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少棘蜈蚣毒腺RACE cDNA文库的构建及β-actin基因的克隆与序列分析被引量：6: 2005年; 运用SMART技术首次构建了少棘蜈蚣(Scolopendrasubspinipes)毒腺cDNA文库。经琼脂糖电泳检测,文库所含全长cDNA主要分布在5 0 0bp以上,大于2 0 0 0bp的区域尚有很长拖尾,中间有几条高丰度mRNA亮带。以此文库为模板,通过5′RACE(RapidamplificationofcDNAends,快速扩增cDNA末端)方法获得了细胞质肌动蛋白βactin基因5′末端5 98bp片段,其中包括开放阅读框5 46bp ,编码1 82个氨基酸。将该基因片段推导的氨基酸序列通过BLAST软件与蛋白质公共数据库Swissprot比对,发现与蜜蜂(Apismellifera)的βactin基因同源性高达96% ,说明本实验所构文库质量完全可以满足用RACE方法进行功能基因的cDNA克隆。通过基于双参数模型的NJ法对部分动物βactin基因进行系统重建,较好地反映了这些动物的系统发生关系。; 任文华张双全宋大祥周开亚; 关键词：RACE 毒腺快速扩增CDNA末端系统发生关系双参数模型

中国家蚕抗菌肽ABP-CM4在E.coli中的融合表达及活性分析被引量：6: 2007年; 参照天然抗菌肽CM4(ABP-CM4)氨基酸序列和大肠杆菌偏爱密码子,采用rPCR法获得CM4基因后重组到表达载体pET32a上,在E.coli中融合表达。表达产物以可溶性存在,经Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析获得融合蛋白,再经甲酸切割、亲和层析和阳离子交换层析,得到纯化的重组抗菌肽。琼脂糖扩散法和液相测定法证明了纯化的抗菌肽具有抗菌活性。; 李保存陈玉清刘平张双全; 关键词：抗菌肽CM4 E.COLI

hsBLyS分泌型表达载体构建及CHO表达被引量：1: 2004年; 本实验引物延伸合成人红细胞生成素信号肽序列 ;信号肽序列和人可溶性B淋巴细胞刺激因子 (hu mansolubleBLymphocyteStimulator,hsBLyS)基因重叠延伸拼接成融合基因 ;融合基因插入pcDNA3、pcDNA3 1、pEFneo质粒 ;信号肽引物设计时 ,突变同义密码 ,最终重组质粒成为分泌表达质粒 ;磷酸钙共沉淀将表达质粒和标志质粒pSV dhfr,共转染CHO—dhfr- 细胞 ;选择培养液筛选 ,氨甲喋呤扩增表达 ,获稳定表达rhsBLyS细胞株 ;ELISA检测浓缩表达上清 ,结果表明 :rhsBLyS表达量由 0 13 μg/mL上升至 0 5 5 μg/mL .; 吴海涛胡云龙刁振宇金丽娜李洁张双全; 关键词：HSBLYS CHO 信号肽分泌型表达载体免疫调节因子

重组pET30a/hsBLyS质粒在BL21(DE3)菌株中的稳定性观察被引量：1: 2005年; 将构建的含有pET30a/hsBLyS重组质粒的BL21 (DE3)菌种,在含硫酸卡那霉素的平板培养基划线连续传代至 100代 100代次菌种经显微观察,为典型的革兰氏阴性大肠杆菌,生化特性没有改变提取0、50、100代质粒DNA限制性内切酶切割检查,酶切图谱没有改变,DNA测序未见hsBLyS基因变异传代前后菌种诱导表达hsBLyS。; 吴玉荣吴海涛曹萌曹鹏张双全; 关键词：BLYS 传代

重组蛋白在中国仓鼠卵巢细胞中高效表达的影响因素被引量：17: 2004年; 高效表达重组蛋白 ,对于生物制药意义重大。大多数药用蛋白是糖蛋白 ,中国仓鼠卵巢细胞 (Chinesehamsterovarycell,CHO)是目前重组糖基蛋白生产的首选体系。影响外源蛋白在CHO细胞中表达的因素很多 ,从CHO细胞表达体系、表达载体系统、外源基因、表达细胞株的加压扩增与筛选、细胞大规模培养等方面对CHO高效表达加以阐述。; 吴海涛胡云龙陈松刁振宇金丽娜李洁张双全; 关键词：重组蛋白基因工程药物中国仓鼠卵巢细胞

