国家自然科学基金(30171074)
- 作品数：8 被引量：37H指数：4
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- 蜡样芽胞杆菌深圳株754-1 PLC基因的克隆及表达被引量：3
- 2007年
- 以本实验室分离筛选的高产PLC的蜡样芽胞杆菌深圳株754-1为供体菌,以大肠杆菌DH5α和BL21(DE3)为受体菌,构建高效表达胞内PLC的工程菌。以754-1菌基因组为模板,经PCR扩增,将得到的PLC基因连接到T载体上,转入大肠杆菌DH5α。经Amp抗性筛选的阳性克隆子提取重组质粒,双酶切,回收含PLC基因的片段并将其克隆到pGEX-KG载体,获得重组质粒pGEX-KG-PLM,该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。用IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析,在分子量为38kd处有一条明显的表达带。
- 任龙杨宁陈福生陈涛
- 关键词：蜡样芽胞杆菌磷脂酶C克隆
- PLC对血小板游离钙离子浓度作用实验条件研究
- 2004年
- 对荧光法测定磷酯酶C对血小板细胞质游离钙离子浓度作用的实验条件进行了研究.结果表明,在本实验条件下,Fura 2／AM合适的浓度为4μmol／L;最适pH为7.4;血小板的浓度在1×108～3×108个／L;保护剂ASA及激活剂ADP的浓度分别为0.937mmol／L和20mmol／L;波长选用350nm和380nm;背景值对实验结果没有影响.
- 杨芳王常高干信
- 关键词：PLC游离钙离子浓度荧光法FURA-2/AM指示剂
- 磷酯酶C对家兔血小板聚集和超微结构的影响被引量：12
- 2003年
- 目的 应用电镜研究磷酯酶C(phospholipaseC ,PLC)对家兔血小板聚集和超微结构的影响 ,以探讨用药后PLC抗血小板聚集作用的机制。方法 家兔颈动脉插管取血 ,制备PRP ,将其分为 4组 :①空白对照组 ;②生理盐水组 ;③ 0 5UPLC组 ;④ 2 5UPLC组。 2～ 4组分别用ADP诱导聚集 ,测出其聚集抑制率 ,各组分别制成超薄切片样品进行电镜观察、摄片。结果 0 5、2 5UPLC明显抑制血小板聚集反应 ,聚集抑制率分别为 86 0 3 %± 12 6%和 82 47%±5 49% ;0 5UPLC抑制血小板形成伪足 ,α颗粒和致密颗粒较多 ,OCS管腔较小 ,其超微结构较生理盐水组变化小 ;2 5UPLC处理血小板的形态结构和超微结构与空白对照组无差异 ,血小板呈圆形或椭圆形 ,边缘光滑 ,无伪足样突起 ,α颗粒、致密颗粒、OCS等正常分布于胞质中。结论 PLC明显抑制ADP诱导的血小板聚集反应及其超微结构的改变 。
- 宋建华陈明锴王常高孙松柏陈涛
- 关键词：血小板超微结构抗血小板聚集作用
- PLC对ADP诱导的兔血小板cAMP的影响被引量：2
- 2005年
- 目的 测定磷酯酶C(phospholipaseC,简称PLC,下同)对ADP诱导的兔血小板cAMP的影响,从而进一步阐明PLC抗血小板聚集作用的机制。方法 取家兔的PRP,除去红细胞,分别用生理盐水、ASA和不同剂量的PLC处理,以ADP诱导激活,采用三氯醋酸法制备血小板cAMP,再用放射免疫分析法分别测定cAMP含量。结果 家兔血小板经生理盐水处理后的cAMP含量为 ( 20 16±0 91 ) pmol/109platelets,而经生理盐水、ASA668μmol·L-1、5、10、15、20和25UPLC·ml-1各组处理,并以ADP激活的血小板,测得的cAMP含量分别为 13 85±1 14, 16 27±0 36, 18 74±0 55,19 80±0 52, 20 49±0 43, 22 55±0 61和 24 24±0 85(pmol/109 platelets)。以生理盐水作为对照,ASA668μmol·L-1、5、10、15、20和 25UPLC·ml-1剂量组对激活状态下血小板cAMP的含量有增加的作用,增加率 (% )分别为17 47, 35 31, 42 96, 47 94, 62 82, 75 02。结论 PLC使得ADP激活后的兔血小板cAMP水平提高(P<0 01),且呈剂量依赖性,表明PLC具有提高血小板中cAMP水平的作用。这可能是PLC抗血小板聚集作用的重要原因之一。
- 王常高杨芳陈明锴干信何东平陈涛
- 关键词：PLC血小板CAMP抗血小板聚集
- 四株高产磷脂酶C新菌株的鉴定和分类被引量：13
- 2004年
