卫生部临床学科重点项目(20012434)
- 作品数：6 被引量：23H指数：3
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- 溴隐亭联合肿瘤坏死因子-α对人肝癌耐药细胞株化疗敏感性的影响被引量：5
- 2006年
- 目的研究溴隐亭联合肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因处理人肝癌耐药细胞株HepG2/ADM后对其化疗敏感性的影响。方法脂质体转染TNF-α基因至肝癌耐药细胞HepG2/ADM;实验分4组:空白对照组HepG2(A组)、耐药组HepG2/ADM(B组)、转染TNF-α基因组(C组)及联合溴隐亭和TNF-α组(D组);流式细胞仪检测各组罗丹明123细胞内潴留率变化、四唑盐比色法(MTT)检测C、D两组细胞耐药指数及用免疫组织化学染色、Westernblot和RT-PCR方法测定各组PKC-α、P-gp蛋白、MDR1mRNA表达的变化,流式细胞仪检测Bcl-2蛋白的表达,AnnexinV-FITC,PI双标检测各组肿瘤细胞化疗后凋亡的变化。结果MTT测定C、D两组之间耐药逆转率有显著差异(P<0·01),罗丹明123潴留率实验发现C、D两组均能明显增强其潴留作用且两组差异有统计学意义(P<0·01);P-gp蛋白和MDR1基因表达显示C、D两组之间MDR1基因和P-gp蛋白的表达无统计学意义(P>0·05),但C、B两组之间比较差异有统计学意义(P<0·01);PKC-α蛋白表达在D组明显下调(P<0·01);B组细胞Bcl-2蛋白表达明显增强,C、D两组细胞Bcl-2蛋白表达明显下调,与A组比较均有统计学意义(P<0·01),但C、D两组细胞Bcl-2蛋白表达无统计学意义(P>0·05)。细胞凋亡率C、D两组比较有统计学意义(P<0·01),D、A两组比较无统计学意义(P>0·05)。结论溴隐亭和TNF-α通过不同的机制逆转肿瘤的多药耐药性,两者联合明显加强抗肿瘤药物对细胞的毒力。
- 丁磊陈孝平张志伟靖凯曹斌朱鹏李杰张德勇
- 关键词：肿瘤坏死因子Α溴隐亭
- B超引导下建立裸鼠原位肝细胞癌多药耐药模型被引量：2
- 2006年
- 为更好地反映活体肿瘤的情况，我们利用已建立的耐药细胞系在B超引导下建立一种原位肝癌耐药动物模型，为进一步研究多药耐药（MDR）的逆转提供良好的动物平台。
- 丁磊陈孝平张志伟靖凯曹斌王志辉黎春蕾
- 关键词：耐药模型B超引导肝细胞癌裸鼠耐药细胞系
- 原发性肝癌组织中ToPoⅡα、PCNA的表达及意义被引量：4
- 2006年
- 目的探讨拓扑异构酶α(ToPoα)和核增生细胞抗原(PCNA)的表达与原发性肝癌分化及浸润、转移的关系。方法用免疫组化法检测57例未经化疗的原发性肝癌组织中ToPoα及PCNA蛋白的表达。分析其与肝癌临床病理指标之间的关系。结果ToPoα和PCNA蛋白在肝癌组织中阳性表达率分别为87.7%(50/57)和80.7%(46/57)。其表达在高分化与中、低分化肿瘤组织之间有显著差异(P<0.05、P<0.01),在有转移的患者中的表达高于无转移者(P<0.05、P<0.01),在短期生存者中的表达高于中、长期生存者(P<0.05、P<0.01);两者的表达呈显著正相关(r=0.881,P<0.01)。结论ToPoα和PCNA的检测可作为评价肝癌分化程度和侵袭、转移的指标。
- 丁磊陈孝平张万广曹斌朱鹏
- 关键词：肝肿瘤
- 人TNFα真核表达载体的构建及其在人肝癌耐药细胞株HepG2/ADM中的稳定表达被引量：3
- 2007年
- 目的:构建可在真核细胞内表达人肿瘤坏死因子alpha(hTNF-α)基因的真核表达载体,建立稳定表达hTNF-α基因的细胞模型。方法:应用RT-PCR的方法从分离的正常人外周血单核细胞(LPS刺激)中,扩增出hTNF-αcDNA,连接至载体pMD18-Tvector中,经酶切鉴定与序列测定证实;以亚克隆法构建于真核表达载体pBK-CMV的相应酶切位点,转化至大肠埃希菌DH5α,最后将表达的pBK-hTNFα重组蛋白行SDS-PAGE电泳,并作考马斯亮蓝染色分析,Westernblot鉴定;经脂质体Lipo-fectamine2000转染HepG2/ADM细胞后,经G418筛选,通过ELISA、RT-PCR方法检测其在体外转染肝癌耐药细胞HepG2/ADM后hTNFα基因和蛋白的表达。结果:自正常人外周血单核细胞中克隆的hTNF-αcDNA成功连接到pMD18-Tvector,用BamHⅠ和HindⅢ双酶切、经序列测定证实,与Genbank的序列完全一致;pBK-hTNFα的克隆表达重组蛋白经Westernblot证实此蛋白为hTNFα。克隆基因正确插入载体pBK-CMV中。pBK-hTNFα经脂质体介导转染肝癌耐药细胞后,ELISA、RT-PCR方法检测到其在转染细胞中稳定表达。结论:通过DNA重组技术成功地构建了可在体外稳定表达hTNF-αcDNA全长的真核表达载体pBK-hTNFα。
