国家质检总局科技计划项目(2011IK170)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 相关作者：尼秀媚张京宣魏晓棠宋涛李红更多>>
- 相关机构：山东出入境检验检疫局中国海洋大学更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 普鲁兰短梗霉N2-3菌株碱性蛋白酶的纯化及性质研究被引量：2
- 2012年
- [目的]对普鲁兰短梗霉N2-3菌株的碱性蛋白酶进行纯化,并对其性质进行研究。[方法]利用层析柱Sephadex G-75与阴离子交换柱DEAE Sepharose Fast Flow纯化菌株N2-3的胞外碱性蛋白酶,并对纯化的酶进行SDS-PAGE凝胶电泳检测,同时对纯化蛋白酶的最适反应温度、温度稳定性、最适反应pH、pH稳定性进行测定,研究金属离子及各种化合物对蛋白酶活性的影响。[结果]试验中N2-3菌株的碱性蛋白酶纯化倍数和回收率分别为2.34和25.9%;SDS-PAGE凝胶电泳显示该酶的分子量约为33 kDa;该酶的最适反应温度和pH分别为52℃和9.0;Mn2+、Mg2+、Na+离子浓度在5 mmol/L时对纯化蛋白酶的酶活有激活作用,Zn2+、Ca2+、K+、Li+对酶活的影响不大,而当存在Fe2+、Fe3+、Cu2+、Co2+、Ag+、Hg2+离子时,蛋白酶活明显降低;苯甲基硫酰氟(PMSF)强烈抑制了该蛋白酶的活性,而乙二胺四乙酸(EDTA)与碘乙酸微弱抑制了该蛋白酶的活性。[结论]为普鲁兰短梗霉N2-3菌株碱性蛋白酶的工业化生产提供了一定的理论基础。
- 李红王惠尼秀媚白桦
- 关键词：蛋白酶纯化
- 番茄黑环病毒外壳蛋白基因的克隆与原核表达被引量：2
- 2013年
- 利用RT-PCR方法获得了番茄黑环病毒(TBRV)外壳蛋白(coat protein,CP)基因,将CP基因克隆到pMD19-T Simple载体,并进行测序,大小为1 399 bp。与GenBank中已报道的TBRV的CP基因核苷酸相似度达99%以上。将TBRV CP基因定向插入双酶切的pET30a中,成功构建了原核表达载体pET30a-TBRVCP,转化大肠杆菌BL-21,表达重组蛋白。SDS-PAGE电泳分析发现,通过诱导条件的优化,重组蛋白在37℃,1.0 mmol/L IPTG、4 h条件下表达量最高。
- 魏晓棠李伟涛陈宏彭青尼秀媚白桦张京宣
- 关键词：外壳蛋白基因克隆原核表达
- 菜豆荚斑驳病毒外壳蛋白基因的克隆与原核表达被引量：1
- 2013年
- [目的]克隆菜豆荚斑驳病毒(BPMV)外壳蛋白(CP)基因,并对其进行原核表达。[方法]利用RT-PCR方法克隆BPMV CP基因,将其连接至pMD19-T Simple载体后对阳性克隆进行测序,检测其与已知病毒外壳蛋白基因序列的同源性;将CP基因定向插入双酶切的pET30a,构建其原核表达载体并转化大肠杆菌BL-21表达重组蛋白。[结果]试验克隆得到的CP基因大小为1 122 bp,与NCBI中目标基因的相似度达99%以上;试验成功构建了原核表达载体pET30a-BPMV CP,发现重组蛋白在37℃、1.0 mmol/L IPTG诱导4 h条件下表达量最高。[结论]该研究为BPMV抗血清的制备与液相芯片检测方法的建立奠定了基础。
- 魏晓棠白桦尼秀媚张京宣宋涛
- 关键词：菜豆荚斑驳病毒外壳蛋白
- 南方菜豆花叶病毒外壳蛋白基因的克隆与原核表达
- 2013年
- [目的]克隆南方菜豆花叶病毒(SBMV)外壳蛋白(CP)基因,并对其进行原核表达。[方法]利用RT-PCR方法克隆SBMV CP基因,将CP基因定向插入表达载体pET28a中,构建其表达载体,并转化大肠杆菌BL-21表达重组蛋白。[结果]试验成功克隆到大小为799 bp的SBMV CP基因,测序分析发现与NCBI中目标基因的相似度达99%以上;成功构建了该基因的原核表达载体pET28a-SBMVCP,并确定重组蛋白在37℃、1.0 mmol/L IPTG、4 h条件下表达量最大。[结论]该研究为SBMV抗体的制备奠定了基础。
- 宋涛李伟涛彭青陈宏尼秀媚
- 关键词：南方菜豆花叶病毒外壳蛋白