- 在前面研究高产磷脂酶C(PLC)菌株筛选及其抗血小板功能的基础上 ,对新筛选的四株高产PLC的75 4 1、779、970和 110 7菌株进行了鉴定和分类。通过形态特征、培养特征、生理生化特征以及 16SrRNA序列测定及其同源性分析 ,证实 75 4 1菌株与Bacilluscereus基本一致 ,因此将 75 4 1菌株分类属于蜡状芽孢杆菌 ,命名为蜡状芽孢杆菌深圳株 75 4 1,B cereusshenzhen 75 4 1strain。而 779、970和 110 7三株菌则与Bacillusmycoides基本一致 ,因而将这三株菌分类属于蕈状芽孢杆菌 ,分别命名为蕈状芽孢杆菌深圳株 779,B mycoidesshenzhen 779strain ,蕈状芽孢杆菌深圳株 970 ,B mycoidesshenzhen 970strain ,和蕈状芽孢杆菌深圳株 110 7,B mycoidesshenzhen 110 7strain。这将为进一步利用这些菌株及其PLC打下坚实的基础。
- 王常高高林宋冬林陈明锴张勇孙春来杨芳陈涛
- 关键词：磷脂酶C菌株蜡状芽孢杆菌
- PLC肠溶性微囊粉的抗血小板聚集作用被引量：2
- 2007年
- 以磷脂酶C(PLC)肠溶性微囊粉经犬胃给药,检测其抗血小板聚集作用和检测犬血浆中PLC的含量。犬胃灌肠溶性PLC微囊粉后,抗血小板聚集的平均抑制率为86.9%±1.4%。同时检测出其犬血浆中有PLC的存在,比用药前有明显的增加。
- 瞿永华邓利斌陈明锴何东平陈涛洪旎桂艳
- 关键词：磷脂酶C抗血小板聚集作用抑制率
- 磷酯酶C抗血小板功能的研究Ⅰ——对血小板聚集率和粘附率的作用被引量：21
- 2003年
- 目的 通过研究PLC对家兔血小板粘附率和聚集率的作用 ,以探讨PLC对血小板功能的影响。方法 家兔麻醉后 ,经十二指肠给予阴性对照辅料 ,阳性对照ASA和 6种剂量的PLC ,于给药前及给药后 1、2、4h颈动脉取血测定以ADP、AA、Collagen为诱导剂时的血小板聚集率 ,同时用玻球法测定血小板的粘附率。结果 PLC 10 0、 2 0 0IU·kg-1对家兔血小板粘附率无明显影响。PLC 4 0 0～ 10 0 0IU·kg-1可显著地降低血小板粘附率 ,并呈现一定的剂量效应依赖关系。同一剂量PLC组给药后 1、2、4h时相比P <0 0 5。PLC10 0～ 10 0 0IU·kg-16种剂量组在用ADP、AA、Collagen诱导时 ,均可显著地抑制血小板聚集 ;与阴性对照辅料组相比P <0 0 5 ,与阳性对照组相比 ,在ADP诱导时 ,10 0IU·kg-1组的抑制较弱 (P <0 0 5 ) ,而 80 0、10 0 0IU·kg-1组的抑制较强 (P <0 0 5 ) ,并呈一定的剂量效应和时间效应关系 ;而在AA诱导时 ,PLC各组在给药后 2、4h时的抑制率与ASA的相当 ,无明显剂量效应依赖关系 ,而有一定的时间效应关系 ;在Collagen诱导时 ,PLC各组的抑制作用均弱于ASA(P<0 0 5 ) ,无明显的剂量效应依赖关系 ,而有一定的时间效应关系。结论 ①PLC经十二指肠给药 ,10 0、2 0 0IU·kg-1对家兔血小板粘附性无明显影响 ,而
- 陈涛宋建华陈明锴王歆王常高孙松柏
- 关键词：血小板聚集率粘附率
- 磷脂酶C对ADP诱导的兔血小板IP_3水平的影响被引量：7
- 2005年
- 目的测定磷酯酶C（PLC）对ADP诱导的兔血小板三磷酸肌醇（IP3）的影响，从而进一步阐明PLC抗血小板聚集作用的机制。方法取家兔血除去红细胞制备血小板，血小板计数后分为8个组。第1组用生理盐水处理，第2组用ADP处理，第3组用ASP处理以ADP诱导激活，第4～8组分别用不同剂量的PLC处理并以ADP诱导激活。采用三氯醋酸法制备血小板IR，再用放射免疫分析法分别测定IR含量。结果家兔血小板经生理盐水处理后的IP3含量为0．29pmol／10。血小板，而经ADP处理后IR含量为0．39pmol/10^8血小板。经ASP668μmol·L^-1、5、10、15、20和25U PLC·ml^-1各组处理，并以ADP激活的血小板，测得的IP3含量分别为0．19、0．08、0．15、0．25、0．04和0．18μmol／10^8血小板）。ADP组比生理盐水组IP3有明显的提高，而ASP组、不同的PLC组比ADP组IR有明显的降低（P〈0.05）。结论PLC使得ADP激活后的兔血小板IP3水平下降，且无剂量依赖性，表明PLC具有降低血小板中IP3水平的作用，这可能是PLC抗血小板聚集作用的重要原因之一。
- 陈涛王歆瞿永华尹飞宇王常高陈明锴何东平
- 关键词：血小板IP3放射免疫分析
