广西壮族自治区科学研究与技术开发计划(0639043)
- 作品数：11 被引量：40H指数：4
- 相关作者：李力阳志军张玮蒋燕明潘忠勉更多>>
- 相关机构：广西医科大学附属肿瘤医院中国医学科学院北京协和医学院中国医学科学院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科学研究与技术开发计划广西医学科学实验中心开放基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 卵巢上皮性癌SEREX抗原基因TM4SF1、C1D、TIZ原核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2009年
- 目的:克隆并构建卵巢上皮性癌SEREX抗原基因:TM4SF1、C1D、TIZ的原核表达载体。方法:用PCR从含SEREX抗原基因序列的重组pBK-CMV质粒中扩增TM4SF1、C1D、TIZ的编码序列(coding sequence,CDS),双酶切后插入原核表达质粒pET-30b(+),经酶切及测序鉴定,阳性质粒转化表达菌BL21感受态细胞,用IPTG诱导表达目的蛋白,用SDS-PAGE分析表达产物。结果:成功扩增了TM4SF1、C1D、TIZ的CDS,并构建了原核表达质粒pET-30b(+)/TM4SF1、pET-30b(+)/C1D、pET-30b(+)/TIZ,经测序与Genbank中的相应序列一致。并在大肠杆菌BL21中成功诱导表达目的蛋白。结论:成功构建了原核表达质粒pET-30b(+)/TM4SF1、pET-30b(+)/C1D、pET-30b(+)/TIZ,并在大肠杆菌中表达了重组融合目的蛋白,为进一步研究奠定了基础。
- 阳志军李力蒋燕明张玮张洁清潘忠勉
- 关键词：卵巢上皮性癌基因重组
- BARD1剪切变异体的自身抗体在卵巢恶性肿瘤诊断中的临床价值被引量：1
- 2008年
- 目的评价1个新的卵巢恶性肿瘤抗原——乳腺癌易感基因1（BRCA1）相关的具有环状结构域的蛋白（BARD1）剪切变异体（OV-142）的自身抗体在卵巢恶性肿瘤诊断中的价值。方法RT-PCR技术克隆OV-142基因的开放阅读框，构建OV．142的原核表达质粒，表达、纯化OV-142重组融合蛋白；用间接酶联免疫吸附试验检测126例卵巢恶性肿瘤患者、15例卵巢交界性肿瘤患者、42例卵巢良性肿瘤患者血清中OV-142的IgG、IgM型自身抗体的相对含量，并分析自身抗体在卵巢恶性肿瘤诊断中的临床价值。结果成功构建了OV-142的原核表达质粒，并获得了OV-142重组融合蛋白。当联合分析OV．142IgC型自身抗体与CA125时，在卵巢恶性肿瘤诊断中的敏感性为71．4％，高于单独分析Igo（41．3％）或CA。25（61．1％）；特异性为89．1％，高于单独分析IgG（84．2％）或CA。（88．0％）；准确性为81．9％，高于单独分析IgG（66．8％）或CA，25（77．1％）。结论OV-142是BARD1的1个剪切变异体，其有可能成为卵巢恶性肿瘤免疫治疗的新靶点。OV．142抗原的IgG型自身抗体在卵巢恶性肿瘤诊断中有可能成为CA125的1个重要的补充血清学标志物。
- 阳志军蒋燕明杨光冉宇靓杨治华张玮张洁清潘忠勉李力
- 关键词：卵巢肿瘤肿瘤抑制蛋白质类抗原肿瘤自身抗体
- 卵巢癌相关抗原cDNA表达文库的筛选被引量：1
- 2008年
