国家自然科学基金(30570826)
- 作品数：9 被引量：29H指数：4
- 相关作者：刘杞孙航王新国谢松丽梁珊更多>>
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- 肝再生增强因子对外原性抗原引起机体免疫应答影响的研究被引量：8
- 2007年
- 目的研究rALR对HBsAg及BSA免疫大鼠产生抗体、细胞因子和对脾脏细胞增殖的影响。方法甲醇诱导表达rALR,测定活性并进行以下研究。①rALR对HBsAg免疫的影响:实验分为:生理盐水、HBsAg20μg/只、HBsAg20μg+rALR100μg/kg、HBsAg20μg+rALR25μg/kg、HBsAg20μg+pPIC9K表达上清、HBsAg20μg+CsA10mg/kg,共6组;②rALR对BSA免疫的影响:实验分为:生理盐水、BSA25μg/只、BSA25μg+rALR100μg/kg、BSA25μg+pPIC9K表达上清、BSA25μg+CsA10mg/kg,共5组。以上均皮下注射免疫大鼠,1次/周×4次,ELISA检测血清中相应抗体、IL-2和IFN-γ。③rALR对大鼠脾细胞增殖的影响:Wistar大鼠先皮下注射HBsAg(20μg/只)1次,2周后处死,分离脾单核细胞,种板,再加HBsAg1μg/孔和/或相应处理因素(rALR、空质粒表达产物等),48h后加3H-TdR,12h后收集细胞,检测cpm值。结果rALR100μg/kg+HBsAg组的8只动物中,有2只出现抗HBs的抗体,空质粒对照组和单用HBs Ag组8只动物均出现抗HBs。rALR100μg/kg+BSA组的8只动物中,有3只出现抗BSA抗体,空质粒对照组和单用BSA组8只动物均出现抗BSA的抗体。rALR100μg/kg能明显抑制细胞因子IL-2及IFN-γ的产生。rALR4μg体外能明显抑制脾细胞的增殖。结论rALR能抑制HBsAg和BSA诱导大鼠产生相应抗体及IL-2、IFN-γ的产生;体外能抑制经体内致敏的脾细胞的增殖,说明rALR有免疫抑制作用。
- 石小枫孙航唐琳陈学华刘杞
- 关键词：肝再生增强因子免疫抑制
- 人肝再生增强因子对体外单个核细胞PKCα-NF-κB及IL-2的影响被引量：5
- 2009年
- 目的观察人肝再生增强因子(human augmenter of liver regeneration,hALR)对人外周血单个核细胞(periph-eral blood mononuclear cell,PBMC)PKCα-NF-κB及IL-2的影响,探讨hALR免疫抑制机制。方法用梯度离心法分离正常人PBMC,分成正常对照组、刀豆蛋白A(ConA)刺激组(ConA组)和hALR干预组(ConA+hALR组)。ConA组用5μg/mlConA刺激细胞增殖和分泌细胞因子IL-2;ConA+hALR组用30μg/mlhALR对ConA刺激进行干预。于细胞培养0、8、16、32、40h时,用MTT法测定细胞增殖程度,Westonblot检测细胞内信号通路PKCα-NF-κB表达含量,Fluo-3AM装载检测胞内钙离子浓度,用双抗夹心酶联法检测上清细胞因子IL-2含量。结果ConA组细胞增殖逐渐加强,16h时与正常对照组比较具有统计学意义(P<0.05);PKCα、NF-κB表达上调及上清IL-2含量增加趋势一致,在16h达到高峰(P<0.05)。ConA+hALR组细胞没有增殖,PKCα-NF-κB表达及上清IL-2含量最高峰后移至32h。每个时间点各组细胞内Ca2+浓度没有差别。结论hALR可能通过抑制PKCα-NF-κB通路阻碍IL-2的产生速度进而抑制免疫。
- 王新国刘杞孙航
- 关键词：人肝再生增强因子外周血单个核细胞IL-2
- 人肝再生增强因子对IL-10分泌的影响被引量：1
- 2010年
- 目的观察人肝再生增强因子对IL-10分泌的影响。方法用梯度离心法分离正常人PBMC,分成正常组、hALR组、ConA刺激组和ConA+hALR组。培养16h后,用MTT法观察细胞增殖情况,双抗夹心酶联法检测上清中细胞因子IL-2,IL-10水平。结果 ALR显著抑制ConA对细胞的增殖作用的同时,明显促进细胞因子IL-10分泌和显著抑制细胞因子IL-2分泌。结论 ALR可能通过分泌IL-10和抑制IL-2分泌而发挥免疫抑制作用。
- 王新国袁建国刘杞
- 关键词：人肝再生增强因子IL-2IL-10PBMC
- 肝再生增强因子,细胞色素P450与人肝癌细胞在体外耐药的关系被引量：3
- 2011年
