国家自然科学基金(30771014)
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- 相关机构：中国人民解放军总医院中南大学湘雅二医院中南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中国博士后科学基金更多>>
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- 神经生长因子诱导后的神经元样PC12细胞与成肌干细胞共培养的实验研究
- 2012年
- 目的探讨神经元样PC12细胞对C3H小鼠成肌干细胞C2C12增殖与分化的影响。方法利用Transwell建立PC12细胞和C2C12细胞共培养体系，实验分为3组：空白对照组：C2C12细胞单独培养；实验组：C2C12细胞与已分化的PC12细胞共培养；阴性对照组：C2C12细胞与未分化的PC12细胞共培养。免疫荧光染色鉴定神经生长因子（NGF）对PC12细胞的促分化效应；流式细胞仪检测共培养条件下C2C12细胞的增殖情况；逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）和实时荧光定量核酸扩增（qPCR）检测与PC12细胞共培养3、7d后C2C12细胞生肌素、结蛋白基因的表达。结果体外条件下，NGF诱导PC12细胞呈现神经元样特征：具有细长的细胞突起，并阳性表达微管相关蛋白-2。流式细胞检测证实：已经分化的PC12细胞抑制C2C12细胞的增殖。实验组DNA合成前期的C2C12细胞所占百分比（77．2％±0．4％）较空白对照组（71．0％±0．6％）和阴性对照组（70。8％±0．8％）高，反应增殖活力的增殖指数（22．8％±0．4％）较空白对照组（29．0％±0．6％）和阴性对照组（29．2％±0．8％）低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。实验组C2C12细胞生肌素、结蛋白基因的表达高于同一培养时间其他组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论神经化的PC12细胞抑制C2C12细胞的增殖，但促进其分化。
- 刘幸卉黄维一陈荣冯利强廖华余磊曾慧君
- 关键词：成肌细胞PC12细胞细胞增殖细胞分化
- 雷帕霉素对肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响被引量：2
- 2009年
- 目的观察不同浓度雷帕霉素对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响，探讨其可能的作用机制。方法使用不同浓度雷帕霉素（1μg／L、2μg／L、4μg／L、8μg／L、16μg／L）处理大鼠肾小球系膜细胞，并设正常对照组。MTT法测不同浓度雷帕霉素干预24h、48h、72h后对细胞增殖的影响，并描记生长曲线。干预72h后，采用RT-PCR和Western印迹法分别检测各浓度雷帕霉素组细胞周期负调蛋白p27和p53的mRNA和蛋白表达变化；用流式细胞计量术检测各浓度雷帕霉素组细胞周期及凋亡率。结果小剂量雷帕霉素（1μg／L）对系膜细胞增殖即具有明显的抑制作用，停滞于G1期的细胞数明显增加，但对系膜细胞凋亡无明显影响。较大剂量雷帕霉素（8～16μg／L）能够明显增加肾小球系膜细胞凋亡。雷帕霉素能够增加肾小球系膜细胞p27、p53mRNA和蛋白表达，且呈剂量依赖性。结论雷帕霉素可能通过增加p27、p53表达抑制肾小球系膜细胞增殖和促进系膜细胞凋亡。
- 傅博张四方卓莉蔡广研谢院生魏日胞马强陈香美
- 关键词：西罗莫司肾小球系膜细胞细胞增殖
- 大鼠肾小球系膜细胞表型的增龄性变化被引量：1
- 2010年
