黑龙江省教育厅科学技术研究项目(11511159)
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 相关作者：钟照华张中海史巧云李晓波张凤民更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学附属肿瘤医院徐州医学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省教育厅科学技术研究项目哈尔滨市科技攻关计划项目中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一氧化氮供体和他汀对B组柯萨奇病毒感染的实验研究被引量：1
- 2007年
- 目的研究硝酸酯类和他汀类等一氧化氮(NO)供体的抗柯萨奇病毒B组3型(CVB3)的作用及其特点和机制。方法用TCID_(50)和空斑形成实验测定CVB3的毒力;MTT法确定NO供体药物的无毒性浓度;利用细胞病变效应(CPE)抑制实验和空斑形成抑制实验分析NO供体药物对CVB3在HeLa细胞和ECV-304细胞中增殖的抑制作用;并分析硝酸甘油(GTN)不同给药次数、NO浓度变化以及NO浓度与GTN对CVB3抑制效应间的相关性。结果硝酸酯类药物GTN、硝酸异山梨酯可明显抑制CVB3所致的CPE及空斑形成(P<0.05),他汀类药辛伐他汀、洛伐他汀均未显示抑制CVB3所致的CPE(P>0.05);CVB3接种前预先与GTN作用、CVB3接种同时加入GTN两种条件下CPE抑制率差异无统计学意义(P>0.05);CVB3攻击后多次给予GTN的组间CPE抑制率差异无统计学意义(P>0.05),但在CVB3攻击前不同时间点给予GTN的组间CPE抑制率差异有统计学意义(P<0.05);NO浓度与不同时间点给予GTN的CPE抑制结果呈正相关(r=0.97,P<0.01)。结论NO供体类药物硝酸酯类具有明确的抗CVB3感染作用,其抗CVB3增殖的作用与NO浓度呈正相关;他汀类药物在本实验条件下未观察到抗CVB3增殖作用,原因可能是细胞类型与他汀不匹配。
- 史巧云钟照华李晓波孙艳影张中海张凤民谷鸿喜
- 关键词：一氧化氮供体柯萨奇病毒B组3型硝酸酯类他汀
- 博尔纳病病毒感染对少突胶质瘤细胞中IL-1β表达量的影响
- 2009年
- 目的探讨博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)感染对少突胶质瘤细胞(oligodendrocyte,OL)中白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)蛋白表达的影响。方法首先将OL和BDV感染的OL煮沸裂解,分别提取蛋白混合液,测定蛋白的浓度后,将二者的蛋白混合液浓度均调至10 g/L,分别取蛋白混合液及其经10 000 r/min离心5 min后的上清,沉淀后分别进行斑点免疫印迹试验(dot-blot hybridization),检测OL和BDV感染的OL中IL-1β的存在;同时,对提取的OL和BDV感染的OL中的蛋白混合液进行2倍系列稀释后进行斑点免疫印迹试验,检测细胞中的IL-1β的表达量的变化。结果斑点免疫印迹试验表明,OL和BDV感染的OL中提取的蛋白混合液及收集的沉淀均出现杂交阳性信号,而蛋白混合液离心后的上清未出现杂交阳性信号。等量的OL和BDV感染的OL的蛋白混合液经2倍系列稀释后进行斑点免疫印迹试验,OL的蛋白混合液在≤32倍的稀释度范围内有杂交阳性信号,BDV感染的OL的蛋白混合液在≤8倍的稀释度范围内有杂交阳性信号。结论①IL-1β在OL和BDV感染的OL中均存在,且存在于本实验获得的蛋白混合液和沉淀中。②BDV感染使OL中的IL-1β的表达量降低,提示IL-1β的表达量下降,有可能使其参与的脑内的免疫生理及病理反应发生变化,这可能是BDV感染致病的机制之一。
- 张中海车洋
