国家自然科学基金(30570844)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
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- 人肠三叶因子酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用鉴定
- 2009年
- 目的构建人肠三叶因子酵母双杂交诱饵载体并验证其自激活作用。方法以pET32a-hITF质粒为模板,PCR扩增hITF成熟肽cDNA片段,SalI和EcoRⅤ双酶切后连接到pENTR3c载体,通过λ噬菌体臂同源重组反应(LR重组反应)将hITF片段连接到酵母双杂交诱饵载体pDEST32,获得诱饵质粒pDEST32-hITF,测序后与酵母双杂交空质粒pDEST22共转化到酵母菌株Mav203,经营养缺陷培养基筛选后,观察在含不同浓度3-氨基三唑(3AT)的营养缺陷培养基中pDEST32-hITF的自激活作用。结果成功克隆hITF基因片段,构建酵母双杂交诱饵质粒pDEST32-hITF,其与酵母双杂交空载体pDEST22共转化到酵母菌株Mav203后,可在3AT浓度为0、10、25mmol/L的营养缺陷培养基上生长,而在3AT浓度为50、75、100mmol/L的营养缺陷培养基上不能生长。结论成功构建酵母双杂交诱饵载体,经验证50mmol/L及以上浓度的3AT营养缺陷培养基可以抑制其自激活作用。
- 王林孙勇王臻张勇吴炜吕尚军彭曦
- 关键词：肠三叶因子双杂交系统技术自激活作用
- 人解痉多肽原核表达载体的构建及诱导表达被引量：2
- 2008年
- 目的:构建人解痉多肽(hSP)原核表达载体,表达重组hSP,为功能研究奠定基础。方法:通过RT-PCR获得hSPcDNA片段,将目的基因插入原核表达载体pET32a,得到重组载体pET32a-hSP。IPTG诱导表达后行SDS-PAGE分析及WesternBlot检测。结果:经测序及PCR证实,hSPcDNA准确插入原核表达载体pET32a中,诱导表达后SDS-PAGE分析证明hSP的分子量约为32kD,Western-blot分析表明,表达蛋白具有良好的抗原性和特异性。结论:上述结果表明成功构建出原核表达载体pET32a-hSP,获得重组hSP,并为深入研究hSP奠定了基础。
- 孙勇孙曙光吴炜张勇吕尚军王林彭曦汪仕良
- 关键词：大肠杆菌
- 人三叶因子1融合蛋白对烧伤小鼠胃黏膜的保护作用被引量：3
- 2008年
- 目的了解人三叶因子1（hTFF1）融合蛋白在减轻烧伤小鼠胃黏膜损害中的作用。方法利用原核重组表达质粒pET32α-hTFF1，诱导表达基因重组hTFF1（rhTFF1）融合蛋白。采用小鼠30％TBSAIV度烧伤模型，按照随机数字表法分为烧伤治疗组：给予一定时间和一定剂量的rhTFF1融合蛋白灌胃治疗；烧伤对照组：方式同前，改用等渗盐水灌胃。另设正常对照组。通过胃黏膜外观、损伤指数和病理切片结果，比较前2组小鼠胃黏膜损伤前后的情况，并以正常对照组相应指标为参照。结果能够获得具有良好特异性的rhTFF1融合蛋白。伤后1d小鼠胃黏膜损伤达峰值，烧伤治疗组和烧伤对照组小鼠胃黏膜糜烂发生率分别为22．2％和77．8％，损伤指数分别为2．0±1．2和6．2±2．0。正常对照组小鼠上述指标为0。结论rhTFF1融合蛋白能够在大肠杆菌系统表达，对小鼠烧伤后损害的胃黏膜有明显的治疗作用。
- 吴炜王林孙勇吕尚军张勇彭曦
- 关键词：烧伤胃黏膜生物制品
