37±1．29），P=0．00，且D组近2倍高于C组（P=0．00）A、B、C组eNOS表达各组之间差异无统计学意义，D组低于A组，（0．07±0．02）VS．（0．38±0．05），P=0．017；iNOS表达C、D组均高于A组，（80．23±2．49），（32．48±5．37）VS．（1．74±0．23），均P=0．00；D组高于C组（P=0．00）。DDAH2mRNA水平D及C组均低于A组，（0．49±0．13），（7．26±0．50�
- 刘秀娟穆恩梁英健章志丹马晓春
- 关键词：脓毒症肺微血管内皮细胞内皮细胞损伤
- Ⅶ因子活化蛋白酶对肺纤维母细胞增殖和胶原合成的影响被引量：1
- 2011年
- 目的观察Ⅶ因子活化蛋白酶（FSAP）对肺纤维母细胞增殖和胶原合成的影响。方法体外培养人肺纤维母细胞（HPF），分别加入含肝素10mg／L、血小板源性生长因子-BB（PDGF—BB）20μg／L、FSAP12mg／L和抑肽酶10mg／L的混合液，用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrDU）摄入法测定细胞增殖情况；用荧光定量聚合酶链反应（PCR）和蛋白质免疫印迹法（Western blotting）分别检测细胞胶原Ⅲ的mRNA和蛋白表达；用Western blotting法检测细胞p42／p44丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）的磷酸化。结果与空白对照组比较，PDGF—BB能刺激HPF的增殖和胶原Ⅲ合成（细胞增殖：无肝素1．23±0．06比1．01±0．01，加肝素1．24±0．04比0．98±0．01；胶原ⅢmRNA表达：无抑肽酶1．79±0．02比1．00±0．00，加抑肽酶1．57±0．01比1．00±0．00；胶原Ⅲ蛋白表达：无抑肽酶0．54±0．26比0．17±0．05，加抑肽酶0．59±0．31比0．24±0．15，均P〈0．05），并使磷酸化p42／p44MAPK表达增加（无抑肽酶0．89±0．24比0．51±0．17，加抑肽酶0．97±0．41比0．37±0．05，均P〈0．05）。FSAP加用肝素后可明显抑制PDGF—BB引起的细胞增殖（0．92±0．23比1．19±0．11，P〈0．05）；当PDGF—BB与FSAP和肝素共同作用时，与单用PDGF—BB比较，FSAP对HPF胶原Ⅲ的合成、p42／p44MAPK磷酸化具有抑制作用（胶原ⅢmRNA表达：0．61±0．02比1．79±0．02，胶原Ⅲ蛋白表达：0．15±0．12比0．54±0．26，p42／p44MAPK磷酸化：0．57±0．16比0．89±0．24，均P〈0．05）；加用抑肽酶可逆转FSAP的抑制作用（胶原ⅢmRNA表达：2．37±0．21比0．61±0．02；胶原Ⅲ蛋白表达：0．55±0．24比0．15±0．12；p42／p44MAPK磷酸化：0．86±0．41比0．57±0．16，均P〈0．05）。结论FSAP能通过抑制p42／p44MAPK磷酸化来发挥对HPF增殖和胶原合成的抑制作用。
- 穆恩陈松李鑫马晓春
- 关键词：血小板源性生长因子-BB胶原
- 脓毒症糖尿病大鼠肺组织DDAH2表达变化及意义被引量：2
- 2013年
- 目的:观察二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(dimethylarginine dimethylaminohydrolase 2,DDAH2)在糖尿病脓毒症机体中的表达变化,探讨血管内皮功能损害的发生机制。方法:64只Wistar大鼠随机分为正常对照组、单纯脓毒症组、糖尿病组、糖尿病脓毒症组,每组16只。免疫组织化学方法观察肺组织结构变化及DDAH2表达的分布变化。Griess法测定血清及肺组织一氧化氮(nitrite oxide,NO)含量,real-time PCR测定肺组织DDAH2 mRNA水平。结果:免疫组织化学显示糖尿病组大鼠肺组织平均光密度值(average optical density value,AOV)无明显变化,RT-PCR显示DDAH2 mRNA表达水平低于正常对照组(P<0.05);脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)腹腔注射后,单独脓毒症组和糖尿病脓毒症组肺组织DDAH2 AOV值及mRNA表达较正常对照组均明显降低(均P<0.01);且糖尿病脓毒症组AOV值低于单纯脓毒症组(P<0.01),DDAH2 mRNA表达亦低于单纯脓毒症组(P<0.05)。糖尿病脓毒症组及单纯脓毒症组血清及肺组织中NO水平均增高,血清测定前者低于后者(P<0.05),但肺组织中前者高于后者近2倍(P<0.05)。结论:脓毒症肺表现为DDAH2表达下调,糖尿病脓毒症肺组织表现为DDAH2表达更为明显下调,提示存在更为严重的血管内皮细胞损害,因此DDAH2表达下调可能参与脓毒症糖尿病机体肺损伤的发生。
- 刘秀娟穆恩梁英健章志丹马晓春
- 关键词：脓毒症糖尿病
- 高糖培养脂多糖刺激下肺脏微血管内皮细胞通透性改变及DDAH／NOS／NO失平衡在其发生机制中的作用被引量：4
- 2013年
- 目的探讨高糖对脂多糖（LPS）刺激下血管内皮细胞损伤的影响及其机制。方法将人肺脏微血管内皮细胞（PMVEC）分为正常糖组（NG组）、正常糖＋LPS刺激组（NGL组）、高糖组（HG组）、高糖＋LPS刺激组（HGL组），分别给予含10％小牛血清的正常糖（5．5mmol／L）或高糖（33mmol／L）培养5d，加入10mg／LLPS刺激细胞24h。采用免疫荧光染色观察细胞纤维肌动蛋白（F-actin）的分布及变化；扫描电镜观察细胞膜窗孔数量及孔径变化；细胞迁移实验（Transwell）测定单层内皮细胞的辣根过氧化物酶（HRP）通透性；硝酸盐还原法（Griess法）检测细胞培养上清液中一氧化氮（NO）含量；蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）测定细胞二甲基精氨酸-二甲胺水解酶2（DDAH2）、诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的蛋白表达。结果与NGL组比较，HGL组PMVEC的F-actin分布排列紊乱，细胞膜窗孔异常增大、增多，细胞单层对HRP通透率增加[（53．62±6．70）％比（23．63±3．92）％，P〈0．01]，细胞DDAH2表达（积分A值）减少（0．33±0．08比0．77±0．14，P〈0．01），iNOS表达（积分A值）增加（1．40±0．29比1．04±0．09，P〈0．01），eNOS表达（积分A值）减少（0．67±0．09比0．91±0．17，P〈0．05），上清液NO含量（μmol／L）增多（20．36±2．25比7．99±0．33，P〈0．01）。结论高糖加重LPS刺激下体外培养PMVEC的F—actin分布紊乱、单层细胞通透性增加；NO调节紊乱可能参与了PMVEC损害的发生。
- 刘秀娟穆恩梁英健章志丹马晓春
- 关键词：高糖内皮细胞通透性
