国家科技重大专项(2009ZX10004-313)
- 作品数：11 被引量：38H指数：5
- 相关作者：张舒林王洪海余晓丽孙战强温子禄更多>>
- 相关机构：上海交通大学武汉工业学院复旦大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项湖北省教育厅科学技术研究项目上海市科委国际合作基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 结核分枝杆菌蛋白Rv0315的克隆表达及其抗原性研究被引量：6
- 2012年
- 目的评价结核分枝杆菌重组蛋白Rv0315在结核病血清学诊断中的价值。方法采用常规分子克隆方法获得重组Rv0315蛋白,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测84份确诊结核病人血清和48份健康人血清中相应的抗结核抗体水平,并与结核分泌蛋白ESAT-6的检测结果进行比较。结果成功构建了重组蛋白Rv0315,其在E.coli BL21plysS(DE3)中主要以可溶性形式表达,分子量(30.3kDa)与预期相符,ELISA血清学活性评估显示其特异性和敏感性分别为94.0%(45/48)和35.7%(30/84)。结论重组蛋白Rv0315有望成为新的结核病血清学诊断候选抗原。
- 陈苏芳周业成赵静赵俊伟吴兴福孙战强玄松花张舒林
- 关键词：结核分枝杆菌克隆血清学诊断
- 结核分枝杆菌蛋白Rv0315克隆表达及其抗原性研究
- 2012年
- 目的评价结核分枝杆菌重组蛋白Rv0315在结核病血清学诊断中的价值。方法采用常规分子克隆方法获得重组Rv0315蛋白，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测84份确诊结核病人血清和48份健康人血清中相应的抗结核抗体水平，并与结核分泌蛋白ESAT-6的检测结果进行比较。结果成功构建了重组蛋白Rv0315，其在E．coliBL21plysS（DE3）中主要以可溶性形式表达，分子量（30．3kDa）与预期相符，ELISA血清学活性评估显示其特异性和敏感性分别为94．0％（45／48）和35．7％（30／84）。结论重组蛋白Rv0315有望成为新的结核病血清学诊断候选抗原。
- 陈苏芳周业成赵静赵俊伟吴兴福孙战强玄松花张舒林
- 关键词：结核分枝杆菌克隆血清学诊断
- 结核分枝杆菌Rv3914抗原的克隆表达与纯化被引量：1
- 2011年
- 目的构建结核分枝杆菌Rv3914蛋白的重组质粒,并在大肠埃希菌中表达及纯化,为结核病血清学诊断提供候选抗原。方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增Rv3914基因片段,插入到pET-28b(+)载体中,构建pET28b-Rv3914重组质粒,转化大肠埃希菌E.coli BL21plysS(DE3),经IPTG诱导表达后,应用Ni-NTA亲和柱纯化重组蛋白。结果 PCR扩增出Rv3914基因序列,重组质粒经测序并经BLAST分析后发现无点突变。pET28b-Rv3914重组质粒在大肠埃希菌E.coli BL21plysS(DE3)中主要以可溶性形式表达,重组蛋白占细胞蛋白总表达量的30%以上,经Ni-NTA柱纯化后,得到纯度超过90%、相对分子质量约为14.7×103的目的蛋白质。结论高纯度结核分枝杆菌Rv3914重组蛋白的获得为研究结核互补特异性抗原组合在结核病血清诊断中的价值奠定了基础。
- 陈永金赵俊伟杨红国孙战强余晓丽张舒林
- 关键词：结核分枝杆菌克隆纯化
- 结核分枝杆菌最低抑菌浓度测定方法及临界值设置研究进展被引量：5
- 2012年
- 结核病迄今仍是全球单一病原体引起死亡人数最多的传染性疾病。耐药及耐多药的产生是结核病流行和广泛传播的重要原因之一。建立规范、有效的结核分枝杆菌药敏最低抑菌浓度(MIC)的检测方法及设置有效的临界值对于结核病个体化治疗、快速耐药检测方法的研究以及新型抗结核药物筛选等领域具有重要意义,也是控制耐药结核病产生和传播的关键。该文就结核分枝杆菌MIC测定方法及临界值设置等方面的研究进展进行综述。
- 张朝宝王洪海张舒林
- 关键词：结核分枝杆菌最低抑菌浓度
- XTT/mPMS组合显色系统用于抗分枝杆菌药物筛选的性能评估被引量：2
- 2013年
- 目的评估一种用于抗分枝杆菌药物高通量筛选的XTT/mPMS组合显色系统。方法评估XTT/mPMS系统的检测限、稳定性、细胞毒性、培养基组分干扰作用以及药物筛选试验的信噪比、Z'因子等性能指标,进行常用抗分枝杆菌药物最低抑菌浓度(MIC)测定,与刃天青显色法(resazurin microtitre assay,REMA)结果比较。结果 XTT/mPMS对分枝杆菌的检测下限为2.4×107CFU/mL,检测上限不同菌种在1.8×108～7.5×108CFU/mL之间。XTT/mPMS和7H9培养基37℃恒温共培养时至少在7 d内保持相对稳定。XTT/mPMS能与7H9-S培养基组分的营养添加剂(OADC)发生非细胞还原反应;其工作浓度(XTT 0.2 mmol/L,mPMS 0.04 mmol/L)对分枝杆菌具有低细胞毒性;XTT/mPMS检测的Z'因子均大于0.8,信噪比较低;分枝杆菌7H9-S液体培养MIC检测5～7 d(快生菌36～48 h)即可获得结果;MIC结果除M.tuberculosis的乙胺丁醇(EMB)有差异外基本与REMA法一致。结论 XTT/mPMS组合显色系统反应快速、稳定、低毒,适合于抗分枝杆菌药物高通量快速筛选。
- 张朝宝马峻温子禄玄松花周业成余晓丽孙战强张舒林王洪海
- 关键词：分枝杆菌最低抑菌浓度药物筛选
- 氮掺杂碳纳米管吸附与催化溶解氧还原用于电致化学发光免疫分析
- ＜正＞首先根据不同电位催化氧还原所得中间体的电子顺磁共振谱（图1）和基于超氧化物歧化酶的酶促反应淬灭电致化学发光（ECL）实验证实O2以超氧自由基O·-2的形态参与量子点（QDs）的ECL历程。比较了氮掺杂（CNx）和未...
