山东省自主创新成果转化重大专项项目(2008ZHZX11103)
- 作品数：8 被引量：50H指数：5
- 相关作者：沈志强王金良苗立中郭广君谢金文更多>>
- 相关机构：山东省滨州畜牧兽医研究院山东农业大学更多>>
- 发文基金：山东省自主创新成果转化重大专项项目“十一五”国家科技支撑计划山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪瘟脾淋毒耐热保护剂活疫苗内毒素检测方法的建立与应用被引量：1
- 2010年
- 依据《中华人民共和国兽药典》2005年版(一部)附录112-115和《中华人民共和国药典》2005年版(三部)ⅫE收载的细菌内毒素检测方法及指导原则进行实验。研究猪瘟脾淋毒(耐热保护剂)活疫苗对细菌内毒素检查试验的干扰情况,并建立其内毒素检测方法。结果猪瘟耐热保护剂活疫苗在10倍稀释后对灵敏度为0.25EU/ml的鲎试剂无干扰,细菌内毒素检测方法可用于猪瘟耐热保护剂活疫苗内毒素的检测。
- 郭广君吕素芳苗立中毕妍丽沈志强
- 关键词：细菌内毒素鲎试剂
- 采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法对猪瘟强毒与疫苗弱毒的鉴别研究被引量：11
- 2012年
- 为建立一种能够区分猪瘟病毒(CSFV)强毒与弱毒疫苗C株的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR结合熔解曲线分析方法,本研究对GenBank中登录的25株CSFV强毒株和兔化弱毒疫苗C株全基因组序列进行比较分析,设计一对共用下游引物以及分别针对CSFV强毒株与弱毒疫苗的特异性上游引物,其Tm值分别为84.5±0.5℃和88.5±0.5℃,熔解曲线分析显示为单特异峰。检测结果显示本实验建立的鉴别CSFV强毒感染与弱毒疫苗的荧光定量RT-PCR结合熔解曲线分析方法特异性强,对其他相关病毒无特异性扩增;敏感性高,最低检出量为5×RID50的细胞疫苗基因组拷贝;重复性好;并且扩增效率高、线性范围广、检测时间短,可对免疫猪群中CSFV强毒感染做出快速准确的鉴别检测,为有效防制猪瘟提供依据。
- 谢金文李安肖跃强王金良李峰沈志强崔言顺
- 关键词：猪瘟熔解曲线
- 鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1基因的分子特征被引量：1
- 2013年
- 本研究于2011年8月从山东省某鸡场鸡群中分离一株病毒,通过对分离株进行病毒致鸡胚矮小化试验、RT-PCR、动物回归试验等方法证实分离到鸡传染性支气管炎病毒(AIBV),命名为SDLVS株。根据GenBank上发表的AIBV的S1基因序列,用Oligo6.0设计引物,对分离株SDLVS株S1基因进行序列扩增,测序及序列分析。将分离的AIBV毒株与中国常用疫苗毒株、其他血清型参考毒株分别进行核苷酸和氨基酸系统发生进化关系分析。SDLVS S1基因由1611个核苷酸组成,编码含537个氨基酸残基的多肽。SDLVS株与55株参考毒株的同源性比较,核苷酸同源性在72.4%～99.6%之间,推导氨基酸序列同源性在71.2%～99.3%之间。从进化树分析中SDLVS株与Mass型参考毒株核苷酸同源性最高,特别是与H120核苷酸同源性最高为99.6%,进化亲缘关系最近,提示这2株毒株的存在可能与长期使用Mass血清型AIBV疫苗,从而产生疫苗的免疫压力有关。
- 毕研丽苗立中王金良郭广君吕素芳沈志强
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒遗传进化分析
- SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测猪瘟疫苗病毒含量的研究
- 为建立一种能够快速定量检测猪瘟兔化弱毒疫苗病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法。对GenBank中登录的25株猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株基因组全序列进行比较分析,在其高度保守的5′端非编码区设计一对针对猪瘟兔化弱毒...