大头金蝇蛆提取物对白血病细胞和肺癌细胞的抑制作用研究被引量：5: 2008年; 研究大头金蝇蛆提取物对白血病和肺癌细胞的抑制作用。采用MTT法对大头金蝇蛆干粉提取物不饱和脂肪酸、粗脂肪和蝇蛆干粉分别作体外抑瘤试验,观察到了不饱和脂肪酸、粗脂肪、和蝇蛆干粉分别在剂量125μg/ml、250μg/ml和500μg/ml时对人原髓细胞白血病HL-60有明显的增殖抑制作用,其中不饱和脂肪酸剂量250μg/mL时其增殖抑制率为96.2±3.6%;该剂量对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制率为97.0±0.5%,而蛋白质组份对上述两种肿瘤细胞无增殖抑制作用。表明大头金蝇蛆提取物对该两种癌细胞的增殖抑制作用其有效组份是脂肪酸,尤其是不饱和脂肪酸。不饱和脂肪酸急性毒性试验LD50>20g/kg(为人服用量的1000倍以上),为寻找抗白血病和肺癌的安全有效物质提供了一定实验依据。; 徐水祥李跃中唐靓周淡宜; 关键词：不饱和脂肪酸

一种新免疫调节因子:B淋巴细胞刺激因子: 2006年; 吴海涛胡云龙刁振宇金丽娜李洁张双全; 关键词：B淋巴细胞刺激因子免疫调节因子 LYMPHOCYTE SCHNEIDER 嗜中性粒细胞 C-JUN

少棘蜈蚣毒液溶血肽的分离纯化被引量：5: 2007年; 采用超滤和HPLC(包括凝胶过滤层析、阳离子交换层析和反相HPLC)等技术对少棘蜈蚣毒液进行分离纯化,最终获得一个多肽;运用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱测定其分子量为4484Da,测得其对小鼠红细胞半数溶血剂量HD50=14.69μg/ml。; 任文华张双全宋大祥周开亚; 关键词：毒液溶血肽分离纯化

少棘蜈蚣抗菌肽粗品对小鼠巨噬细胞的体外激活作用被引量：9: 2007年; 分别用62.5、125、250、500和1000μg/ml的少棘蜈蚣抗菌肽粗品,体外诱导对小鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ)及肺泡巨噬细胞(AMΦ)48 h,测定巨噬细胞内酸性磷酸酶(ACP)和乳酸脱氢酶(LDH)的活力,并进一步观察巨噬细胞摄取中性红的能力。结果显示,少棘蜈蚣水提取物使正常小鼠PMΦ、AMΦ内ACP、LDH活力显著升高,并能显著增强小鼠PMΦ、AMΦ的吞噬能力,表明少棘蜈蚣水提取物对腹腔及肺泡巨噬细胞具有激活作用。; 任文华张双全宋大祥周开亚吴玲; 关键词：小鼠巨噬细胞酸性磷酸酶乳酸脱氢酶

抗菌抗癌肽CM4N在大肠杆菌中的融合表达与活性鉴定被引量：3: 2008年; 为探讨内含肽intein在抗菌肽表达与纯化中的应用,采用递归PCR法合成CM4末端添加Asn的基因CM4N,克隆至E.coli表达载体pTYB11中,构建了与intein的C端融合的表达载体pTYB11-CM4N。重组质粒转化至E.coliBL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,融合蛋白intein-CM4N主要以可溶形式存在于胞内。利用载体中intein中的chitin结合域,将融合蛋白通过chitin亲和层析一步纯化,经DTT诱导intein的自我切割活性,实现CM4N在亲和柱上的切割与分离,透析冻干后得到了纯度95%以上的重组CM4N。活性检测结果显示,重组CM4N具有抗大肠杆菌、沙门氏菌和K562肿瘤细胞的活性。研究认为,内含肽在抗菌肽的基因工程中可能具有重要的应用前景。; 陈玉清秋雯焦波张杰张双全; 关键词：抗菌肽CM4 原核表达活性

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