江西省自然科学基金(20122BAB205002)
- 作品数：4 被引量：20H指数：3
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- MicroRNA-132增强乙酰胆碱对肺泡巨噬细胞炎症反应的抑制作用被引量：4
- 2015年
- 目的 观察调控microRNA-132 （miR-132）联合乙酰胆碱（ACh）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的作用.方法 分别采用FAM荧光标记的mimic/inhibitor阴性对照（NC）、miR-132 mimic/inhibitor、mimic/inhibitor NC转染大鼠肺泡巨噬细胞NR8383,通过荧光显微镜观察转染效率,实时荧光定量PCR检测miR-132的表达.转染后细胞给予LPS（1μg/mL）刺激或LPS＋ ACh（10 μmoL/L）处理,采用酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β （IL-1β）及白细胞介素-6（IL-6）浓度.两组间均数比较采用独立样本t检验,以P ＜0.05为差异具有统计学意义.结果 通过在NR8383细胞中转染mimic FAM NC确定50 nmol/L为转染mimic的最佳浓度.与mimic NC组相比,miR-132 mimic组细胞中miR-132的表达上调了（21.54±2.14）倍（P=0.001）.LPS组中结果发现miR-132 mimic上清液中TNF-α（P=0.683）、IL-1β（P=0.770）、IL-6（P=0.872）水平较mimic NC差异均无统计学意义;LPS＋ ACh＋ mimic NC组TNF-α（P=0.008）、IL-1β（P =0.004）、IL-6 （P =0.003）水平与LPS＋mimic NC组相比均下降;LPS＋ ACh＋ miR-132 mimic组TNF-α（P=0.001）、IL-1β （P =0.001）、IL-6 （P =0.001）水平与LPS＋ ACh＋ mimic NC组相比均下降.通过转染inhibitor FAM NC确定100nmol/L为转染inhibitor的最佳浓度.LPS组miR-132 inhibitor上清液中TNF-α（P=0.800）、IL-1β（P =0.449）、IL-6 （P =0.418）水平较inhibitor NC差异均无统计学意义.LPS＋ ACh组结果显示miR-132 inhibitor可逆转ACh介导的TNF-α （P =0.018）、IL-1β （P =0.022）、IL-6 （P=0.032）水平的下降.结论 在体外培养环境,单独给予LPS时过表达miR-132或抑制miR-132活性不影响肺泡巨噬细胞炎症反应,但miR-132可增强ACh对LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应的抑制作用.
- 刘芬李勇赵宁李东海江榕曾振国邵强彭菲菲王燕钱克俭
- 关键词：乙酰胆碱肺泡巨噬细胞炎症反应白细胞介素-1Β白细胞介素-6
- 乙酰胆碱酯酶在脂多糖诱导肺泡巨噬细胞中的变化被引量：3
- 2014年
- 目的 观察脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激大鼠肺泡巨噬细胞NR8383后乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,ACHE）的表达变化,为研究胆碱能抗炎通路的调控提供新的实验依据.方法 将体外去致热源培养的NR8383细胞分为对照组及LPS（1μg/mL）刺激组,于刺激后3、6、12、24 h各时间点分别离心收集上清液及细胞沉淀,采用酶联免疫吸附法（enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA）测定上清液中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的变化,实时定量PCR检测细胞中AChE mRNA的表达改变,蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测细胞中AChE蛋白的表达变化,乙酰胆碱酯酶T-CHE测试盒检测上清液中AChE活性的变化.组间多重比较采用单因素方差分析,进一步采用LSD-t检验进行两两比较,P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 与对照组相比,TNF-α的含量在LPS刺激NR8383细胞后3h开始显著上升（P＜0.05）,12 h达高峰,24 h下降但仍明显高于对照组水平（P＜0.05）.与对照组相比,AChE mRNA于刺激后3h开始上升,升高（3.19±0.44）倍（P＜0.05）,6h后达高水平并维持于此水平,6、12、24 h分别上调[（5.65±0.63）、（5.40±0.71）、（5.35±0.77）[倍（与对照组相比,均P＜0.05）;AChE蛋白的表达及上清液中AChE的活性在LPS刺激后12 h与各自对照组相比均上升[AChE蛋白：（1.37±0.01） vs.（1.05±0.02）,P＜0.05; AChE活性：（6.14±1.13） U/mLvs.（2.64±0.85） U/mL,P＜0.05],随后呈下降趋势,于LPS作用24 h时均低于各自对照组[AChE蛋白：0.65±0.05,P＜0.05,AChE活性：（0.56±0.19）U/mL,P＜0.05].结论 LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞后,AChE的表达增加,提示其可能参与肺泡巨噬细胞炎症反应的调控;LPS刺激后24 h,AChE mRNA仍处于高表达水平,AChE蛋白及活性却下降,提示在肺泡巨噬细胞炎症反应中可能存在AChE转录后水平的调控.
