山东省自然科学基金(ZR2010CM028)
- 作品数：10 被引量：45H指数：5
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- CaM对小鼠胎儿成纤维细胞Hsp70表达的影响被引量：8
- 2011年
- 【目的】证实小鼠胎儿成纤维细胞中钙调蛋白(calmodulin,CaM)基因参与热应激诱导型热休克蛋白70(Hsp70)的基因表达并明确其作用条件。【方法】取12.5 d孕鼠胚胎制备成纤维细胞(MEF),上述细胞随机分为对照组和热应激组:对照组在37℃条件下培养,热应激组包括Ⅰ组(39℃、0.5 h),Ⅱ组(39℃、1 h),Ⅲ组(39℃、1.5 h),Ⅳ组(41℃、0.5 h),Ⅴ组(41℃、1 h),Ⅵ组(41℃、1.5 h);每组3个重复。将选择的热应激组和对照组细胞分别加入不同浓度(25、50及100 mmol.L-1)钙调蛋白拮抗剂W7,运用RT-PCR检测Hsp70、CaM mRNA表达量。【结果】39℃和41℃热应激组Hsp70 mRNA表达量显著高于常温对照组(P<0.05);39℃应激1h的Hsp70 mRNA表达量极显著高于其它各组(P<0.01);39℃应激0.5 h和1 h CaM mRNA表达量极显著高于其它各组(P<0.01);41℃热应激组的CaM mRNA表达量与常温对照组比较差异不显著(P>0.05)。在培养液中加100 mmol.L-1W7、分别于37℃和39℃处理1 h后,其成纤维细胞的Hsp70 mRNA表达量极显著低于相应对照组(P<0.01)。【结论】中度热应激条件下,Hsp70和CaM基因表达量呈正相关,且39℃应激1 h可以显著诱导Hsp70和CaM基因表达;CaM通过某种途径参与了Hsp70基因表达。
- 张霞曹荣峰丛霞李金波孙琪高善颂田文儒
- 关键词：热应激HSP70CAMMRNA
- 热应激对小鼠胚胎细胞HSP70表达和超微结构的影响被引量：4
- 2011年
- 本研究旨在确定体外培养的小鼠胚胎细胞合成HSP70的时期,研究热应激对该阶段胚胎细胞超微结构的影响。将合子和体外发育至2-细胞、4-细胞、8～16-细胞及囊胚阶段的胚胎分别进行37、39和41℃的热应激处理,用免疫荧光细胞化学法检测胚胎细胞中HSP70的诱导表达;将体外培养至早期囊胚的小鼠胚胎分别施以39℃2h和41℃2h处理,分别在热应激后0和2h时收集胚胎,制作超薄切片,用电子显微镜观察胚胎细胞的超微结构变化。在各细胞期胚胎中,37℃组胚胎HSP70表达阴性(-);39℃组胚胎,从8～16-细胞开始呈现弱表达(+),囊胚呈阳性表达(++);41℃组的胚胎从4-细胞开始呈现弱阳性表达(+),8～16-细胞胚胎和囊胚呈阳性表达(++)。39和41℃热应激处理的小鼠早期囊胚超微结构和对照组均发生明显的变化,但经37℃恢复培养2h后,39℃组胚胎的各细胞器超微结构恢复正常,而41℃组胚胎未能恢复。结果表明,小鼠胚胎从4-细胞期有HSP70的诱导合成,在囊胚期诱导合成最多;热应激使胚胎亚细胞结构出现退行性变化,轻度退行性变化是可逆的。
- 张霞屈平平丛霞姜忠玲崔凯田文儒
- 关键词：小鼠胚胎热应激HSP70表达超微结构
- 热休克对小鼠胚胎成纤维细胞CaM mRNA和HSF活性的影响被引量：1
- 2011年
- 试验分别以38、40和42℃对原代培养的小鼠胚胎成纤维细胞进行热休克处理,采用半定量PCR方法和凝胶迁移阻滞(EMSA)对CaM mRNA和HSF活性进行检测,并与对照组(37℃)比较,以确定热休克对小鼠胚胎成纤维细胞CaM mRNA和HSF活性的影响。结果表明,38℃热休克处理组小鼠胚胎成纤维细胞的CaMmRNA表达量显著高于对照组(P<0.05);40和42℃处理组细胞的CaM mRNA表达量极显著高于37℃组(P<0.01),但与40℃处理组相比,42℃处理组细胞的CaM mRNA表达量略有下降。通过凝胶阻滞分析检测HSF与DNA的结合活性,发现与对照组相比,38、40和42℃热休克处理明显增加了HSF活性。
- 李金波张霞田文儒曹荣峰高善颂张桂林
- 关键词：热休克CA2+CAMHSF
- 黄芩苷对热应激条件下LLC-PK1细胞HSP70表达的影响被引量：3
- 2015年
