国家自然科学基金(30171009)
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 相关作者：杨圣辉郑颖董小平张春梅周伟更多>>
- 相关机构：首都医科大学附属北京口腔医院中国疾病预防控制中心首都医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 牙龈卟啉单胞菌prtH基因水解活性区域的表达
- 2007年
- 目的克隆、表达牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)prtH蛋白水解酶活性结构域(prtHN),制备多克隆抗体,检测其特异性。方法采用Generunner软件分析prtH蛋白水解酶活性结构域prtHN片断,PCR扩增prtHN片段并进行DNA序列测定;构建原核表达质粒pQE30-prtHN,E.coliJM109表达prtHN重组蛋白,镍亲和柱纯化,SDS-PAGE分析鉴定;以兔抗P.g菌体抗体和抗膜泡抗体进行Westernblot分析重组蛋白免疫原性。制备兔抗prtHN多克隆抗体,不同菌种牙周致病菌Westernblot检测抗体特异性。结果克隆重组基因测序结果与GenBank中P.gingivalisRgpA蛋白酶的基因序列U15282一致。SDS-PAGE显示,IPTG诱导的E.coliJM109(pQE30-prtHN)以包涵体形式表达14KDa的重组蛋白。Westernblot检测证实其具有免疫原性。所制备的兔抗prtHN多克隆抗体具有特异性。结论成功克隆,原核表达的prtHN蛋白具有免疫原性。prtHN蛋白的多克隆抗体具有菌种反应特异性。
- 刘锐杨圣辉刘洁董小平
- 关键词：基因克隆免疫原性
- PCR方法对牙周炎患者唾液中牙龈卟啉单胞菌的检测被引量：7
- 2006年
- 目的用PCR方法,检测牙周病患者唾液中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P·g),并探讨采用唾液标本与龈下菌斑标本检测结果的一致性。方法选择临床54例牙周炎患者病例,分别取其静止唾液和龈下菌斑标本,设计P·g菌16SrDNA引物,分别对2种标本进行PCR扩增,观察P·g菌的检出率,并计算kappa值。结果静止唾液和龈下菌斑标本中P·g菌的检测结果具有高度一致性,其检出率分别为83·3%(45/54)和79·6%(43/54),Kappa值为0·755,准确度达92·6%。结论本研究所用的引物可用于口腔中P·g菌的检测,特别是研究中采用的唾液标本,取材方便,有可能代替龈下菌斑标本。
- 郑颖张春梅杨圣辉
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌菌斑唾液聚合酶链式反应
- 牙龈卟啉单胞菌prtH基因克隆及其多态性的研究被引量：1
- 2003年
- 目的 建立牙龈卟啉单胞菌 (Porphyromonasgingivalis,P g)prtH全基因序列的克隆株 ,分析 5株不同P g菌株中prtH基因多态性。方法 利用PCR技术获得prtH全基因序列 ,克隆至载体pGEM T ;设计 3对引物 ,用PCR的方法扩增prtH基因的不同区域 ;以生物素标记prtH基因序列为特异性探针 ,用斑点杂交和Southern印迹杂交进一步分析prtH基因的多态性。结果 酶切分析和DNA测序证实重组质粒pGEM T prtH的插入片段为prtH基因序列 ;核酸分子杂交显示菌株W 381和ATCC 332 77杂交类型一致 ,菌株ATCC 4941 7和菌株 1 4 3 2呈现各自不同的杂交条带 ,而菌株 47A 1中未检测到prtH基因。结论 不同P g菌株中prtH基因序列存在差别 ,这种基因多态性提示不同P g菌株毒力大小可能存在差异。
- 郑颖杨圣辉张春梅周伟张福萍董小平
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌克隆多态性
- 慢性牙周炎患者中间普氏菌临床分离株中溶血基因的分布
- 2003年
- 目的 :研究溶血基因在慢性成人牙周炎患者中间普氏菌临床分离株中的分布状况 ,探讨溶血基因与中间普氏菌致病性的关系。方法 :收集符合纳入标准的 5 7例慢性成人牙周炎病人的牙周袋内的龈下菌斑 ,采用厌氧培养技术分纯产黑色素的革兰氏阴性厌氧杆菌 ,用 16SrRNA聚合酶链反应 (PCR)方法鉴定为中间普氏菌的菌株 ,保存并用溶血基因的相应引物检测该基因。结果 :5 7例慢性成人牙周炎患者中 ,2 0例检出中间普氏菌 ,检出率为 35 1%。 35株中间普氏菌的临床分离株中 ,5株能够检测到溶血基因 ,另外 30株不能检测到溶血基因。结论
- 谷静杨圣辉王者玲
- 关键词：慢性牙周炎中间普氏菌临床分离株
- 牙龈卟啉单胞菌prtH基因分布与多态性研究被引量：3
- 2004年
- 目的 分析牙龈卟啉单胞菌 (P .gingivalis)prtH基因的遗传多态性 ,从而了解细菌变异与其对牙周致病作用的相关性。方法 以PCR技术从牙周炎患者口腔中分离的P .gingivalis进行prtH基因扩增 ;采用斑点杂交法 ,以生物素标记prtH基因为探针 ,与以引物B进行PCR扩增为阳性的P .gingivalis基因组DNA杂交 ;对PCR产物进行AluⅠ限制性酶切和DNA测序分析。结果 以prtH基因A、B引物对 14 0株临床分离株进行PCR扩增 ,分别在 76例 (引物A)和 117例 (引物B)出现阳性扩增产物 ,阳性率分别为 5 4 .2 %、84 %。对 34例引物B扩增阳性的P .gingivalisDNA进行点杂交检测 ,阳性吻合率为 82 .4 %。与GenBank中菌株ATCC332 77(U15 2 82 )和W83(L2 74 83)的prtH基因序列相比 ,5株P .gingivalisPCR扩增产物的测序存在着缺失和点突变。结论 在慢性牙周炎患者临床P .gingivalis分离菌株中存在着prtH基因的遗传多态性 。
- 刘锐董小平杨圣辉周伟郑颖
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌基因多态性牙周病