- 丁磊吴挺陈孝平张志伟曹斌靖凯赵旭
- 人肿瘤坏死因子α逆转原发性肝癌耐药性体内外实验研究被引量：3
- 2006年
- 目的：探讨外源性人肿瘤坏死因子α（TNF-α）对肝癌耐药细胞的逆转作用及对原位种植耐药动物模型抑瘤效应。方法：不同方法检测转染TNF-α后耐药细胞耐药指数及细胞对罗丹明潴留率和细胞P-gp蛋白的变化；建立耐药动物模型，计算肿瘤抑制率及检测肿植瘤的耐药蛋白表达和肝癌细胞凋亡指数的变化。结果：MTT结果显示，TNF-α耐药逆转率范围为21．3％～92．2％，其中对ADM、MMC和5-FU在逆转前后差异有统计学意义，P=0．0343；罗丹明（Rho123）试验显示，转染细胞内Rho123的积累明显增加，逆转前后细胞内荧光强度3h后达到高峰为2．47倍，差异有统计学意义，P=0．0093。细胞免疫组化结果显示，转染后细胞内P-gp蛋白表达量明显下降，吸光度值TNF组为（10．6±4．6）％，与ADM组（97．9±7．4）％相比，差异有统计学意义，P=0．0383。与亲本细胞HepG2组（8．6±2．3）％相比，差异无统计学意义，P=0．0573。体内试验显示，转染TNF-α基因的肝癌细胞种植的肿瘤生长明显减慢，移植瘤的体积和质量抑制率在转染TNF-α基因组（TNF组）分别为58％和57％，明显高于耐药细胞组（ADM组）的14％和18％，P=0．0287，接近于亲本细胞系HepG2种植肿瘤的57％和54％，P=0．0652。同时，Western blot测定P-gp蛋白表达显示，转染组为（0．12±0．03）％，较耐药组的（0．95±0．26）％显著下降，P=0．0287；TUNEL法检测细胞凋亡指数，TNF组为21．9±2．1，与ADM组2．3±1．8相比，差异有统计学意义，P=0．0087；与HepG2组的23．7±2．9相比，差异无统计学意义，P=0．0587。结论：外源性TNF-α基因能在mRNA和蛋白水平有效逆转肝癌耐药细胞的耐药性，增加耐药肝癌细胞对化疗的敏感性，降低耐药性肝癌的致瘤性。
- 丁磊陈孝平张志伟曹斌朱鹏王志辉黎春蕾
- 关键词：肝肿瘤肿瘤坏死因子药物耐受性
- 溴隐亭逆转肝癌多药耐药的机制被引量：6
- 2006年
- 目的探讨溴隐亭对肝癌多药耐药逆转的作用机制。方法体外实验分亲本细胞HepG2组(A组),耐药细胞HepG2／A13M组(B组)和B组加溴隐亭称为C组。分别检测各组细胞内荧光强度变化,细胞P-糖蛋白、蛋白激酶C α蛋白表达情况,及5种肿瘤药物半数抑制浓度及耐药指数变化。分别将肝癌细胞:HepG2和耐药细胞HepG2／ADM原位种植入裸鼠肝脏内,称A组鼠和B组鼠,另设B组种植鼠给予溴隐亭灌冒治疗称C组鼠。B超观察种植瘤的生长情况,肿瘤大小为1．0cm左右时经腹腔化疗,2周后处死裸鼠计算肿瘤的体积和质量抑制率,观察种植瘤组织多药耐药基因1不敷出 mRNA表达情况,及治疗后肝癌细胞的凋亡指数。单独检测24只种植耐药细胞HepG2／ADM的裸鼠在服用溴隐亭前后分别注射的99mTc-MIBI在肝脏肿瘤部位的潴留情况。结果体外实验结果显示在溴隐亭浓度为10 μmol／L时罗丹明123 在细胞内的潴留率均明显增加,且呈时间依赖性,对阿霉素的耐药逆转以溴隐亭浓度为10μmol／L时最显著,逆转率为 82．6％。蛋白激酶C-α蛋白表达,C组与B组比较差异有统计学意义(q=5．37,P<0．01);但两组P-糖蛋白表达差异无统计学意义(q=1.86,P>0．05)。体内试验结果显示种植瘤的体积和质量抑制率比较,C组鼠明显高于B组鼠(q1= 5．89,q2=4．92,P<0．01),接近于A组鼠(q1=2．47,q2=3．02,P>0．05)。C组鼠与B组鼠多药耐药基因1 mRNA 表达差异无统计学意义(q=3．71,P>0．05)。化疗后肿瘤细胞凋亡率比较,C组鼠明显高于B组鼠(q=3．72, P<0．01)。口服溴隐亭后肝肿瘤组织对99mTc-MIBI的潴留指数明显提高(t=3．58,P<0．01)。结论溴隐亭通过抑制 P-糖蛋白的功能可有效的逆转肝癌多药耐药性。
- 丁磊陈孝平张志伟张万广曹斌王志辉黎春蕾
- 关键词：细胞凋亡
