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TH线性肽对人肝素酶B细胞表位多抗原肽的免疫增强作用被引量：3: 2008年; 目的探讨提高人肝素酶B细胞表位肽应答效应的免疫策略。方法预测人肝素酶蛋白B细胞表位，采用8分支多抗原肽（MAP）结构合成多肽，利用ELISA鉴定合成的MAP与肝素酶全蛋白抗体的结合反应。以MAP联合或不联合通用型TH表位线性肽免疫C57BL／6小鼠，动态检测免疫血清效价。结果软件预测得到3个肝素酶蛋白B细胞表位，即大亚基的第1—15位（MAP1）、第279～293位（MAP2）及175～189位（MAP3）氨基酸序列。ELISA显示，MAP2多肽与全蛋白抗体的结合力明显强于MAP1及MAP3，MAP与TH线性肽联合免疫产生的抗体滴度明显高于单纯MAP免疫组。结论生物信息学预测得到的3个表位肽均为肝素酶蛋白的B细胞优势表位，T辅助表位线性肽能显著增强MAP的免疫效应。; 杜玲王惠菊杨建民高寒周永列陶厚权; 关键词：肝素酶 B细胞表位免疫增强

肝素酶多肽抗体对HCCLM6肝癌细胞生长及侵袭的影响被引量：2: 2009年; 目的探讨自行研制的肝素酶多肽抗体对人肝癌HCCLM6细胞生长和侵袭的影响。方法采用二苯基溴化四氮唑蓝（MTT）法检测细胞生长曲线，平板克隆形成试验检测细胞集落数，流式细胞仪检测细胞周期，通过肝素酶活性测定和Transwell侵袭小室试验，了解自行研制的3种肝素酶多肽兔多克隆抗体（P1、P2和P3多肽抗体）对HCCLM6肝癌细胞牛长及侵袭的影响。结果与正常兔IgG对照组比较，P1、P2和P3多肽抗体对HCCLM6肝癌细胞的生长、细胞周期及增殖活性均无明显影响。终浓度为100μg／ml的P1、P2多肽抗体与HCCLM6细胞共培养后，肝素酶活性分别降低42.9％和39.1％（P〈0.01），Transwell侵袭小室中48h穿膜细胞数明显减少，抑制率分别为52.5％和36.6％（P〈0.05）。结论肝素酶P1和P2多肽抗体能抑制人肝癌HCCLM6细胞的肝素酶活性和侵袭能力，P3多肽抗体对肝癌细胞的肝素酶活性和侵袭能力无影响；肝素酶P1、P2和P3多肽抗体对HCCLM6细胞的生长、细胞周期和增殖能力均无明显影响。; 韩晓梅王惠菊杨建民周永列陶厚权高寒叶再元; 关键词：肝素酶多肽抗体肝肿瘤增殖

人类肝素酶B细胞表位的预测和免疫原性鉴定: 2009年; 目的预测并鉴定肝素酶（heparanase）蛋白B细胞表位免疫原性。方法以肝素酶蛋白的氨基酸序列为基础，采用DNAStar分析软件以及Bcepred在线二级结构分析工具分析其蛋白二级结构并预测B细胞表位。根据预测结果，采用8分支多抗原肽结构合成针对该表位的抗原肽，将后者与通用型T辅助表位人IL-1β线性短肽（VQGEESNDK，氨基酸163～171）联合免疫日本白毛黑眼兔，检测免疫血清效价，鉴定其特异性和免疫原性。结果软件预测显示，肝素酶蛋白大亚基的第1～15位（MAP1）、第279～293位（MAP2）及175～189位（MAP3）氨基酸序列最可能为其优势B细胞表位。间接酶联免疫吸附试验、免疫印迹及免疫组化分析，证实MAP1、MAP2及MAP3均能诱导机体产生高滴度抗体，但仅MAP1、MAP2抗体具有高特异性，MAP2抗体与肝癌组织的结合力最强。结论肝素酶大亚基的第1～15位、第279～293位氨基酸为其优势B细胞表位，其中第279—293位氨基酸的免疫原性最强，这为肝素酶多肽抗体及B细胞优势短肽疫苗研制提供了理论依据。; 杜玲王惠菊杨建民方勇赵仲生高寒叶再元; 关键词：肝素酶 B细胞表位表位预测免疫原性

肝素酶多肽在胃癌组织芯片表达及其与患者预后的关系被引量：1: 2009年; 目的探讨肝素酶多肽在胃癌组织表达及其与肿瘤侵袭、转移及预后的关系。方法应用3种针对肝素酶多抗原肽（MAP）的自制抗体和针对肝素酶全蛋白的商品化抗体，采用组织芯片技术和免疫组织化学染色方法，检测132例胃癌组织中肝素酶抗原的表达状况；采用卡方检验、生存曲线等方法分析肝素酶抗原表达的临床病理意义。结果132例胃癌组织中肝素酶MAP2阳性率65．2％（86／132），商品化抗体阳性率60．6％（80／132），而MAP1及MAP3均则阴性。MAP2与商品化抗体相似，其表达阳性率在有脉管侵犯、浆膜受累、远处转移、低未分化和TNM分期Ⅲ、Ⅳ期的胃癌组织中明显增高，阳性表达者预后较差，1年、5年生存率较低。结论肝素酶MAP2多肽与肝素酶全蛋白相似，其表达与胃癌的侵袭、转移及预后密切相关，对临床治疗和预后判断有一定指导意义。; 杨建民韩晓梅赵仲生杜玲王惠菊费保莹石淑青; 关键词：胃癌肝素酶免疫组织化学组织芯片预后

肝素酶HLA-A2限制性CTL表位肽的筛选及其活性鉴定被引量：1: 2008年; 目的预测并鉴定新的人乙酰肝素酶（Hpa）抗原的HLA-A2限制性CTL表位，为恶性肿瘤多肽疫苗的免疫治疗提供依据。方法采用SYFPEITHI和BIMAS软件预测方法，对肝素酶HLA—A2限制性CTL表位进行预测，合成候选表位肽；利用1、2细胞特点，对合成的候选肽与HLA—A2分子进行亲和力分析；利用乳酸脱氢酶释放试验检测待检肽特异性CTL诱导活性；利用ELISPOT检测T细胞活性。结果在所筛选的6条候选CTL表位肽中，Hpa（310～318）FLNPDVLDI与HLA—A2分子具有高亲和力，在体外可有效诱导肝素酶特异性CTL的产生，对肝素酶阳性且HLA—A2限制性的HCC—LM6肝癌细胞及SW-480结肠癌细胞具有明显的杀伤效应，且能有效诱导IFN-1分泌，增强免疫活性。结论首次发现Hpa（310～318）FLNPDVLDI可能是肿瘤肝素酶抗原的HLA-A2限制性CTL表位。; 余彤王惠菊杨建民方勇周永列叶再元; 关键词：肝素酶 CTL表位

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国家自然科学基金(30570816)