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一种由耐热连接酶及单链helper介导的高效DNA定向连接方法: 将两个或更多DNA片段按照设计组装在一起一直是生物学研究中非常基础且重要的一步。在启动子和外显子功能研究、蛋白质功能研究以及基因操作等传统领域中DNA连接技术都有广泛的应用。而在合成生物学这门新兴学科中,DNA连接更是成...; 周翔达宋晓怀聪孙海燕陈红岩卢大儒; 关键词：HELPER

耐热DNA连接酶介导的TLCR技术在简化DNA重组实验中的应用被引量：2: 2016年; 传统的DNA重组方法 TypeⅡ型限制酶技术受到片段纯化的限制,无法做到复杂混合体系中DNA片段的特异性连接。为解决这个问题,本研究将耐热连接酶链式反应(Thermostable ligase chain reaction,TLCR)引入DNA片段的连接与捕获。该技术利用耐热型DNA连接酶的特性,在热循环反应中配合针对目的片段末端序列设计的单链寡核苷酸连接模板——Helper,实现目的片段的特异性连接和产物数量的指数性增长。两个质粒构建实验被用于验证TLCR技术的可行性和应用效果。首先利用TLCR技术从一个未经纯化的含有7种不同大小片段的混杂体系中特异性地将一段1.5 kb的片段捕获进载体,随机抽取的克隆样品经检验准确率达到80%,验证TLCR技术在复杂混合体系中特异性连接DNA片段的可行性和准确性。在另一个质粒构建实验中,TLCR技术从λ噬菌体基因组Hind消化物中将两段总长达27 kb的片段按顺序捕获进载体,随机抽取的克隆样品经检验同样达到了80%的准确率。结果表明,TLCR技术能够简化DNA重组实验的操作,并且适用于多片段和大片段的连接,可以为生物学研究提供便利。; 周翔达宋晓怀聪孙海燕陈红岩卢大儒; 关键词：HELPER

利用TALEN系统快速构建MSTN突变小鼠模型: 引言：肌肉生长抑制素Myostatin基因(MSTN,也叫GDF8)是一种抑制骨骼肌生长发育的生长因子,为TGF-β超家族成员.其不仅在骨骼肌中表达,在肝脏,乳腺组织,脂肪组织等器官也有少量存在.现已有研究表明MSTN参...; 周芳芳姜坤林玥琳陈红岩费俭卢大儒; 关键词：MSTN TALEN HRM

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国家自然科学基金(81170786)