- 刘芬江榕李勇曾振国聂成赵宁黄彩雪夏亮钱克俭
- 关键词：乙酰胆碱酯酶脂多糖肺泡巨噬细胞炎症反应脓毒症
- 微小RNA-132在脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应中的表达变化被引量：8
- 2014年
- 目的观察脂多糖（LPS）诱导大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应后微小RNA-132（miR-132）的动态变化，以初步探讨miR-132在肺泡巨噬细胞炎症反应中的作用。方法将体外去致热源培养的大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383分为空白对照组和以终浓度1mg／LLPS刺激3、6、12及24h组，分别收集各时间点上清液及细胞，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测上清液中炎症因子肿瘤坏死因子-0I（TNF-仅）、白细胞介素（IL-113和IL-6）的含量，采用实时定量聚合酶链反应（PCR）检测细胞中miR-132的表达。结果与空白对照组相比，LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞后3h上清液中TNF-α．含量（ng／L：364．83±46．29比34．07±8．62，P〈O．01）、IL-113含量（ng／L：153．83±43．67比32．334-10．62，P〈0．05）、IL-6含量（ng／L：183．854-43．52比42．62±11．21，P〈0．05）即明显升高，随时间延长均逐渐升高至12h达峰值（TNF-α：605．09±57．13，IL-1B：377．09±28．55，IL-6：558．04±77．45，均P〈O．01），24h时均有所下降（TNF-α：281．95±41．61，IL-18：263．17±51．36，IL-6：438．74±79．94），但仍显著高于空白对照组（均P〈0．01）。LPS刺激后3h，miR-132表达水平较空白对照组上调了（1．12±0．11）倍（P=0．995），6、12、24hmiR-132表达较空白对照组分别上调了（5．98±0．65）、（7．64±0．53）和（8．92±0．83）倍（均P〈0．01）。结论LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应后，miR-132表达随时间延长逐步上调，其可能参与调控大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应。
- 刘芬江榕李勇曾振国赵宁夏亮聂成钱克俭
- 关键词：脂多糖肺泡巨噬细胞炎症反应
- MicroRNA-132通过调控胆碱能通路减轻肺泡巨噬细胞炎症反应被引量：5
- 2016年
- 目的:探讨microRNA-132(miR-132)通过调控胆碱能通路减轻肺泡巨噬细胞炎症反应的作用机制。方法:向大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中转染miR-132 mimic、mimic阴性对照(NC)、miR-132 inhibitor或inhibitor NC,转染后用脂多糖(LPS)和(或)乙酰胆碱(ACh)处理细胞;采用real-time PCR检测乙酰胆碱酯酶(AChE)的m RNA表达;采用Western blot检测细胞中AChE、信号转导及转录激活因子3(STAT3)和磷酸化STAT3(p-STAT3),以及细胞浆和细胞核中核因子κB(NF-κB)蛋白的改变;采用AChE活性测试盒检测细胞上清液中AChE活性的改变;采用免疫荧光检测NF-κB的核移位变化。结果:上调或下调miR-132不影响AChE的mRNA相对表达水平;上调miR-132可使AChE蛋白及活性的水平均显著降低(P<0.05),下调miR-132可使AChE蛋白及活性的水平均显著升高(P<0.05)。当给予LPS+ACh作用时,miR-132 mimic组对NF-κB p65核移位的抑制作用较mimic NC组更强(P<0.05),miR-132 inhibitor组较inhibitor NC组更弱(P<0.05);miR-132 mimic组对STAT3及p-STAT3蛋白的抑制作用较mimic NC组更强(P<0.05)。结论:miR-132通过调控胆碱能通路减轻肺泡巨噬细胞炎症反应的作用机制可能是miR-132靶向作用AChE,抑制AChE对ACh的水解作用,从而增强ACh的抗炎作用,抑制NF-κB及STAT3的活化。
- 刘芬李勇赵宁李东海江榕曾振国邵强彭菲菲王燕钱克俭
- 关键词：乙酰胆碱酯酶乙酰胆碱