- 邓盛元侯镇涛林大杰雷建平鞠熀先
- 武汉地区结核分枝杆菌氨基糖苷类抗生素耐药分离株rpsL和rrs基因特征分析被引量：7
- 2011年
- 目的阐明武汉地区结核分枝杆菌分离株氨基糖苷类药物耐药相关基因rpsL和rrs的分子突变特征。方法从武汉医疗救治中心共收集69株结核分枝杆菌的临床菌株,包括耐链霉素(SM)菌株35株(其中4株同时对卡那霉素耐药)和SM敏感菌株34株(其中全敏感20株)。采用PCR直接测序法分析rpsL和rrs基因的分子突变特征。结果 35株SM耐药株中有26株(74.3%)检测到rpsL突变,突变位点集中在第43位和第88位密码子,并发现了1个新的突变类型Lys88Glu;13株耐药株(37.1%)检测到四种不同类型的rrs基因突变,分别为A1401G(17.1%,6/35)、A514C(14.3%,5/35)、G1487A(2.9%,1/35)和C517T(2.9%,1/35),1株全敏感菌株的rrs基因发生了C1029T突变。卡那霉素耐药株中只有3株检测到了rrs突变,并发现了一种rrs基因尚未见报道的G1487A突变类型。结论结核分枝杆菌对氨基糖苷类药物的耐药与rpsL和rrs突变相关,耐药基因突变类型存在地域差异。
- 温子禄沈建国张朝宝余晓丽陈平唐神结郭晓奎张舒林
- 关键词：结核分枝杆菌氨基糖苷类耐药RPSL基因
- 结核分枝杆菌热休克蛋白GroEL1的研究进展被引量：5
- 2010年
- 结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)的GroEL1蛋白是基因复制产物,作为热休克蛋白(HSP)一员,不但行使原有的助折叠分子伴侣功能,而且可作为抗原,在抗原呈递中起作用。另外,由于其独特的结构特点,GroEL1还具有多种生物功能,如作为蛋白分子伴侣,控制细胞因子依赖性肉芽肿的产生;作为DNA分子伴侣,保护DNA免受损害。而在分枝杆菌属的其他物种如耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)中却行使不同的生物学功能。这些功能产生的原因和机制有待进一步研究,从而为结核病的发生及结核分枝杆菌的进化机制提供更多的依据。
- 何磊张鹭彭超王洪海
- 关键词：结核分枝杆菌热休克蛋白抗原分子伴侣
- 磁珠法检测抗酸杆菌的方法建立与临床应用被引量：6
- 2011年
- 目的运用磁珠法检测痰液标本中的抗酸杆菌,探讨该技术在抗酸杆菌诊断中的临床应用价值。方法采用磁珠法检测102份痰液标本中的抗酸杆菌,并与离心沉淀法平行检测结果相比较。结果同一份标本经磁珠法处理后镜下视野更清晰,抗酸杆菌和背景对比更鲜明,102份痰液标本中离心沉淀法检测的阳性率为47.1%,磁珠法检测的阳性率为51.0%,54份离心沉淀法检测阴性的标本用磁珠法检测有4份阳性,平行检测同一份标本,磁珠法检测出的阳性等级更高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论磁珠检测方法操作简便、快速,其阳性率高,浓缩效果明显,适合结核病检测实验室的推广。
- 刘君裴豪陈燕燕蒯守刚陈丽艳王旭
- 关键词：磁珠法离心沉淀法结核分枝杆菌
- 超灵敏电化学及化学发光成像检测DNA
- ＜正＞在传染病与遗传病诊断、环境与法医分析等领域中,特定序列的DNA检测具有重要的作用,而高灵敏的特定序列的DNA检测仍是一个巨大的挑战。本工作利用DNA剪切酶循环放大以及DNA滚环扩增,可以极大地增加DNA检测的灵敏度...
- 纪晗旭严枫雷建平鞠愰先