- 目的:从卵巢癌腹腔积液肿瘤细胞cDNA表达文库中筛选卵巢癌相关抗原。方法:采用SEREX方法从卵巢癌腹腔积液肿瘤细胞构建的cDNA表达文库中筛选阳性克隆。血清学筛选出的阳性克隆与SSH所得的差异表达基因探针进行杂交,最终得到特异性较高的阳性克隆。对这些克隆进行酶切鉴定、测序分析。结果:经二轮血清学筛选和DotBlot杂交,最终得到55个在血清中有相应IgG和(或)IgM自身抗体的卵巢癌差异表达的候选肿瘤抗原克隆。经核苷酸测序、序列分析和相似性比对,结果表明这55个EST片段代表45个基因,可分为6类:①3个与已知卵巢癌相关基因相似的基因,如BARD1等;②15个与其它肿瘤相关基因相似的基因,如TM4SF1等;③6个在一些特殊组织中表达的基因,如FXR1(fragileX-relatedgene1,脆性X染色体相关基因1)等;④8个与一些特殊功能蛋白基因相似的基因,如TIZ;⑤5个与胚胎来源的基因相似的基因,如PKHD1等;⑥8个在GenBank中无相似序列的新基因,如OV-189等。结论:SEREX方法与SSH方法相结合筛选肿瘤抗原的技术路线是一种行之有效的、能筛选具有较高特异性肿瘤抗原的策略。本研究为进一步研究这些抗原在卵巢癌的发生、发展及诊断方面的应用奠定了基础。
- 阳志军杨光蒋燕明冉宇靓杨治华张玮李力
- 关键词：卵巢癌相关抗原CDNA表达文库SEREXSSH
- 血清基质金属蛋白酶9和乙酰肝素酶及组织蛋白酶诊断卵巢癌浸润转移程度被引量：4
- 2012年
- 目的探讨检测血清组织蛋白酶L（CL）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、乙酰肝素酶（Hpa）对卵巢癌浸润转移判断的临床应用价值。方法用酶联免疫吸附测定法（ELISA）和电化学发光免疫分析法（ECLIA）分别检测广西医科大学附属肿瘤医院2003年9月至2009年10月217例术前未治疗卵巢癌[国际妇产科联盟（FIGO）分期Ⅰ-Ⅱ期83例、Ⅲ一Ⅳ期134例]、100例良性卵巢肿瘤患者（良性卵巢肿瘤组）和101名健康妇女（健康对照组）外周血MMP-9、Hpa、CL含量；同时，对卵巢癌患者进行临床病理关联因素分析，并以卵巢上皮癌临床病理诊断为金标准，绘制受试者工作特征（ROC）曲线，以评价3项指标诊断术前卵巢癌患者浸润转移的敏感度和特异度。结果血清中CL、MMP-9和Hpa含量在卵巢癌组分别为（21．23±8．17）、（193．95±42．49）、（7．68±2．32）μg/L，良性卵巢肿瘤组分别为（10．97±3．84）、（143．66±28．47）、（4．86±1．37）μg／L，健康对照组分别为（5．59±1．75）、（57．99±11．42）、（2．77±0．80）μg／l,，卵巢癌组与良性卵巢肿瘤组和健康对照组比较，差异有统计学意义（t值CL分别为-13．242和-13．498，MMP-9分别为-14．521和-21．290，Hpa分别为-10．896和-18．280，P均〈0．001）；卵巢上皮癌组血清CL含量[（21．59±8．24）μg／L]高于非卵巢上皮癌组[（19．57±7．69）μg／L，F=11．209，P=0．048]；Ⅰ～Ⅱ期组血清中CL、MMP-9和Hpa含量分别为（19．66±7．83）、（182．63±42．30）、（7．21±2．05）μg/L，低于Ⅲ～Ⅳ期组[分别为（22．64±8．31）、（202．81±39．74）、（8．51±1．92）μg／L，F值分别为12．452、70．565、195．122，P值分别为0．030、0．002和0．000]；卵巢上皮癌低分化组血清CL、MMP-9和Hpa含量分别为（23．04±7．67）、（200．12±40．82）、（8．22±1．92）μg/L，也高于高一中分化组[
- 张玮杨幸子王琪阳志军陈泓王素梅潘忠勉李力
- 关键词：卵巢肿瘤酶联免疫吸附测定组织蛋白酶基质金属蛋白酶-9乙酰肝素酶
- 卵巢上皮性癌SEREX抗原基因FXR1、OV-189原核表达载体的构建及表达被引量：6
- 2008年
