国家教育部博士点基金(20094404110019)
- 作品数：10 被引量：37H指数：4
- 相关作者：胡美英柳晓磊任珍珍易欣龚亮更多>>
- 相关机构：华南农业大学广州出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金霍英东青年教师基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 小菜蛾线粒体复合物Ⅲ铁硫蛋白基因5′上游调控区域的克隆及序列分析
- 2011年
- 利用Tail-PCR技术克隆了小菜蛾线粒体复合物Ⅲ铁硫蛋白亚基的基因组DNA序列,全长5 013 bp,GenBank登录号为HM210791。研究表明,该基因具有3个内含子,大小分别为96 bp、577 bp和549 bp,且其内含子两端具有典型的GT-AG结构。生物信息学分析表明,该基因5′上游调控区域不仅包括TATA-box等启动子核心序列,而且含有BR-C Z4、Hb、Dfd、CF2-II和HSF等转录因子结合位点。进一步鉴定了该基因的转录起始位点、启动子序列和CPG岛区域。为小菜蛾线粒体复合物Ⅲ铁硫蛋白亚基的转录调控机制和具体的生理功能研究提供一定基础。
- 龚亮张彦博耿鹏胡美英
- 关键词：小菜蛾TAIL-PCR
- 昆虫化学感受基因家族研究新进展被引量：2
- 2010年
- 主要介绍了化学感受基因家族的功能,进化模式及环境适应性等方面的最新进展,并对该基因家族今后的研究进行了展望。
- 柳晓磊翁群芳任珍珍胡美英
- 关键词：气味结合蛋白化学感受蛋白受体进化
- 重叠延伸PCR法构建小菜蛾化学感受蛋白1基因突变体研究被引量：3
- 2011年
- 【目的】探索重叠延伸PCR法在昆虫化学感受蛋白基因点突变上的应用,研究半胱氨酸(Cys32)对小菜蛾(Plutella xylostella)化学感受蛋白1(PlxyCSP1)结合特性的影响。【方法】用计算机软件模拟PlxyCSP1上Cys32突变前后的蛋白三级结构以及与配体化合物的结合情况,确定点突变位点。根据扩增得到的PlxyCSP1序列设计并合成重叠引物,利用重叠延伸PCR法,将PlxyCSP1上的Cys32突变成色氨酸(Trp32),获得突变体PlxyCSP1-M。将突变后的基因与载体pET-32a(+)连接,转化大肠杆菌BL21(DE3)。【结果】分子对接图显示,配体可以顺利进入PlxyCSP1的结合口袋,而无法进入PlxyCSP1-M的结合口袋。结合能预测显示,配体化合物与PlxyCSP1的结合能均为正值,与PlxyCSP1-M的结合能均为0。突变后的重组质粒测序结果表明,Cys32(TGC)已突变为Trp32(TGG),经IPTG诱导,该菌表达了分子质量约为36 ku的融合蛋白。【结论】Cys32是影响PlxyCSP1结构和功能的重要氨基酸残基。Cys32突变为Trp32后,PlxyCSP1-M结合特性发生了变化,不能与配体化合物正常结合。
- 任珍珍刘晶晶柳晓磊陈永李珣胡美英
- 关键词：小菜蛾重叠延伸PCR
- 牵出技术在蛋白质相互作用研究中的应用被引量：2
- 2011年
- 蛋白质与蛋白质的相互作用参与生命体内的许多生物学过程,关于蛋白质相互作用的研究是人们了解蛋白质功能、揭开生命奥秘的关键所在。牵出(pull-down)技术作为一种简单、经济、行之有效的一种体外验证蛋白质与蛋白质之间的相互作用的实验技术,近几年受到了科研人员的青睐。本文阐述了该技术的基本原理和技术特点,总结了近年来牵出技术在生命科学领域中的应用情况,以及由此衍生的新技术的研究进展。
- 易欣柳晓磊胡美英
- 关键词：蛋白质相互作用
- 小菜蛾气味受体蛋白PlxyOr83b基因的克隆及表达被引量：2
- 2011年
- 【目的】克隆小菜蛾Plutella xyostella气味受体Or83b基因,并进行原核表达,为研究小菜蛾寄主选择行为的分子机理,开发昆虫行为调节剂提供基础。【方法】提取小菜蛾的总RNA,反转录获得总cDNA,采用RT-PCR方法扩增目的基因,将其克隆至T载体并测序,然后将目的基因克隆到大肠杆菌Escherichia coli表达载体pET-32a(+)中表达。经酶切、PCR及测序鉴定正确后转化BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE,Western印迹鉴定表达蛋白。【结果】获得了编码小菜蛾Or83b的cDNA序列,该基因阅读框长1 413 bp,编码471个氨基酸,预测的等电点为7.19,命名为PlxyOr83b(GenBank登录号为GQ923610);成功构建了pET-PlxyOr83b原核表达重组质粒,目的基因获得高效表达,其融合蛋白分子量为32.0 kD,Western blot检测结果进一步表明PlxyOr83b在大肠杆菌DE3中得到正确表达。【结论】成功克隆和表达了小菜蛾气味受体基因PlxyOr83b,该基因与其他昆虫Or83b基因基本一致。
- 李珣刘晶晶龚亮陈永钟国华
- 关键词：小菜蛾气味受体基因克隆原核表达
- 昆虫化学感受蛋白基因的进化分析被引量：5
- 2011年
