江苏省卫生厅重点科研课题(K201106)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
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- 发文基金：江苏省卫生厅重点科研课题国家自然科学基金更多>>
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- 人源胶质瘤细胞株的建立及其生物学特性分析被引量：1
- 2015年
- 目的：建立新的胶质瘤细胞株,为肿瘤研究提供具备新特性的细胞工具。方法临床手术来源的胶质瘤组织进行培养传代,第10代后克隆建立细胞株（ SHG139）。经免疫荧光细胞化学技术检测蛋白表达,流式细胞术（ FCM）分析细胞增殖和细胞周期,染色体核型分析SHG139细胞的生物学特性。应用神经干细胞培养液（ NSCM ）培养 SHG139细胞,使其转化成胶质瘤干细胞球（SHG139s）,并检测SHG139s细胞的干性标志物。诱导分化SHG139s细胞后,检测分化细胞的胶质前体神经节苷脂（A2B5）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、β-Ⅲ tubulin和半乳糖神经酰胺（GalC）的表达情况,进一步比较SHG139和SHG139s细胞颅内原位移植瘤的病理特征。结果成功建立的SHG139第20代和第60代细胞A2B5、GalC、GFAP、酸性钙结合蛋白（S-100）和vimentin表达均为阳性,与肿瘤组织的免疫组化结果及病理特征一致。 SHG139细胞传代后24 h内增殖显著,染色体总数为68条,多倍体较多。 SHG139s细胞中A2B5、巢蛋白（nestin）和神经元-神经胶质2型抗原（NG2）阳性比例分别为（84.12±9.96）%、（73.86±5.01）%和（73.37±2.09）%。 SHG139s细胞诱导分化后,贴壁细胞中GFAP、β-Ⅲ tubulin 和 GalC 的阳性比例分别为（92.89±2.24）%、（64.85±4.09）%和（33.57±4.14）%。 SHG139s细胞颅内移植瘤呈胶质肉瘤和星形-少枝胶质细胞瘤的多种形态,肿瘤血管和瘤周血管以鼠源性为主。结论 SHG139为星形胶质瘤细胞株, NSCM 培养可成功获得 SHG139s。SHG139s为A2B5＋ CD133-亚群细胞,具有自我更新和多向分化潜能。与SHG139细胞颅内移植瘤比较,SHG139s细胞颅内移植瘤具有更强的恶性度和侵袭性。
- 陈桂林李炎炎谢学顺陈金明吴庭枫李学涛王杭州周幽心杜子威
- 关键词：神经胶质瘤细胞移植CD133
- SHG-44胶质瘤干细胞球的表型特点及其移植瘤病理特征被引量：3
- 2013年
- 目的 研究SHG-44胶质瘤干细胞球的分子表型、致瘤能力及其移植瘤的病理学特征.方法 应用神经干细胞培养基（NSCM）培养SHG-44胶质瘤细胞株,获取其胶质瘤干细胞球,纯化培养后行细胞免疫（ICC）荧光染色检测CD133、兔抗人巢蛋白（nestin）、A2B5、小鼠抗人波形蛋白（vimentin）、血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR-2）和IDH R132H的表达；含血清培养基诱导其分化,ICC检测CD133、nestin、vimentin、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、β-Ⅲ tubulin和半乳糖神经鞘氨醇酶（GalC）的表达情况；建立SHG-44胶质瘤干细胞球原位移植瘤模型,免疫组织化学检测CD133、nestin、VEGFR-2、GFAP、S-100和CD34的表达；比较SHG-44细胞原位模型和SHG-44干细胞球移植瘤的病理学特征.结果 应用神经干细胞培养法能成功获取SHG-44胶质瘤干细胞球.第10代SHG-44胶质瘤干细胞球和SHG-44胶质瘤细胞的CD133阳性细胞比例分别为（71.63±5.92）％和（1.95±1.45）％.SHG-44胶质瘤干细胞球的nestin、vimentin、VEGFR-2和A2B5阳性细胞比例分别为（84.06±7.58）％、（29.11 ±3.44）％、（64.44±3.69）％和（14.08 ±2.19）％.SHG-44胶质瘤干细胞球中可见IDH R132H突变的细胞群.含血清培养基诱导分化后,CD133、nestin、vimentin、GFAP、β-Ⅲ tubulin和GalC阳性细胞比例分别为（1.89±1.27）％、（6.67±2.75）％、（93.75±2.95）％、（91.33±4.75）％、（82.36±4.02）％和（8.92±3.19）％.原位移植瘤组织中GFAP、S-100和VEGFR-2蛋白表达呈阳性,CD133和nestin蛋白表达呈阴性.极少量特异抗人CD34阳性细胞围绕成管状.SHG-44胶质瘤干细胞球颅内原位移植瘤局部浸润能力高于SHG-44胶质瘤细胞颅内原位移植瘤.结论 神经干细胞培养法可成功从SHG-44胶质瘤细胞株中获取胶质瘤干细胞,属于CD133＋ A2B5-亚群,高表达VEGFR-2,具备自我更新及多向分化能力,可参与血管拟态的形成.