- 目的观察大鼠肾小球系膜细胞随增龄细胞表型及功能的变化特点。方法取3、12、24月龄健康雄性Wistar大鼠原代系膜细胞进行培养,MTT法检测细胞增殖能力,进行SA-β-gal染色,采用RT-PCR和Western印迹法分别检测p21WAF1/CIP1/SDI1基因及蛋白质的表达变化,并用免疫荧光法检测系膜细胞中p21WAF1/CIP1/SDI1的表达与定位。结果大鼠肾小球系膜细胞增殖能力随增龄逐渐减弱(P<0.05),SA-β-gal染色阳性率随增龄逐渐增加(P<0.05),p21WAF1/CIP1/SDI1mRNA及蛋白质表达随增龄逐渐增加(P<0.05)。免疫荧光结果示p21WAF1/CIP1/SDI1主要在细胞核内表达,荧光强度随增龄逐渐增强(P<0.05)。结论大鼠肾小球系膜细胞随增龄细胞形态、增殖能力与衰老相关蛋白表达发生明显改变,出现了复制性衰老表型。
- 卓莉蔡广研刘伏友傅博
- 关键词：系膜细胞衰老细胞表型
- p21^(WAF1/CIP1/SDI1)在大鼠肾脏组织的增龄性变化及意义
- 2010年
- 目的研究p21野生型p53活化片段1/细胞周期蛋白依赖性激酶影响蛋白1/衰老细胞衍生抑制剂1(p21WAF1/CIP1/SDI1)在大鼠肾脏中随年龄增长的表达变化规律。方法取3月龄、12月龄及24月龄健康雄性Wistar大鼠肾组织进行衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)活性染色,TUNEL法检测细胞凋亡,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法(Westernblotassay)分别在基因及蛋白质表达水平上检测肾脏组织中p21WAF1/CIP1/SDI1的表达变化,并用免疫组化法检测p21WAF1/CIP1/SDI1在肾脏组织中的表达与定位。结果大鼠肾脏组织SA-β-gal活性随年龄增长逐渐增强,凋亡细胞也随年龄增长逐渐增加(P<0.05);p21WAF1/CIP1/SDI1mRNA表达随年龄增长逐渐增强,不同月龄比较差异有统计学意义(P<0.05)。Western印迹亦显示p21WAF1/CIP1/SDI1蛋白表达随鼠龄增加逐渐增强(P<0.05)。免疫组化结果显示,p21WAF1/CIP1/SDI1蛋白表达于大鼠肾小球足细胞,其在肾小管与间质细胞中也有表达,且随年龄增长表达增加(P<0.05)。结论p21WAF1/CIP1/SDI1在大鼠肾脏组织中的表达随年龄增加而增强,可作为肾脏组织中重要的衰老指标。
- 卓莉刘伏友蔡广研汪杨师锁柱
- 关键词：肾脏
- 抑制整合素连接激酶(ILK)表达对大鼠肾小球系膜细胞细胞间隙连接蛋白43表达的影响
- 2008年
- 目的研究抑制整合素连接激酶(ILK)表达对大鼠肾小球系膜细胞(RMC)细胞间隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法将大鼠肾小球系膜细胞分为RMC组(n=6)、ILK-con siRNA转染组(n=6)和ILK-siRNA转染组(n=6)。合成抑制ILK基因的siRNA,待细胞长至60%融合后,ILK-siRNA转染组和ILK-con siRNA转染组分别用脂质体转染ILK-siRNA或ILK-con siRNA,RMC组仅加入脂质体,24h后收集细胞,提取总蛋白和总RNA,用RT-PCR和Wester nblotting观察ILK和Cx43 mRNA和蛋白的表达。转染后继续培养24、48、72h,MTT法检测细胞活力。结果与RMC组和ILK-con siRNA转染组比较,ILK-siRNA组ILK mRNA和蛋白的表达均下降30%～50%(P<0.05,P<0.01),Cx43 mRNA水平增加30%～40%(P<0.05),Cx43蛋白水平增加60%～70%(P<0.01)。应用ILK-siRNA转染系膜细胞后24、48、72h,细胞活力均显著高于RMC组和ILK-con siRNA转染组(P<0.05,P<0.01)。结论抑制ILK途径可上调肾小球系膜细胞Cx43的表达,增强细胞活力;Cx43的调节可能是部分通过ILK途径实现的。
- 马强蔡广研陈香美孙雪峰傅博冯哲
- 关键词：整合素类连接蛋白43肾小球系膜细胞