- 关键词：博尔纳病病毒白细胞介素-1Β
- Balb/c乳鼠心肌细胞的分离和体外培养方法的优化被引量：2
- 2007年
- 目的探讨Balb/c乳鼠心肌细胞分离和培养方法,优化出Balb/c乳鼠心肌细胞分离和培养的方法。方法取乳鼠心脏,采用胰酶和胶原酶Ⅱ消化方法分离乳鼠心肌细胞,比较消化次数和消化时间对原代乳鼠心肌细胞培养的影响。结果原代培养的Balb/c乳鼠心肌细胞生长迅速、自行搏动,细胞形态完整,细胞内肌丝、线粒体清晰。分离细胞时消化次数最好控制在不多于6次,每次消化时间不超过20min。2h差速贴壁可以提高心肌细胞纯度,经肌动蛋白鉴定,心肌细胞达94.6%。结论本研究优化了分离和原代培养Blab/c乳鼠心肌细胞的方法。
- 张中海包琳史巧云李晓波钟照华
- 关键词：心肌细胞原代细胞培养
- iNOS基因和iNOS—VP1融合基因真核表达载体的构建及初步表达
- 2007年
- 目的 构建pcDNA3．1介导的诱导性一氧化氮合成酶（iNOS）的基因表达载体和pcDNA3．1介导的iNOS与柯萨奇病毒B组3型（CVB3）结构蛋白VP1融和基因的表达载体。方法 应用PCR扩增和DNA重组技术构建pcDNA3．1-iNOS和pcDNA3．1-iNOS—VP1表达载体；应用真核细胞转染技术及间接免疫荧光技术进行所构建的真核表达载体的初步表达和鉴定。结果 经PCR扩增技术用特异引物从质粒pKSiNOS分离编码iNOS开放阅读框架的cDNA，TA克隆于pMD19-T载体，根据设计引物时加入的酶切位点将插入片断亚克隆于表达载体pcDNA3．1；经PCR扩增技术用特异引物从质粒pCR2．1-VP1分离编码CVB3VP1结构蛋白的cDNA，TA克隆于pMD19-T载体，根据设计引物时加入的酶切位点将VP1亚克隆于iNOS的表达载体pcDNA3．1-iNOS，从而构建含有iNOS和VP1融合基因的真核表达载体。限制性内切酶分析、PCR鉴定和测序证实重组体peDNA3．1-iNOS和peDNA3．1-iN—OS—VP1插入片断的大小和方向正确且开放阅读框架的读码框不变；重组质粒peDNA3．1-iNOS和peDNA3．1-iNOS．VP1在HeLa细胞中均有表达，但表达效率较低。结论 获得含iNOS基因和iNOS—VP1融合基因的真核表达载体，并将重组质粒进行了初步表达，为体外iNOS抗CVB3作用的研究奠定了物质基础。
- 史巧云钟照华张中海赵文然李小波张凤民
- 关键词：诱导型一氧化氮合成酶真核表达载体
- microRNA与心脏疾病被引量：8
- 2008年
- microRNA是植物和动物基因组编码的小分子非编码RNA。这种高度保守、长21～25个碱基RNA分子通过与mRNA的3'非编码区结合来调控基因组表达。microRNA通过其转录后调控机制在胚胎发育、细胞增殖、细胞分化、细胞死亡及细胞凋亡中发挥调控作用。近期研究发现,microRNA的异常表达可导致心脏疾病的发生、发展。现对microRNA在心脏发育、心肌肥厚和心肌重构、心力衰竭和心律失常等过程中的作用进行综述。
- 刘惠彬沈亚琪钟照华
- 关键词：MICRORNA心脏病心肌肥厚心力衰竭心律失常
- Galectin-3的抗凋亡机制及其在肺癌中的研究被引量：1
- 2008年
- 半乳凝素-3（Galectin-3，Gal-3）是糖结合蛋白家族中的一员，能与β-半乳糖苷特异性结合，参与许多生理和病理过程，在调解细胞生长与分化、机体免疫、细胞黏附、炎症反应、细胞凋亡、血管侵袭等诸多方面起着重要的作用，且与肿瘤的侵袭、转移及预后有关。目前，在许多恶性肿瘤中都发现了Galectin-3的表达，如胃癌、结肠癌、乳腺癌、膀胱癌、甲状腺癌。但在不同的肿瘤中，Galectin-3的表达水平不同。在一些肿瘤中，Galectin-3表达增高，而在某些肿瘤中其表达降低，且其亚细胞定位与肿瘤的发生、发展密切相关。
- 李春红曹鸿艳蔡莉
- 关键词：半乳凝素-3凋亡肺癌肿瘤