- 李安沈志强崔言顺谢金文王金良李建亮李峰
- 关键词：猪瘟猪瘟病毒荧光定量
- 文献传递
- ARV、REV与ALV三重RT-PCR检测方法的建立被引量：8
- 2012年
- 根椐GenBank中已发表的禽呼肠孤病毒(ARV)、禽网状内皮增生病病毒(REV)、禽白血病病毒(ALV)等3种病毒基因组序列,设计了3对分别与ARV、REV和ALV某段基因序列互补的引物。在建立各病毒单项RT-PCR技术的基础上,优化三重RT-PCR反应条件,建立了3种病毒的三重RT-PCR技术。结果表明,用这3对引物对同一样品中的ARV、REV、ALV核酸模板进行三重RT-PCR扩增,可同时扩增ARV的247bp,ALV的675bp,REV的467bp的特异性片段,而对其他6种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明,该三重RT-PCR技术能检出10pg的ALV、1pg的ARV和10pg的REV模板。用42份临床病料对本研究多重RT-PCR技术和单项RT-PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为92%以上。表明建立的多重RT-PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断。
- 毕研丽王金良郭广君吕素芳杨慧宋峰苗立中沈志强
- 关键词：禽呼肠孤病毒禽网状内皮增生病病毒禽白血病病毒
- 猪瘟强毒和疫苗毒RT-nPCR鉴别诊断方法的建立与初步应用
- 对GenBank中登录的25株猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株基因组全序列进行比较分析,在其高度保守区设计一对通用引物,扩增片段为609bp,并在该对引物扩增区域内设计针对弱毒疫苗的特异引物,扩增片段为237bp.该方法能...
- 李安崔言顺沈志强谢金文王金良曲光刚李峰李建亮
- 关键词：猪瘟病毒兔化弱毒疫苗
- 文献传递
- SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测猪瘟疫苗病毒含量被引量：12
- 2010年
- 为建立一种能够快速定量检测猪瘟兔化弱毒疫苗病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法。对GenBank登录的25株猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株基因组全序列进行比较分析,在其高度保守的5′端非编码区设计1对针对猪瘟兔化弱毒疫苗的特异性引物,扩增片段为245 bp,且不与牛病毒性腹泻病毒以及其他猪源病毒发生非特异性反应。应用实时荧光定量RT-PCR法对16份猪瘟脾淋苗和细胞苗进行定量检测,结果表明,102拷贝/μL的总RNA即能得到特异性扩增,在107~102拷贝/μL线性范围内有良好的扩增曲线,并与兔体定型热反应有良好的相关性。该法具有敏感性、特异性、重复性好等优点,可望取代传统的兔热法用于猪瘟疫苗生产过程中的效价测定及指导疫苗的配制,也为猪瘟病毒分子生物学研究提供一种新的有效工具。
- 李安崔言顺沈志强谢金文王金良李建亮曲光刚李峰
- 关键词：猪瘟兔化弱毒疫苗株荧光定量
- 禽网状内皮组织增生病病毒套式PCR检测方法的建立被引量：4
- 2011年
- 根据GenBank中登录的禽网状内皮组织增生病病毒(REV)基因组序列,设计合成了2对引物,外部引物的扩增片段大小为467 bp,内部引物的扩增片段大小为314 bp,建立了适合REV快速检测的套式PCR方法。采用该方法对REV毒株进行了检测,结果显示能扩增到314 bp的条带;禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、减蛋综合征病毒、禽白血病病毒、禽呼肠孤病毒、马立克氏病病毒的扩增结果均为阴性。该方法第1次扩增的敏感性是100 pg,第2次扩增的敏感性是1 fg,第2次比第1次扩增的敏感性高105倍。所建立的套式PCR方法具有敏感性高、重复性好、特异性强等优点,可用于禽网状内皮组织增生病的临床诊断和分子流行病学调查。
- 毕研丽孙翠平王金良郭广君吕素芳苗立中沈志强
- 关键词：禽网状内皮组织增生病病毒套式PCR
- 新型反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)鉴别猪瘟强毒和弱毒疫苗方法的建立被引量：7
- 2011年
- 对GenBank中登录的25株猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株基因组全序列进行比较分析,在其高度保守区设计1对通用引物,扩增片段为609bp,并在该对引物扩增区域内设计针对疫苗弱毒的特异引物,扩增片段为237bp,建立一种能够区分猪瘟病毒强毒和疫苗弱毒的敏感、特异、重复性好的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)鉴别诊断方法。该方法能将我国大陆地区流行的不同基因亚群的猪瘟病毒强毒与疫苗弱毒完全区分开来,且不与牛病毒性腹泻病毒及其他猪源病毒发生非特异反应。应用本试验建立的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)方法可以及早对猪瘟作出准确诊断,并可将强毒感染猪迅速从弱毒疫苗免疫猪群中筛选出来,减少了未感染免疫猪被误杀的可能性。
- 李安崔言顺沈志强谢金文王金良曲光刚李峰李建亮
- 关键词：猪瘟病毒强毒兔化弱毒疫苗
- 采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法对猪瘟强毒与疫苗弱毒的鉴别研究
- 为建立一种能够区分猪瘟病毒(CSFV)强毒与弱毒疫苗C株的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR结合熔解曲线分析方法,本研究对GenBank中登录的25株CSFV强毒株和兔化弱毒疫苗C株全基因组序列进行比较分析,设计...
- 谢金文李安肖跃强王金良李峰沈志强崔言顺
- 关键词：猪瘟熔解曲线
- 文献传递