- 目的:克隆并构建卵巢上皮性癌SEREX抗原基因FXR1、OV-189的原核表达载体。方法:用PCR从含SEREX抗原基因序列的重组pBK-CMV质粒中扩增FXR1、OV-189的CDS,双酶切后插入原核表达质粒pET-30b(+),经酶切及测序鉴定,阳性质粒转化表达菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE分析表达产物。结果:成功扩增了FXR1、OV-189的CDS,并构建了原核表达质粒pET-30b(+)/FXR1、pET-30b(+)/189,经测序,与Genbank中的相应序列一致,并在大肠杆菌BL21中成功诱导表达目的蛋白。结论:成功构建了原核表达质粒pET-30b(+)/FXR1、pET-30b(+)/189,并在大肠杆菌中表达了重组融合目的蛋白,为进一步研究奠定了基础。
- 阳志军蒋燕明张玮张洁清潘忠勉李力
- 关键词：卵巢上皮性癌基因重组
- FXR1基因过表达对卵巢癌细胞生物学行为影响的初步研究被引量：2
- 2012年
- 背景与目的:前期研究显示,FXR1基因是从卵巢上皮癌cDNA文库中筛选到的相关抗原基因,FXR1抗原蛋白的自身抗体可用于早期卵巢癌的诊断。本研究的目的是分析上调上皮性卵巢癌相关抗原基因FXR1表达对卵巢癌细胞系HO8910生物学行为的影响。方法:采用半定量RT-PCR法检测在不同卵巢组织中,FXR1 mRNA的表达,并分析其与临床病理的关系。RT-PCR扩增FXR1 CDS,构建FXR1真核表达载体,脂质体介导下转染HO8910细胞,经G418筛选获得稳定转染株,检测转染后细胞相应生物学行为。结果:FXR1 mRNA在卵巢癌组织中的相对表达水平比卵巢良性肿瘤组织及正常卵巢组织均增高(P<0.05);FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期和高分化癌组织中FXR1 mRNA相对表达水平低于Ⅲ期和中-低分化组织(P<0.05);成功构建了FXR1基因的真核表达载体,并稳定转染了HO8910细胞。生长曲线显示上调FXR1基因表达可促进细胞的生长;克隆形成实验显示上调FXR1基因表达可促进细胞增殖。基质黏附实验显示,上调FXR1基因表达可加强细胞对基质的黏附能力,流式细胞周期检测亦发现与对照(80%)相比,转染FXR1基因后G1期细胞(67.1%)比例明显减少,这说明转染FXR1后细胞的增殖更旺盛。同时发现FXR1对细胞侵袭、迁移的能力无明显影响。结论:上调FXR1基因表达可能有促进卵巢癌细胞的生长、增殖、加强细胞对基质黏附能力的作用。
- 阳志军俸艳英张玮李力
- 关键词：上皮性卵巢癌细胞生物学功能
- RNA干扰下调FXR1基因表达对卵巢癌细胞系A2780生物学功能的影响被引量：4
- 2013年
- 目的:研究下调脆性X染色体相关基因1(fragile X-related gene1,FXR1)表达对卵巢癌细胞系A2780生物学行为的影响。方法:将针对FXR1的小分子干扰RNA(siRNA)表达载体转染A2780细胞,经G418进行筛选获得稳定转染株,检测RNA干扰后细胞生长、增殖、黏附、体外迁移及侵袭能力,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡情况。结果:RNA干扰(RNA interference,RNAi)下调FXR1基因表达后A2780细胞生长速度、增殖能力受抑制,但对A2780细胞体外侵袭、迁移能力、基质黏附能力及凋亡无影响。结论:RNAi抑制FXR1基因的表达可抑制卵巢癌A2780细胞的生长及细胞增殖。
- 俸艳英阳志军张玮李力
- 关键词：卵巢癌RNAI生物学行为
- 卵巢上皮性癌相关抗原cDNA表达文库的构建
- 2008年