- 吴庭枫陈金明陈三送陈桂林韦永新谢学顺杜子威周幽心
- 关键词：神经胶质瘤肿瘤移植
- 微小RNA-140-5p抑制胶质瘤细胞株U251、U87增殖和侵袭性的研究被引量：2
- 2015年
- 目的 分析微小RNA（miRNA,miR）-140-5p在人脑胶质瘤组织中的表达水平,观察miR-140-5p对胶质瘤细胞株增殖、凋亡与侵袭的影响.方法 通过实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测人脑胶质瘤组织与U251、U87MG细胞株中miR-140-5p的表达;用脂质体将miR-140-5pmimics转染至U251与U87MG细胞,同时设立空白及阴性对照组,Real-time PCR检测转染前后miR-140-5p在细胞中的表达水平.应用荧光显微镜观察转染效率,细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期与凋亡;Transwell实验判断U251、U87MG的侵袭能力.结果 miR-140-5p在人脑胶质瘤组织及胶质瘤细胞株中表达明显低于非瘤脑组织,并且随着肿瘤恶性程度不断增加,miR-140-5p表达逐渐降低（非瘤脑组织、低级别与高级别胶质瘤相对表达量分别为1.013、0.375和0.130,P＜0.01）.U251和U87MG细胞转染miR-140-5p mimics后细胞的增殖与侵袭能力明显受到抑制,其中相对增殖率分别为61.22％与58.44％,穿膜细胞数亦减少了约50％,细胞周期阻滞于G0/G1期（P＜0.01）.转染miR-140-5p mimics后胶质瘤细胞株的凋亡率明显升高＞12％（P＜0.01）.结论 miR-140-5p在胶质瘤组织中低表达,过表达miR-140-5p可以抑制胶质瘤细胞株U251和U87MG的增殖,阻滞细胞周期,促进其细胞凋亡,并可有效抑制其侵袭力.
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- 关键词：胶质瘤细胞增殖
- 黑色素瘤细胞颅内移植瘤模型的建立被引量：2
- 2012年
- 黑色素瘤是恶性程度最高的肿瘤之一，原发性黑色素瘤颅内转移发生率高达75％。我们使用A375黑色素瘤细胞株建立颅内移植瘤模型，同时建立皮下模型并与前者在致瘤特点与移植瘤病理上进行比较。
- 吴庭枫陈三送孙婷陈雄辉陈桂林韦永新谢学顺周幽心杜子威
- 关键词：移植瘤模型颅内转移原发性黑色素瘤A375
- MiR-218-5p抑制A2B5^+/CD133~–亚群胶质瘤干细胞的干性维持及侵袭性
- 2015年
- 该文目的为探讨miR-218-5p对表达A2B5+/CD133–的胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSCs)亚群干性维持及侵袭性的影响。实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测人脑胶质瘤组织及细胞株中miR-218-5p的表达;上、下调miR-218-5p慢病毒转染表达A2B5+/CD133–的胶质瘤干细胞SHG-139s,二次球体形成实验、免疫荧光及q RT-PCR检测SHG-139s的标志物A2B5、CD133、Nestin、PLAGL2、ALDH1及SOX2的表达变化;Transwell实验、q RT-PCR及免疫荧光检测SHG-139s基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)的表达变化。结果显示,miR-218-5p在胶质瘤中低表达,上调miR-218-5p可显著降低SHG-139s成球率,同时明显降低SHG-139s中上述干细胞标志物的表达;Transwell实验显示,上调miR-218-5p能显著抑制SHG-139s的侵袭能力,使其MMP9表达受到明显抑制。因此,miR-218-5p可能作为抑癌基因在胶质瘤中发挥作用,高表达的miR-218-5p可抑制SHG-139s的干性维持及其侵袭能力。
- 吴至武王杭州李炎炎李学涛孙婷陈桂林谢学顺周幽心杜子威
