广东省科技计划工业攻关项目(2007B030704007)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 相关作者：杜军衣艳梅王震刘鹏江冠民更多>>
- 相关机构：中山大学南方医科大学温州医学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠成纤维细胞激活蛋白α二肽基肽酶核心序列原核表达与纯化及复性被引量：4
- 2009年
- 目的:构建小鼠成纤维细胞激活蛋白α(FAPα)二肽基肽酶催化核心序列(FAPαc)的高效原核表达载体,进行该序列的原核表达、纯化和复性,为下一步高效抗体制作和以FAPα为靶标的抗肿瘤疫苗研发提供实验基础。方法:用PCR技术,从质粒pSecTag2/Hy-groB-FAPα中扩增出编码FAPα二肽基肽酶催化核心区域的基因片段,与原核表达载体pET28α(+)连接,在BL21(DE3)工程菌中实现重组蛋白His6-FAPαc的表达,并进行纯化和复性。结果:成功构建了小鼠来源的FAPα二肽基肽酶催化核心区域的原核表达质粒,通过对转化该质粒后的感受态细菌进行菌液PCR鉴定以及对该质粒进行BamHI和XhoI双酶切鉴定,鉴定结果与预期结果完全一致;实现了对该质粒编码的融合蛋白His6-FAPαc的表达,表达后的融合蛋白主要以包涵体的形式存在,表达产量占菌体总蛋白>70%;纯化了该融合蛋白,纯化后的蛋白纯度通过灰度分析>99%;对该融合蛋白进行了复性,复性后该融合蛋白由不溶的包涵体状态变为可溶的水溶状态。结论:成功表达、纯化和复性了FAPα二肽酶催化核心区域FAPαc,为深入开展FAPα的研究奠定基础。
- 江冠民刘鹏李小青王震衣艳梅杜军
- 关键词：复性
- C端截短突变体mCCL21-a(1-57)可拮抗CCL21介导的ERK磷酸化及细胞迁移被引量：1
- 2011年
- 趋化因子CCL21(CC-chemokine ligand 21,CCL21)与其受体CCR7(CC-chemokine receptor7,CCR7)的结合可以促进肿瘤的侵袭和转移.本研究旨在构建人趋化因子CCL21的截短突变体,竞争性抑制CCL21与CCR7的结合,从而抑制肿瘤的转移.本研究构建了CCL21的10个截短突变体,通过Transewell细胞迁移实验,筛选出具有良好趋化抑制活性的C端截短体mCCL21-a(1-57).Western印迹和体外细胞迁移实验表明,经原核表达的mCCL21-a(1-57)多肽能够阻断CCL21介导的细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)的磷酸化,抑制CCL21对人结肠癌细胞SW480的趋化作用.本研究成功制备了趋化因子CCL21的拮抗性多肽mCCL21-a(1-57),并初步鉴定其体外生物活性,为下一步体内功能研究奠定了良好基础.
- 张淑张革王红胜张帆谭毅马伟峰杜军