- 目的:研究肝癌顺铂耐药细胞HepG2/cDDP中人肝再生增强因子(Human augmenter of liver regeneration,hALR)对细胞色素P450(Cytochrome P450,CYP450)表达的影响,观察ALR是否通过作用CYP450与肝癌细胞耐药的形成有关。方法:建立体外肝癌顺铂耐药细胞系,MTT检测耐药指数;将构建好的人肝再生增强因子siRNA表达质粒psiALR-A及其阴性对照质粒psiALR-B采用脂质体转染的方法分别转染至HepG2/cDDP细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,计算转染效率。根据转染不同的质粒,将HepG2/cDDP细胞分为3组:转染组(转染psiALR-A),对照组(转染psiALR-B),空白组(未转染重组质粒)。免疫细胞化学法、免疫印迹法、实时荧光定量PCR法检测转染细胞中hALR和CYP450的表达,化学发光法检测各组细胞中CYP3A4的活性,MTT比色法检测各组细胞对顺铂敏感性的变化。结果:耐药模型成功建立,耐药指数为6.26;成功转染质粒psiALR-A和psiALR-B;转染组细胞中hALR表达明显减少,CYP450的表达明显增加,活性升高,而对照组和空白组细胞中hALR和CYP450表达没有明显的变化。MTT结果显示转染组细胞对顺铂的敏感性降低,对照组和空白组细胞对顺铂的敏感性没有明显变化。结论:阻断人肝再生增强因子的表达后,HepG2/cDDP细胞CYP450表达明显增加,活性增强,对顺铂的敏感性下降,ALR可能通过作用CYP450在肝癌细胞耐药的发生发展中起着重要作用。
- 徐永红孙航郭晖钱克莉张臣丽刘杞
- 关键词：肝再生增强因子CYP450肝癌药物耐受性
- 阻断肝再生增强因子的表达对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制作用被引量：13
- 2006年
- 背景与目的:前期研究中已发现人肝再生增强因子(humanaugmenterofliverregeneration,hALR)在肝癌细胞中呈高表达,在正常肝细胞中几乎不表达,并在体外能刺激肝癌细胞株增殖,而对正常肝细胞无影响。本研究通过运用hALR的siRNA和hALR单克隆抗体阻断人肝癌细胞株HepG2表达,探讨hALR对细胞增殖的影响。方法:设计、构建siRNA表达质粒pSIALR-A及其阴性对照质粒pSIALR-B。将构建的pSIALR-A和pSIALR-B分别转染HepG2细胞。荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,以计算转染效率。转染48h后,免疫细胞化学及RT-PCR法检测HepG2细胞中hALR的表达。用3H-TdR掺入法检测hALR的siRNA和特异性单克隆抗体对HepG2细胞增殖的影响。结果:HepG2细胞中有hALR的表达。成功构建了针对hALR基因编码区的siRNA表达质粒pSIALR-A。转染入细胞后发现,pSIALR-A能明显抑制hALR的表达(mRNA的表达量减少83%),而随机序列的siRNA却无此作用。hALR的siRNA在体外能显著抑制人肝癌细胞株HepG2增殖,分别转染质粒pSIALR-A和pSIALR-B后HepG2细胞的cpm值为67687±6548和104807±5713(P<0.05)。抗hALR单克隆抗体特异性地阻断hALR的作用后,可部分抑制肿瘤细胞自主性生长(P<0.05)。结论:HepG2细胞高表达hALR;针对hALR的siRNA能显著、特异性地抑制hALR表达,进而抑制HepG2细胞的生长。抗hALR单克隆抗体也能部分抑制HepG2细胞自主性生长。
- 唐琳孙航张林郭晖张玲刘杞
- 关键词：人肝再生增强因子SIRNAHEPG2细胞株
- 肝再生增强因子RNAi对肝癌细胞株HepG2表达MHCI、DR、CD80、CD86的影响
- 2009年
- 利用肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration,ALR)的siRNA阻断人肝癌细胞株HepG2表达ALR,观察HepG2细胞MHCI、DR、CD80、CD86的表达是否受影响,以探讨ALR是否通过影响MHCI、DR、CD80、CD86表达参与肝癌细胞逃避机体的免疫监视。培养HepG2,分为未转染组、转染阳性SiRNA组、转染阴性SiRNA组、转染脂质体空质粒组;RT-PCR检测转染前后hALR mRNA的表达,RT-PCR、Western blot印迹法、流式细胞术(FCM)检测HepG2细胞表达MHCI、DR、CD80、CD86的水平。结果表明,转染阳性SiRNA组hALR mRNA的表达较转染阴性SiRNA组明显下降,转染阳性SiRNA组和转染阴性SiRNA组MHCI、DR、CD80、CD86的表达均无差异;脂质体转染组除CD80 mRNA外,MHCI、DR、CD86 mRNA表达均较未转染组增高;脂质体转染组MHCI、DR、CD80、CD86的表达水平均较未转染组有上升趋势。因此,阳性SiRNA具有显著和特异性抑制hALR表达的作用,阻断ALR的表达不影响HepG2细胞表达MHCI、DR、CD80、CD86,ALR不通过影响MHCI、DR、CD80、CD86的表达参与肝癌细胞逃避机体免疫监视。转染载体可能影响某些基因的表达。
