国家自然科学基金(30171007)
- 作品数：10 被引量：95H指数：6
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- 兔小肠黏膜下层与软骨细胞体外培养
- 2006年
- 目的观察软骨细胞在兔小肠黏膜下层(SIS)上的生长特性,为使SIS作为软骨组织工程化的载体打下基础。方法用物理和化学方法处理兔小肠黏膜下层,将不同浓度的兔软骨细胞与SIS进行体外共培养,分别进行组织学、相差显微镜和扫描电镜观察。结果经物理和化学处理的SIS纯度高、孔隙多,胶原纤维未受损;软骨细胞在SIS材料上生长、黏附、增殖,并能长入材料的孔隙内,分泌大量的细胞外基质成分。结论SIS细胞相容性良好,不影响软骨细胞的形态,对细胞生长和功能表达无抑制作用,是一种较理想的软骨细胞载体。
- 张龙芳崔鹏程赵大庆刘志陈文弦
- 关键词：小肠黏膜下层软骨细胞体外培养
- 人骨髓间质干细胞库的初步建立被引量：7
- 2005年
- 目的探讨建立生物学性状稳定的人骨髓间质干细胞(humanmarrowmesenchymalstemcells,hMSCs)库的可行性,为组织工程种子细胞的来源作初步探索。方法对分离得到的hMSCs采用液氮低温冻存,并在一定时间复苏培养,以流式细胞仪检测其表面抗原,在诱导培养基中对其行成骨和成软骨诱导培养,光镜、电镜观察细胞的形态,采用组织化学、免疫组织化学及分子生物学的方法检测成骨和成软骨诱导的特异标志物:碱性磷酸酶、型胶原、型胶原及骨钙素,研究其生物学性状。结果从骨髓中分离得到了纯度达96%以上的hMSCs,复苏后的hMSCs形态和表面抗原保持不变,可继续扩增10代以上,倍增时间40h。复苏后第2、6、10代hMSCs均保持较强的向软骨细胞、成骨细胞的分化能力。结论初步建立了hMSCs库,可为骨及软骨组织工程提供较好的种子细胞。
- 庞永刚崔鹏程陈文弦高鹏飞江逊孙永柱
- 关键词：低温冻存
- 人骨髓间质干细胞向成骨细胞分化的形态学研究被引量：7
- 2004年
- 目的:研究人骨髓间质干细胞(hMSCs)体外培养并向成骨细胞表型转化过程中的形态学改变。方法:在成骨特定诱导培养液中培hMSCs。在相差显微镜和电子显微镜下观察细胞形态,苏木精-伊红染色观察形态,组织化学法检测碱性磷酸酶(ATP)、Ca结节染色,免疫组化检测Ⅰ型胶原(COLⅠ)、骨钙素(OC)表达。结果:诱导培养的hMSCs形态由成纤维样梭形向多边形转变,透射电镜观察见大量扩张的粗面内质网、高尔基体、线粒体和钙盐沉积,扫描电镜见细胞表面有大量钙盐颗粒。诱导培养后7,14,21d可见ALP染色、COLⅠ免疫组化染色阳性,诱导培养后14,21d可见OC免疫组化染色、Ca结节染色阳性。结论:hMSCs在特定培养液诱导下可表现为典型的成骨细胞形态,可作为骨组织工程的种子细胞。
- 庞永刚崔鹏程陈文弦
- 关键词：骨髓间质干细胞成骨细胞细胞分化生物医学工程碱性磷酸酶
- 人骨髓间质干细胞作为骨、软骨组织工程种子细胞的实验研究被引量：33
- 2004年
- 目的 :探讨经体外扩增、诱导分化的人骨髓间质干细胞(humanbonemarrowmesenchymalstemcells,hMSC)作为组织工程化骨、软骨种子细胞的可行性。方法 :体外分离、培养、扩增hMSC ,以流式细胞仪检测hMSC的表面抗原。诱导hMSC向成骨细胞、软骨细胞分化。以倒置显微镜和电子显微镜观察细胞的形态 ;以组织化学、免疫组织化学和RT PCR ,检测成骨细胞、软骨细胞的特异性标志物。结果 :分离得到的细胞可表达hMSC的特异抗原 ,在体外扩增 15代以上 ,其形态及表面抗原保持不变。