- 目的:构建人卵巢上皮性癌cDNA表达文库。方法:提取卵巢上皮性癌患者腹腔积液肿瘤细胞mRNA,反转录合成双链cDNA,末端补平后连接EcoRI接头,末端磷酸化,XhoI消化,将双末端黏性化的双链cDNA经过凝胶层析柱,收集大于500bp的cDNA片段,加工后与Uni-ZAP XR Vector连接,经过体外包装,感染宿主菌XL1-blueMRF′,构建cDNA文库,检测文库容量和质量。结果:cDNA表达文库原始库容为1.82×106,扩增后文库的库容为7.5×109,重组效率约为90%,插入片段大小主要集中在1.0～2.0kb。结论:成功构建了一个卵巢上皮性癌cDNA表达文库,为下一步筛选、鉴定卵巢上皮性癌相关抗原奠定了基础。
- 阳志军杨光蒋燕明冉宇靓杨治华张玮李力
- 关键词：卵巢上皮性癌相关抗原CDNA表达文库
- 卵巢上皮性癌相关抗原的筛选和血清学检测被引量：19
- 2007年
- 目的构建卵巢上皮性癌(卵巢癌)腹水肿瘤细胞的 cDNA 文库,从中筛选能用于卵巢癌早期诊断和免疫治疗靶点的卵巢癌相关抗原。方法用3例卵巢浆液性囊腺癌、1例卵巢黏液性囊腺癌、1例卵巢子宫内膜样癌患者的腹水肿瘤细胞构建 cDNA 文库,采用改良的重组克隆表达抗原的血清学鉴定(SEREX)技术与抑制性消减杂交(SSH)方法相结合的策略从文库中筛选卵巢癌相关抗原基因,并对其进行酶切鉴定、核苷酸测序分析。采用重组肿瘤抗原的微型血清学检测(SMARTA)法检测筛选出的卵巢癌相关抗原与96例卵巢癌患者和96例正常妇女的血清中相应自身抗体的阳性反应情况。结果经两轮血清学筛选和核苷酸测序分析,最终得到55个候选的卵巢癌相关抗原基因片段,代表45个基因,分为6类:(1)与已知的卵巢癌相关基因同源的基因,如 BARD1基因等;(2)与其他肿瘤相关基因同源的基因,如 TM4SF1基因等;(3)在一些特殊组织中表达的基因,如 ILF3、FXR1基因等;(4)与一些特殊功能蛋白基因同源的基因,如 TIZ、C1D 基因等;(5)与胚胎来源的基因同源的基因,如 PKHD1基因等;(6)其余为在基因库 GenBank 中无同源序列可比对的未知基因,如 OV-189基因等。TMdSF1、C1D、BARD1、FXR1、OV-189基因的噬菌体重组融合抗原与卵巢癌患者血清中相应IgG 型自身抗体反应的阳性率分别为28%、21%、23%、25%、31%,与正常妇女血清反应的阳性率分别为9%、6%、5%、8%、13%,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01);TIZ、FXR1、OV-189基因的重组抗原与卵巢癌患者血清中相应 IgM 型自身抗体反应的阳性率分别为26%、28%、18%,与正常妇女血清反应的阳性率分别为8%、11%、7%,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。FXR1、OV-189基因的重组抗原与Ⅰ～Ⅱ期卵巢癌患者血清中相应 IgG 型自身抗体反应的阳性率(分别为34%、46%)高于Ⅲ～Ⅳ期者(分别为16%、23%),两者�
- 阳志军杨光蒋燕明冉宇靓杨治华张玮张洁清潘忠勉李力
- 关键词：CA-125抗原双杂交系统技术基因文库血清学试验
- 卵巢上皮性癌相关抗原筛选中SEREX技术的应用
- 2008年
- 重组克隆表达抗原的血清学鉴定(SEREX)技术是用自身或异体血清筛选肿瘤抗原的方法。该法的优点在于所筛选的肿瘤抗原可刺激机体产生体液及细胞免疫反应,这些抗原既有可能用于疫苗的研制又可能作为免疫治疗的靶向,而且所筛选到的肿瘤抗原的自身抗体还可作为诊断和疾病监测的血清标志物。用SEREX技术已筛选到HOXA7,HOXB7和HSP90等多个卵巢癌相关抗原,其中有的可作为卵巢癌诊断的血清标志物,有的有可能成为卵巢癌免疫治疗的靶点。故SEREX技术在筛查卵巢上皮性癌相关抗原研究方面有巨大的应用前景。
- 阳志军李力
- 关键词：卵巢上皮性癌相关抗原肿瘤疫苗