- 谢松丽张云霞孙航刘杞
- 关键词：人肝再生增强因子
- 阻断肝再生增强因子表达对HepG2细胞转化生长因子-α及表皮生长因子受体表达的影响被引量：7
- 2009年
- 目的用RNA干扰技术阻断人肝再生增强因子(human augmenter of liver regeneration,hALR)表达,观察人肝癌细胞HepG2中转化生长因子-α(transforming growth factor-α,TGF-α)及表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达是否受影响,以阐明hALR在促进肝癌细胞生长的相关细胞因子网络中的作用。方法将构建好的人肝再生增强因子siRNA表达质粒pSIALR-A及其阴性对照质粒pSIALR-B分别转染至HepG2细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,计算转染效率。免疫细胞化学法检测转染细胞中hALR表达,确定抑制效果。根据转染质粒的不同,将HepG2细胞分为3组:转染组(转染pSIALR-A)、阴性对照组(转染pSIALR-B)和空白组(未转染重组质粒)。放射免疫法检测阻断肝再生增强因子后各组细胞培养上清中TGF-α水平,Western blot法检测阻断肝再生增强因子后各组细胞EGFR蛋白的表达。结果转染组、空白组和阴性对照组TGF-α分别为(5.27±0.86)pg/ml、(7.92±2.65)pg/ml和(6.50±1.28)pg/ml,转染组与空白组、阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);EGFR相对表达量分别为0.946±0.136、1.115±0.606和1.131±0.509,转染组与空白组、阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论在促进肝癌细胞生长的细胞因子网络中,肝再生增强因子除了可以直接刺激肝癌细胞增殖外还可通过上调TGF-α及EGFR的表达水平参与肝癌的发生、发展。
- 梁珊孙航王新国谢松丽刘杞
- 关键词：人肝再生增强因子转化生长因子-Α表皮生长因子受体肝癌细胞HEPG2
- ERK在ALR抑制免疫过程中的变化及意义被引量：3
- 2010年
- 目的观察肝再生增强因子(ALR)对外周血单核细胞增殖时ERK的影响,以探明ALR免疫抑制相关机理。方法梯度离心法分离健康人外周单核细胞,用ConA 5μg/ml刺激细胞增殖,选定最佳研究时间;观察不同剂量ALR抑制功能,选用最佳抑制剂量;利用Western blot检测ALR抑制细胞增殖时ERK的磷酸化改变。结果 ConA刺激细胞增殖最佳时间是60 h,ALR能抑制细胞增殖,并呈剂量依赖关系,30μg/ml ALR抑制效果最显著;ALR对单核细胞无直接增殖作用。ConA能引起ERK含量和磷酸化明显增加,ALR则抑制ConA对ERK的刺激,以抑制ERK2最明显。结论 ALR可能通ERK的含量和抑制ERK2的磷酸化抑制细胞增殖。
- 王新国刘杞孙航谢松丽梁珊彭明利陈学华
- 关键词：ERK外周血单核细胞免疫抑制
- 人肝再生增强因子对人外周血单个核细胞增殖的影响及其机制被引量：3
- 2009年
- 目的探讨人肝再生增强因子(hALR)对人外周血单个核细胞(PBMC)增殖的影响及其机制。方法梯度离心分离PBMC,将细胞分为正常对照组、刀豆蛋白A(ConA)(5mg/L)组和ConA(5mg/L)+hALR(30mg/L)组,分别培养10min、30min、1h、2h、4h后,MTT法检测各组各时间点细胞增殖水平,钙荧光指示剂法检测细胞内游离Ca2+浓度的变化,Western blot法检测细胞内胞外信号调节激酶(ERK)的磷酸化程度。结果4h内,各组细胞的增殖水平差异无统计学意义,但ConA组细胞增殖水平已表现出逐渐升高的趋势。正常对照组细胞内Ca2+浓度在加入Fluo-3/AM后2h达高峰,ConA组1h达高峰,ConA+hALR组10min达高峰。正常对照组细胞内磷酸化的ERK随培养时间的延长而逐渐减少;ConA组细胞内磷酸化的ERK在30min达高峰,之后逐渐降低;ConA+hALR组细胞内磷酸化的ERK在2h前明显低于ConA组。结论hALR可能通过影响细胞内Ca2+浓度的变化峰值和磷酸化的ERK,来抑制人PBMC的免疫功能,从而影响其增殖。
- 王新国刘杞孙航梁珊谢松丽张宏华
- 关键词：人肝再生增强因子外周血单个核细胞细胞增殖钙离子胞外信号调节激酶