- 从基因库中调取已完成测序的昆虫化学感受蛋白(chemosensory proteins,CSPs)基因序列和氨基酸序列,共涉及昆虫7个目23个种的59个基因。应用MEGA 5.0形成了这59个基因的系统发育关系树,并计算CSPs基因在昆虫中的核苷酸替换速率。对非同义替换速率和同义替换速率进行比较的结果显示,CSPs基因在昆虫中总体上受到负选择作用。用PAML软件位点-特异模型检测到6个受到正选择作用的位点,其中5个位于功能重要的区域。
- 柳晓磊翁群芳胡美英李亚楠易欣
- 关键词：昆虫化学感受蛋白基因进化
- 甜菜夜蛾PAP基因克隆及在高温胁迫下其表达量的变化被引量：2
- 2011年
- 紫色酸性磷酸酯酶(purple acid phosphatase,PAP)在生物逆境胁迫中具有至关重要的作用,而在昆虫中此类基因极少见于报道。首次克隆和分析了甜菜夜蛾PAP基因cDNA 3’末端序列,在GenBank登录后,获得序列号为HM566114,其长为759个碱基对,推测编码252个氨基酸。此多肽序列具有高度保守性,其相似性分别为:埃及伊蚊(Aedes aegypti)84%;黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)52%,赤拟谷盗(Tribolium castaneum)50%。为了研究高温对甜菜夜蛾PAP基因表达量的影响,利用RT-PCR技术,检测30℃,35℃,40℃胁迫下甜菜夜蛾2龄幼虫体内PAP基因表达量的变化,其中设对照组为25℃。结果表明:高温对甜菜夜蛾2龄幼虫PAP基因表达具有明显的诱导作用,30℃,35℃,40℃分别处理10,20 h的表达量均显著高于对照组25℃分别处理的10,20 h(P<0.05)。相比于对照组,在30℃处理20 h的表达量最高,表明PAP基因的表达与其抗高温能力之间存在一定的关系。
- 胡振龚亮张彦博胡美英
- 关键词：甜菜夜蛾CDNA克隆半定量RT-PCR
- 桔小实蝇非典型气味受体Orco基因的克隆与表达谱分析被引量：5
- 2013年
- 为探讨非典型气味受体基因Orco的功能,采用RT-PCR和RACE方法克隆获得桔小实蝇Bacto-cera dorsalis(Hendel)Orco受体的全长cDNA序列,命名为Bdor/Orco(GenBank登录号为EU621792)。测序结果表明Bdor/Orco开放阅读框全长1 422bp,编码473个氨基酸残基。对其组成成分、疏水/亲水区域、信号肽、蛋白质二级结构,以及分子进化关系等进行了预测与推断,分析结果表明Bdor/Orco与其他昆虫的Orco具有较高的氨基酸序列一致性,特别是C末端。对该基因在桔小实蝇成虫不同组织和发育时期表达量的荧光定量PCR分析,结果表明Bdor/Orco主要是在桔小实蝇成虫触角中表达,头部(去除触角)、雌虫前足和翅中也有较高的表达;桔小实蝇在各个发育时期的表达水平不同,在刚羽化雌成虫中的表达量最高。
- 赵海明易欣胡美英安国栋王会冬黄林
- 关键词：桔小实蝇气味受体克隆表达谱
- 昆虫嗅觉相关蛋白的结构和功能被引量：9
- 2010年
- 昆虫在长期进化的过程中形成了复杂的嗅觉系统,气味剂结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)、嗅觉受体(olfactory receptors,ORs)是其最主要的组分.其主要作用是结合外围挥发性的气味分子并将信号传递给细胞内的第二信使.OBPs和ORs的结构、功能、表达、进化是昆虫行为与进化关系的重要研究领域和研究热点.本文主要总结了近年来昆虫OBPs和ORs的结构特点、生理功能、表达特点、遗传进化等方面研究的最新进展,对OBPs和ORs的研究趋势进行了展望,为昆虫嗅觉系统进化研究及寻找害虫防治新途径提供参考信息.
- 任珍珍柳晓磊胡美英
- 关键词：嗅觉受体进化
- 喜树碱诱导的草地贪夜蛾Sf9细胞凋亡被引量：7
- 2011年
- 传统植物源杀虫剂喜树碱具有优异的抑制昆虫生长发育活性,其诱导昆虫细胞凋亡的作用方式和机制尚不明确,极大地限制了喜树碱在植物保护领域的应用开发。本研究以1μmol/L喜树碱诱导草地贪夜蛾Spodopterafrugiperda Sf9细胞呈现细胞皱缩、微绒毛消失和染色质边集等典型细胞凋亡早期超微结构形态特征,中期凋亡小体逐渐出现并急剧增多,DNA电泳分析可见清晰DNA片段化凋亡特征。流式细胞术分析表明1μmol/L喜树碱诱导Sf9细胞12h凋亡率达到最大值39.67%,是对照的13.13倍,随后减小。喜树碱诱导Sf9细胞凋亡在12h和24h时Sf caspase-1分别出现两个活性高峰,表明其作为效应因子在细胞凋亡级联反应过程中具有影响作用。喜树碱显著抑制Sf9细胞拓扑异构酶Ⅰ活性,阻断解旋负超螺旋pBR322DNA,导致DNA损伤进而启动细胞凋亡级联反应使Sfcaspase-1活性增加,提示其信号转导过程是细胞凋亡诱导机制之一。本研究通过分析喜树碱的诱导昆虫Sf9细胞凋亡,对揭示喜树碱诱导昆虫细胞凋亡的作用机制具有重要启示和帮助。
- 王文祥钟国华胡美英黄劲飞葛萃萃
- 关键词：喜树碱SF9细胞细胞凋亡级联反应流式细胞术
