国家质检总局科技计划项目(2011IK176)
- 作品数：10 被引量：43H指数：4
- 相关作者：王金成顾建锋林宇陈先锋郭京泽更多>>
- 相关机构：天津出入境检验检疫局宁波出入境检验检疫局南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 南方、花生和爪哇根结线虫PCR检测方法被引量：4
- 2016年
- 为快速、准确、稳定的鉴定南方、花生和爪哇根结线虫,利用已报道的南方和爪哇根结线虫的两对特异性引物,结合本研究设计的花生根结线虫特异性引物,通过优化PCR反应体系,建立了3种根结线虫的PCR检测方法。结果表明,该方法能够特异性扩增以上3种根结线虫,特征片段长度分别为399、335和670 bp,灵敏度达到单条2龄幼虫的水平。研究结果将为以上3种根结线虫的快速鉴定提供技术支持。
- 容万韬王金成林宇顾建锋陈先锋魏亚东
- 关键词：根结线虫南方根结线虫花生根结线虫爪哇根结线虫分子鉴定
- 线粒体COI基因作为根结线虫条形码的适用性分析被引量：1
- 2016年
- 为评估线粒体COI基因作为根结线虫(Meloidogyne spp.)DNA条形码的适用性,对收集的25个根结线虫群体的线粒体COI基因进行扩增、测序,检测其扩增和测序成功率。将测序获得的COI基因序列与Q-bank中下载的根结线虫COI基因序列共同进行比对分析,利用MEGA 6.0计算种内、种间遗传距离进行"Barcoding Gap"检验以及构建NJ系统进化树作聚类分析,检验COI基因对根结线虫的物种识别能力。结果表明:线粒体COI基因扩增和测序成功率极高,扩增成功率达96%,测序成功率为100%。种间平均遗传距离为0.126,远远超过种内平均遗传距离0.002的10倍,种内遗传距离与种间遗传距离存在明显的"Barcoding Gap"间隔区。系统发育分析显示,COI基因可有效分辨出本研究15种根结线虫中的10种,物种识别率约为67%。线粒体COI基因具有极高的扩增和测序成功率、较高的物种识别能力,且扩增片段长度适宜,符合物种鉴定DNA条形码基因的标准,可作为根结线虫候选条形码基因。
- 林宇王金成张瑞峰陈先锋顾建锋李红梅
- 关键词：根结线虫DNA条形码物种鉴定
- 单条线虫DNA提取方法研究被引量：14
- 2014年
- 为探寻一种高效、稳定、廉价的单条线虫DNA提取方法,以6种植物寄生线虫作为试验材料,比较了4种方法,即直接裂解法、冻融裂解法、切割裂解法、切割冻融裂解法对单条线虫DNA的提取效果。结果表明,对线虫进行管内切割的切割冻融裂解法与切割裂解法高效、稳定,冻融裂解法效果较差,直接裂解法效果最差。对线虫进行管内切割的切割冻融裂解法和切割裂解法可高效、稳定地获得高质量的单条线虫总DNA,满足下一步的PCR扩增需求。
- 容万韬王金成刘鹏林宇郭京泽黄国明孙建华
- 关键词：裂解冻融DNA提取
- 根结线虫非中国种问题初探被引量：11
- 2012年
- 根结线虫是十分重要的植物内寄生线虫,但种类鉴定十分困难,分类状况也较混乱。该文提出了口岸检疫根结线虫所遇到的难题,列出了40种在我国曾有报道的根结线虫,对根结线虫非中国种问题进行初探并提出建议。
- 顾建锋王江岭王金成
- 关键词：根结线虫
- 乌克兰樟子松中截获畸刺孤伞滑刃线虫
- 2014年
- 宁波口岸来自乌克兰的樟子松中截获一种线虫,经形态学和分子生物学方法鉴定为畸刺孤伞滑刃线虫,并首次在GenBank登录了其部分18S和28S基因序列。其主要鉴定特征是:口针长约18μm,口针腔较宽,口针基球不明显;雄虫交合刺形状特殊,尾乳突2对,具交合伞;雌虫尾圆柱形,末端宽圆。
- 顾建锋何洁王宁陈先锋
- 关键词：形态学
- 6种根结线虫的形态和分子检测技术研究被引量：6
- 2014年