成骨诱导培养的细胞上清液中ALP的含量高于对照组 (P <0 .0 5 )。成骨及成软骨诱导的细胞形态均由成纤维样梭形向多边形转变。透射电镜观察可见大量扩张的粗面内质网、高尔基体及线粒体。扫描电镜观察可见经成骨诱导后的细胞表面有钙盐沉积 ,成软骨诱导的细胞表面有胶原样突起。成骨诱导培养后 ,可见碱性磷酸酶 (ALP)染色、Ca结节染色、胶原 Ⅰ (COL Ⅰ )及骨钙素 (osteocalcin ,OC)免疫组化染色阳性 ,同时RT PCR检测COL Ⅰ、OCmRNA表达阳性。成软骨诱导后 ,甲苯胺蓝染色见细胞周围有大量的异染性基质 ,免疫组化和RT PCR检测COL Ⅱ表达阳性。结论 :hMSC在体外可大量扩增。在特定培养液诱导下 ,可向成骨细胞及软骨细胞转化 ,可作为骨。
- 庞永刚崔鹏程陈文弦曹云新
- 关键词：间质干细胞成骨细胞软骨细胞骨髓
- 人骨髓间质干细胞作为软骨组织工程种子细胞的鉴定被引量：3
- 2004年
- 目的:为软骨组织工程寻求一种新的种子细胞来源,对从人骨髓中所分离培养的骨髓间质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)进行鉴定。方法:利用流式细胞仪对所分离培养的细胞表面标志物(CD29,CD44,CD14,CD34,CD45)进行分析鉴定。结果:细胞表面抗原抗CD29,CD44抗体为阳性,抗CD14,CD34,CD45抗体为阴性。结论:采用流式细胞仪对人MSCs鉴定结果可为组织工程种子细胞的获得提供基础。
- 江逊崔鹏程曹云新陈文弦
- 关键词：人骨髓间质干细胞软骨组织工程种子细胞MSCSFACS
- 兔气管纤毛上皮细胞原代培养的生物学特性及其体外生长规律被引量：2
- 2006年
- 目的:建立兔气管纤毛上皮细胞原代培养模型,观察其体外培养条件下的生物学特性并确定其体外生长规律。方法:实验于2005-03/07在解放军第四军医大学唐都中心实验室完成。①纤毛上皮细胞提取及培养:日本大耳兔20只,利用酶消化法分离获取兔气管纤毛上皮细胞,无血清生长因子培养基(成分:DMEM:Ham’sF12为1∶1,并加入以下激素及生长因子:10mg/L胰岛素、5mg/L转铁蛋白、20μg/L甲状腺素、0.4mg/L氢化可的松、7.5mg/L内皮细胞生长支持物、25μg/L表皮生长因子、1mmol/L-谷氨酰胺,100IU/mL青霉素,50mg/L链霉素)体外培养。②细胞纯度及鉴定:用抗角蛋白单克隆抗体进行SP法免疫细胞化学反应,二氨基联苯胺显色阳性为上皮细胞。扫描电镜观察细胞表面结构。结果:①气管上皮细胞的分离:低温消化加刷洗法获得的气管上皮细酶胞数量较多,呈圆形,较大,悬浮旋转。②气管上皮细胞生长状态和形态特征:皿接种细胞24h后,贴壁率约为60%,细胞增大,并进入分裂套相。五六天后细胞增殖旺盛,部分无纤毛上皮细胞汇合呈多角形铺路石样相嵌生长,在相差显微镜下放大200～400倍清晰可见纤毛呈海葵样向心摆动活跃,第3周纤毛逐渐消失成遗迹,细胞凋亡。③纤毛细胞的电镜观察:见纤毛由细胞顶膜伸出,大部分集结成束,除纤毛外,还可有稠密的较细短的微绒毛由细胞顶膜伸出。④气道上皮细胞的免疫细胞化学鉴定:抗角蛋白单克隆抗体免疫组织化学染色阳性,细胞达(91±3)%。结论:酶消化法分离、无血清生长因子培养基培养,以建立兔气管纤毛可上皮细胞的原代培养模型,具有成为气管组织工程种子细胞的应用价值。
- 张龙芳崔鹏程陈文弦刘智李贵泽孙永柱
- 关键词：细胞培养原代培养生物学特性体外生长
- 两种方法制备兔小肠黏膜下层的对比研究被引量：3
