北京市教委科技发展计划(KM200610025005)
- 作品数：7 被引量：31H指数：4
- 相关作者：季凤清杨慧孙海梅赵春礼曾晓蓓更多>>
- 相关机构：首都医科大学首都医科大学附属北京天坛医院中国康复研究中心更多>>
- 发文基金：北京市教委科技发展计划国家重点基础研究发展计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 诱导人脐血间充质干细胞分化为多巴胺能神经元样细胞的研究被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨人羊膜上皮细胞条件培养液(ACM)及SHH,FGF8诱导人脐血间充质干细胞(CB-MSCs)分化为多巴胺(dopamine,DA)能神经元样细胞的作用及机制。方法:利用沉降红细胞、密度梯度离心和贴壁筛选法纯化CB-MSCs,加入ACM及SHH,FGF8分为CON,ACM,SHH+FGF8,ACM+SHH+FGF8四组诱导48h后,免疫细胞化学染色鉴定分化细胞的DA神经元表型。应用高压液相色谱技术测定细胞培养上清中DA含量,并应用RealtimePCR方法观察DA能神经元发育过程中的相关基因En-1,Foxa2,Lmx1b,Gli-1,Pitx3,Nurr1以及Ngn2的表达。结果:加诱导剂诱导48h后,各诱导组的TH和DAT的表达量均比对照组高。早期的转录因子En1,Foxa2在各组中均有表达;而Pitx3,Lmx1b表达在各诱导组中;Lmx1b在ACM+SHH+FGF8组中表达最高;Pitx3在各诱导组中均有表达且无明显差异。Nurr1,Ngn2在SHH+FGF8组中表达很强。结论:ACM及SHH,FGF8可诱导脐血间充质干细胞分化为DA能神经元样细胞,其作用机制与多巴胺能神经元发育过程中的各种基因En-1,Foxa2,Lmx1b,Gli-1,Pitx3,Nurr1以及Ngn2相关。
- 林燕孙海梅杨慧曾晓蓓季凤清
- 关键词：ACM
- 人脐血干细胞定向分化为多巴胺能神经元的实验研究被引量：9
- 2007年
- 目的探讨人脐血干细胞定向分化为多巴胺(DA)能神经元的最佳诱导条件。方法体外分离、原代培养人脐血干细胞,流式细胞仪检测其表面标志,分别以EGF+bFGF、ATRA、ATRA+EGF+bFGF、纹状体条件培养液、纹状体星形胶质细胞条件培养液对其进行诱导,倒置相差显微镜观察细胞形态的变化。应用免疫荧光染色技术检测DA能神经元标志物酪氨酸羟化酶(TH)的表达。结果比较各组对人脐血干细胞定向分化为DA能神经元的诱导作用,纹状体星形胶质细胞条件培养液>纹状体条件培养液>ATRA+EGF+bFGF组>ATRA组>EGF+bFGF组>对照组。结论纹状体组织对人脐血干细胞定向分化为DA能神经元的诱导作用优于其他各组,并且此作用可能主要源于纹状体的星形胶质细胞。
- 李荣平季凤清孙海梅王屹曾晓蓓赵春礼杨慧李雪梅贾晓芳
- 关键词：干细胞多巴胺能神经元纹状体免疫细胞化学人脐带血
- 不同诱导因子对人脐带血非造血干细胞神经分化的影响被引量：4
- 2007年
- 目的探讨诱导人脐带血非造血干细胞向神经细胞分化的最佳条件。方法通过密度梯度离心法原代培养脐带血非造血干细胞;用流式细胞术分析脐带血获得的贴壁细胞的CD34、CD90、CDl66、HLA-ABC、HLA-DR等免疫表型;并用不同诱导因子组合:1.维甲酸(RA);2.表皮生长因子(EGF)+碱性成纤维细胞生长因子(bFGF);3RA+EGF+bFGF;4二甲基亚砜(DMSO)+丁羟基茴香醚(BHA)诱导后,用免疫荧光化学法检测各组脐带血非造血干细胞中β-微管蛋白-Ⅲ(β-tubulin-Ⅲ)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、半乳糖苷酶-C(Gal-C)等神经细胞、星型胶质细胞及少突胶质细胞的特异性标记抗原的表达。结果脐带血非造血干细胞CD90、CD166、HLA-ABC表达阳性;无论那一种诱导因子组合,分化为少突胶质细胞的比率均高于神经元及星型胶质细胞;即各组分化为少突胶质细胞数>神经元的细胞数>星型胶质细胞数。对于少突胶质细胞(Ga-C)以RA+EGF+bFGF组合诱导率最高,达57.02%,其次是DMSO+BHA诱导组。而对于神经元及星型胶质细胞的分化各组比较,以RA组最高,其次是DMSO+BHA诱导组合。结论RA对神经元及星型胶质细胞的诱导作用较好,而RA+EGF+bFGF组合对于少突胶质细胞诱导作用最明显。
- 季凤清王屹孙海梅李荣平王丹妮曾晓蓓赵春礼王秀琴杨慧
- 关键词：神经细胞胶质细胞人脐带血
- 人羊膜上皮细胞分泌神经营养因子诱导人脐血间充质干细胞向神经元样细胞的分化:可能性验证被引量：3
- 2010年