- 进境种苗中截获的根结属线虫多为2龄幼虫,难以鉴定到种。本文对苹果根结线虫、山茶根结线虫、南方根结线虫、花生根结线虫、北方根结线虫和爪哇根结线虫6种根结线虫的幼虫尾形、头帽、口针基部球、DGO及雄虫头冠等鉴别特征进行比较,并结合mtDNA-PCR-RFLP分析,可准确鉴别上述6种常见根结线虫。
- 何洁王江岭陈先锋王金成顾建锋
- 关键词：MTDNARFLP
- 河北省谷子线虫病的病原鉴定被引量：3
- 2015年
- 为鉴定河北省谷子病穗中分离获得的一个滑刃线虫群体,对其相关形态特征及测量值进行比较,并对其核糖体28S rRNA-D2/D3区与ITS区核酸序列进行比对和系统进化分析。结果表明：从河北谷子中分离的滑刃线虫群体在形态上与以前报道的贝西滑刃线虫群体非常相似;与Gen Bank中贝西滑刃线虫序列相比,28S rRNA-D2/D3区序列相似度为100%,ITS序列相似度为98%~99%;系统进化分析表明,河北谷子中贝西滑刃线虫群体与Gen Bank中贝西滑刃线虫以100%支持率聚类于同一分支。因此,河北谷子病穗中分离获取的滑刃线虫群体为贝西滑刃线虫。
- 王金成林宇顾建锋董立郭京泽陈先锋李志勇
- 关键词：症状系统进化分析DNA条形码
- 贝西滑刃线虫双重PCR检测方法研究被引量：3
- 2016年
- 为实现贝西滑刃线虫的高效、准确鉴定,根据贝西滑刃线虫核糖体28SrRNA-D2/D3片段的保守区域设计了特异性引物,并结合植物寄生线虫通用引物作为内标,构建了贝西滑刃线虫的一步双重PCR检测体系。结果表明:特异性引物GU-F/GU-R对贝西滑刃线虫具有高度的特异性,扩增出245bp的特异性目标片段,有效检测灵敏度可达0.125ng/μL线虫DNA模板量。该方法特异性好、灵敏度高、稳定性强,适用于贝西滑刃线虫的快速检测。
- 林宇王金成张宇含董立顾建锋李志勇
- 关键词：双重PCR特异性引物分子鉴定
- 日本盆景中截获的短体线虫与根结线虫的鉴定被引量：3
- 2015年
- 2014年,天津口岸从日本进境盆景中截获3种短体线虫和1种根结线虫。通过形态学和DNA条形码方法将截获的短体线虫鉴定为朱顶红短体线虫(Pratylenchus hippeastri)、伤残短体线虫(P.vulnus)和穿刺短体线虫(P.penetrans)。根据形态学并结合特异PCR和DNA条形码方法,将截获的根结线虫2龄幼虫鉴定为南方根结线虫(Meloidogyne incognita)。朱顶红短体线虫是短体线虫属非中国种,为我国进境植物检疫性有害生物,在挪威槭和榉树盆景中截获该线虫为国内外首次报道。
- 王金成林宇郭京泽顾建锋陈先锋魏亚东
- 关键词：南方根结线虫
- 基于GenBank分析28S(D2/D3)、18S和ITS序列作为根结线虫条形码标记的适用性被引量：8
- 2013年
- 基于GenBank中根结线虫属的核酸序列,筛选了28S(D2/D3)、18S和ITS 3个不同的序列片段,利用遗传距离法和分子系统学方法评价其各自作为根结线虫条形码标记的可行性。结果显示:28S(D2/D3)、18S及ITS的核酸序列种内平均遗传距离分别为0.004 3、0.002 7和0.024,种间平均遗传距离分别为0.074、0.036和0.156,由于属内近缘种的影响,各分子标记的种内、种间遗传距离均有一定的重叠;基于K2P模型构建的3种分子标记NJ系统发育树显示,南方根结线虫、爪哇根结线虫、花生根结线虫均混合聚类,难以区分;经统计,28S(D2/D3)、18S及ITS对根结线虫属内不同种的识别率分别为74%、60%和46%。研究表明:28S(D2/D3)具有一定的遗传距离间隔以及相对较高的物种识别率,可以作为根结线虫属候选条形码标记。
- 林宇王金成迟元凯鞠玉亮王暄李红梅
- 关键词：根结线虫属DNA条形码物种鉴定