- 2007年
- 目的:比较两种制备方法所获兔小肠黏膜下层(SIS)的异同,为SIS作为组织工程细胞载体选择最佳制备方案。方法:分别采用消毒法(实验Ⅰ组)和顺序化学浸泡脱细胞法(实验Ⅱ组)处理机械剥离获取的兔小肠黏膜下层,进行组织学、扫描电镜检查及四甲基偶氮唑蓝(MTT)细胞毒性对比实验。结果:组织学及电镜扫描显示,与消毒法相比,经顺序化学浸泡脱细胞处理的SIS纯度高,孔隙多,安全性高,胶原纤维未受损;浸提液MTT检测各实验组相对增殖率均>1,100%SIS浸提液各实验组与对照组吸光值均有显著性差异(P<0.05),相同浓度不同SIS浸提液组间无显著性差异,表明多种化学试剂的SIS对软骨细胞不增加毒性,有一定促生长作用。结论:化学脱细胞法较消毒法制备的SIS安全性好,易保存,可操作性强,所获SIS是一种较理想的软骨细胞载体。
- 张龙芳陈文弦赵大庆刘志崔鹏程
- 关键词：小肠黏膜下层细胞外基质
- 人骨髓间质干细胞的优化培养被引量：20
- 2004年
- 目的 探索人骨髓间质干细胞 (mesenchymal stem cells,MSCs)的优化培养条件。 方法 应用不同条件 ,研究原代培养方法、接种密度、首次换液时间、培养基、血清浓度及种类对细胞生长的影响 ,并以选定的条件培养、扩增 MSCs,扩增后向成骨细胞和软骨细胞诱导。 结果 在其它条件不变的前提下 ,密度梯度分离法优于全骨髓法 ,2 .5× 10 5/ cm2是人 MSCs原代培养的适宜接种密度 ,原代第 5天首次换液为最佳换液时间 ,DMEM培养基优于 α- MEM培养基 ,血清 C为适宜的血清 ,10 %为适宜的血清浓度。所选条件培养的 MSCs可在体外扩增 15代以上 ,形态保持不变 ,并具有良好的分化潜能。 结论 建立了人 MSCs的体外优化培养条件 ,为其在组织工程方面的应用作出了新的探索。
- 庞永刚陈文弦崔鹏程
- 关键词：骨髓间质干细胞细胞培养
- 胎儿骨髓间质干细胞的获得和诱导成软骨培养被引量：9
- 2003年
- 目的:研究胎儿骨髓间质干细胞(MSCs)体外分离、培养、扩增并向软骨细胞表型转化,探究新的组织工程化软骨种子细胞的来源。方法:从引产胎儿(家属自愿捐献)髂骨获得骨髓,体外培养从骨髓中获得的MSCs,以流式细胞仪检测细胞表面抗原。将传代后的MSCs在诱导培养液中培养,检测软骨细胞的特异性标志物。结果:从胎儿骨髓得到的细胞表达MSCs的表面标志物,并可在体外培养、扩增,诱导后细胞变为多伪足的多边形细胞,扫描电镜见细胞表面有丰富的交联,透射电镜观察见大量粗面内质网、高尔基体、线粒体。甲苯胺蓝染色见细胞内有异染性基质(免疫组化和RT-PCR检测COLⅡ表达阳性。结论:胎儿MSCs可作为软骨组织工程的较理想的种子细胞。
- 庞永刚崔鹏程陈文弦
- 关键词：胎儿骨髓间质干细胞软骨细胞MSCS
- 诱导的人骨髓间充质干细胞在裸鼠体内生成软骨的实验研究被引量：13
- 2003年
- 目的探讨利用组织工程方法,将人骨髓间充质干细胞(MSCs)在体外诱导、培养后,再造软骨组织的可能性。方法从胸外科手术所获得的肋骨骨髓腔中分离得到人MSCs,经无血清培养基诱导培养为软骨细胞,接种于支架材料上,埋植于裸鼠体内,6周后取材进行大体及组织学观察。结果大体观察见裸鼠皮下形成包块,触之有韧性;组织学观察可见有大量软骨细胞成堆形成,但尚有部分未降解的支架材料残留。结论人MSCs在体外经定向诱导后成为软骨细胞,与支架材料复合物可在裸鼠体内形成软骨组织;人MSCs可能成为组织工程软骨的“种子细胞”。
- 江逊崔鹏程陈文弦张志培
- 关键词：骨髓间充质干细胞软骨种子细胞生物医学工程