- 背景:课题组前期实验已证实人羊膜上皮细胞条件培养液可以诱导人脐血间充质干细胞分化为多巴胺能神经元样细胞,在此过程中人羊膜上皮细胞分泌的神经营养因子及其受体可能起到了重要作用。目的:探讨人羊膜上皮细胞分泌的神经营养因子对人脐血间充质干细胞神经分化的作用。方法:将P1代人脐血间充质干细胞按2×108L-1密度接种,分为3组:对照组加入HG-DMEM培养基;诱导组加入人羊膜上皮细胞条件培养液;阻断剂组预先加入阻断剂K252a工作液,36℃孵育40min后更换为羊膜上皮细胞条件培养液。免疫荧光化学检测诱导后人脐血间充质干细胞神经元特异性烯醇化酶及多巴胺转运体的表达,实时定量PCR法检测诱导后人脐血间充质干细胞中神经元特异性烯醇化酶、多巴胺转运体及酪氨酸羟化酶的表达。结果与结论:人羊膜上清中有神经生长因子和脑源性神经营养因子的表达,且P1代人脐血间充质干细胞表达神经营养因子高黏附性受体Trka及Trkb。诱导48h后与对照组比较,诱导组及阻断剂组神经元特异性烯醇化酶、多巴胺转运体阳性细胞数均明显增加(P<0.05),且诱导组阳性细胞数最多(P<0.05)。诱导组、阻断剂组神经元特异性烯醇化酶、多巴胺转运体及酪氨酸羟化酶mRNA含量均显著高于对照组(P<0.01),且诱导组各基因mRNA含量明显高于阻断剂组(P<0.01)。结果证实人羊膜上皮细胞分泌的神经营养因子对人脐血间充质干细胞的神经分化有重要作用,其促神经分化作用是通过酪氨酸激酶受体介导的。
- 张晓明孙海梅杨慧季凤清
- 关键词：神经营养因子人脐血间充质干细胞羊膜上皮细胞干细胞
- 羊膜对人脐血干细胞分化为多巴胺能神经元的作用被引量：7
- 2008年
- 目的探讨羊膜上皮细胞对人脐血干细胞定向分化为多巴胺能神经元的作用。方法体外分离、原代培养人羊膜上皮细胞,通过高速离心制备成条件培养液(CM)对P1代脐血干细胞进行诱导,倒置相差显微镜观察细胞形态的变化,应用免疫荧光染色和免疫印迹法检测其酪氨酸羟化酶(TH)及多巴胺转运体(DAT)蛋白的表达情况。结果P1代脐血干细胞经羊膜上皮细胞条件培养液诱导后,TH及DAT阳性细胞率明显高于对照组,与对照组比较有显著性差异(P<0.01),免疫印迹分析结果与免疫荧光染色结果一致。结论羊膜上皮细胞能诱导人脐血间充质干细胞定向分化为多巴胺能神经元。
- 李荣平季凤清孙海梅王丹妮曾小蓓赵春礼杨慧
- 关键词：干细胞诱导分化多巴胺能神经元羊膜上皮细胞人脐带血
- 羧基荧光素乙酰乙酸与四甲基偶氮唑盐法检测人脐血间充质干细胞刺激脾淋巴细胞增殖作用的比较
- 2009年
- 目的比较羧基荧光素乙酰乙酸（CFSE）与四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测人脐血间充质干细胞（CB-MSCs）和神经分化的CB-MSCs对大鼠脾淋巴细胞（LCs）刺激作用的敏感程度。方法分别制备刺激细胞和LCs,将刺激细胞分为4组：1.CB-MSCs组;2.Dif-CB-HSCs组：脐血间充质干细胞培养7d后维甲酸（RA）处理4d诱导其神经分化细胞;3.SH-SY5Y组：人源SH-SY5Y细胞（人神经母细胞瘤细胞系）作为阳性对照组;4.Auto-LC组：自体大鼠LCs作为阴性对照组。分别将上述各组刺激细胞与LCs进行混合培养,分别通过酶标仪（MTT法）,流式细胞术（CFSE法）检测LCs增殖情况（n=3）。结果CFSE法和MTT法检测结果均显示,CB-MSCs组和Dif-CB-MSCs组刺激LCs增殖明显弱于阳性对照组（SH-SY5Y细胞组）,但CFSE法检测结果显示,CB-MSCs组和Dif-CB-MSCs组细胞刺激LCs增殖百分率高于阴性对照Auto-LC组,MTT法检测结果显示,CB-MSCs组和Dif-CB-MSCs组的吸光度（A）值稍低于阴性对照Auto-LC组。结论CFSE法比MTT法能更加客观地...
- 孙海梅季凤清王屹王丹妮赵春礼杨慧
- 关键词：脐血间充质干细胞淋巴细胞增殖
- 人脐血非造血干细胞免疫原性的实验研究被引量：7
- 2008年
- 目的探讨人脐血非造血干细胞免疫原性,为脐血非造血干细胞的应用提供依据。方法通过流式细胞术检测人脐血非造血干细胞的免疫表型;体外混合淋巴细胞培养观察人脐血非造血干细胞原代、P1代、诱导分化细胞及干扰素-γ(IFN-γ)刺激异种T淋巴细胞增殖活化作用。结果人脐血非造血干细胞表达HLA-ABC,微弱表达HLA-DR,经IFN-γ处理后,未明显改变HLA-ABC、HLA-DR的表达水平。混合淋巴细胞培养未见各处理组人脐血非造血干细胞明显刺激T淋巴细胞的增殖。结论人脐血非造血干细胞无论原代、传代细胞、分化细胞及IFN-γ处理的细胞免疫原性均较弱。
- 季凤清王屹孙海梅王丹妮曾晓蓓赵春礼杨慧
- 关键词：人脐带血免疫原性脾淋巴细胞共培养