- 为了探讨不同浓度黄芩苷对热应激条件下猪肾小管上皮(LLC-PK1)细胞HSP70表达的影响,筛选出黄芩苷诱导热应激条件下细胞HSP70表达的最佳浓度。将培养的LLC-PK1细胞随机分为7个组,Ⅰ组为37℃常温对照组,Ⅱ组为42℃单纯热应激组,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组和Ⅶ组分别为42℃热应激并用不同浓度黄芩苷(0.01~100μg/m L)处理组,运用实时荧光定量PCR和Western Blot检测HSP70 m RNA及蛋白的表达。结果显示,42℃单纯热应激能显著诱导LLCPK1细胞HSP70的表达;一定浓度范围内的黄芩苷(0.1~10μg/m L)处理的LLC-PK1细胞HSP70表达显著高于42℃单纯热应激;黄芩苷(0.01~100μg/m L)能显著上调热应激条件下LLC-PK1细胞HSP70的表达,且1μg/m L的黄芩苷上调效果最显著。
- 迟世凯孙春玲李华涛丛霞姜忠玲王新曹荣峰田文儒
- 关键词：黄芩苷LLC-PK1热应激HSP70
- 钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ对热休克小鼠胚胎成纤维细胞HSP70表达的影响被引量：3
- 2012年
- 为证实热休克小鼠胎儿成纤维细胞中钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)对热休克蛋白70(Heat shock protein70,HSP70)基因表达的影响及其作用机理,将体外培养的小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse Embryonic Fibroblasts,MEF)随机分为39℃和41℃热处理组(分别处理0.5,1,1.5,2 h)和常温对照组(37℃),测定各组细胞CaMKⅡ和HSF1 mRNA的量。此外,将培养的细胞分为37℃和39℃CaMKⅡ特异性抑制剂(myr-AIP)处理组和相应的空白对照组,分别测定各组细胞HSP70、HSF1及其mRNA的量。结果表明,39℃热休克1 h后HSF1和CaMKⅡ的mRNA表达量极显著高于常温对照组,经过myr-AIP处理的39℃组细胞HSP70及其mR-NA含量显著低于39℃空白对照组,而37℃myr-AIP处理组与37℃对照组没有显著差异;myr-AIP对37℃组和39℃组的HSF1 mRNA和蛋白含量影响均不显著,却使p-HSF1的含量显著降低。热休克能增加CaMKⅡ和HSF1 mRNA的转录,且CaMKⅡ通过磷酸化HSF1促进HSP70基因表达。
- 孙琪丛霞索佳佳曹荣峰姜忠玲崔凯高善颂田文儒
- 关键词：热休克反应HSP70CAMK
- 小檗碱对兔乳房炎病原菌的抑菌效果被引量：4
- 2014年
- 试验分离培养了兔乳房炎病原菌,观察了兔乳房炎组织的病理学变化,并研究了病原菌对抗生素和小檗碱的敏感性及其形态学变化。结果发现,受感染的乳房组织出现炎性细胞浸润,腺泡上皮细胞坏死、脱落,腺泡结构改变,间质纤维增生等;兔乳房炎的致病菌主要是金黄色葡萄球菌、停乳链球菌和大肠杆菌,敏感的抗生素有恩诺沙星、头孢曲松和红霉素等;扫描电镜下观察到小檗碱使金黄色葡萄球菌和停乳链球菌菌体表面变粗糙,出现很多凸起物,大肠杆菌表面有一处或多处凹陷,菌体皱缩弯曲。上述结果说明,兔乳房炎的病原菌主要是常在菌,小檗碱对其有明显的抑菌效果,且对球菌和杆菌的抑菌机制可能不同。
- 张双丛霞李华涛曹荣峰田文儒
- 关键词：病原菌小檗碱扫描电镜
- 黄芩苷黄芩素小檗碱对LLC-PK1细胞炎症模型中TNF-α IL-1β及IL-6表达的影响被引量：5
- 2015年
- 研究中药黄芩苷、黄芩素、小檗碱对细菌脂多糖(LPS)诱导的猪肾小管上皮细胞(LLC-PK1)中肿瘤坏死因子-α(TNG-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-6(IL-6)表达的影响。用噻唑蓝比色法(MTT法)筛选LPS、黄芩苷、黄芩素和小檗碱对细胞作用的最佳浓度,用RT-PCR检测TNF-α、IL-1βmRNA表达,以确定细胞炎症模型是否建立成功;炎症模型建立后,用最佳浓度的黄芩苷、黄芩素和小檗碱分别作用细胞24h,用qPCR检测TNF-α、IL-1β及IL-6mRNA的表达量。结果LPS刺激组细胞TNF-α、IL-1βmRNA表达量极显著高于正常对照组(P<0.01),黄芩苷、黄芩素和小檗碱作用组细胞TNF-α、IL-1β及IL-6mRNA表达量比LPS刺激组显著降低(P<0.05),与对照组无显著差异(P>0.05)。上述结果表明,黄芩苷、黄芩素和小檗碱通过抑制炎症细胞TNF-α、IL-1β及IL-6 mRNA的表达,从而发挥抗炎作用。
- 任浩文丛霞李华涛姜忠玲王新曹荣峰田文儒
- 关键词：TNF-ΑIL-1Β黄芩苷黄芩素小檗碱
