吉林省科技厅国际合作项目(20040707-2) 作品数:12 被引量:35 H指数:3 相关作者: 谭岩 段秀梅 方艳秋 许淑芬 刘力华 更多>> 相关机构: 吉林大学第一医院 吉林大学第二医院 吉林省肿瘤医院 更多>> 发文基金: 吉林省科技厅国际合作项目 吉林省科技厅重点项目 国家教育部博士点基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
IL-12与IL-18在体外培养系统中诱导肿瘤特异性CTL杀伤活性的比较 被引量:1 2007年 目的:分别应用重组人白细胞介素12(rhIL-12)及重组人白细胞介素18(rhIL-18)在体外培养系统(CCs)中诱导肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),比较IL-18与IL-12诱导的肿瘤特异性CTL的杀伤活性,探索IL-18的抗肿瘤作用机制。方法:采用Stem SepTM免疫磁性细胞分离法分离人外周血NK细胞、T细胞及DCs细胞,流式细胞仪分析细胞表型,125I-UdR标记的细胞毒实验检测杀伤活性。结果:在CCs中、在肿瘤抗原存在的条件下,rhIL-18和rhIL-12均能诱导产生针对U251、MCF7特异性CTL,其作用能力与rhIL-18和rhIL-12的浓度呈剂量依赖关系,但rhIL-18诱导肿瘤特异性CTL的作用明显高于rhIL-12(P<0.01);rhIL-18和rhIL-12在诱导肿瘤特异性CTL过程中具有协同作用,两者联合应用诱导肿瘤特异性CTL的能力明显高于单独应用rhIL-18和rhIL-12(P<0.01)。结论:rhIL-18和rhIL-12在CCs中均能够诱导并促进CTL介导的肿瘤特异性杀伤效应,rhIL-18诱导的肿瘤特异性CTL的能力明显高于rhIL-12,两者在诱导肿瘤特异性CTL过程中具有协同作用。 方艳秋 齐亚灵 严莉 谭岩 段秀梅 许淑芬 刘津莎关键词:白细胞介素18 白细胞介素12 流式细胞术检测CIK的免疫表型和体外杀伤活性 被引量:6 2006年 目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)的免疫表型和体外杀伤活性。方法:从健康人外周血分离淋巴细胞,经过IFNγ、CD3McAb、IL-2诱导并培养,获得大量的CIK。采用流式细胞术检测CIK的表型;以CFSE标记靶细胞来区分效应细胞,再以PI染色,用FACS检测靶细胞的死亡率。结果:CIK于第22天达到增殖高峰,并高度表达CD3、CD11a、CD54和HLA-DR;中度表达CD3/CD56、CD25、CD28、CD69和FasL;CD16表达不增加。CIK对肿瘤细胞K562、HL-60、Hela、SMMC7721和A375均表现出杀伤活性,其中对K562、HL-60、Hela 3种细胞的杀伤作用较强;而对SMMC7721、A375的作用不明显。结论:细胞因子IFNγ、CD3McAb和IL-2体外诱导的单个核细胞具有强大的增殖力和杀伤活性。 段秀梅 谭岩 宋燕 王晓祺 刘力华 方艳秋 许淑芬关键词:免疫表型 杀伤活性 流式细胞术 可溶性Fas与VEGF及TIMP-1表达在乳腺癌淋巴结转移中的相互关系 被引量:2 2006年 目的通过对乳腺癌可溶性Fas浓度与血管内皮生长因子(VEGF)及金属蛋白酶抑制物(TIMP-1)表达之间关系的分析,探讨患者血清中sFas浓度改变对乳腺癌细胞生长、浸润和转移的影响。方法通过S-P免疫组化法和ELISA法,分别检测乳腺癌细胞VEGF和TIMP-1表达及血清sFas浓度,结合VEGF、TIMP-1与乳腺癌临床病理参数,分析浸润、淋巴结转移乳腺癌中VEGF、TIMP-1表达失衡与血清sFas浓度之间的关系。结果①VEGF阳性表达与乳腺癌淋巴结转移呈显著相关,VEGF阳性的肿瘤有淋巴结转移率为56%,明显高于VEGF阳性的肿瘤无淋巴结转移率(7%)。随着乳腺癌TNM分期和组织学分级的进展,VEGF阳性表达率逐渐增加,呈正相关。TIMP-1阳性表达与肿瘤淋巴结转移明显相关。随着TNM分期和组织学分级的进展,TIMP-1阳性表达率逐渐降低,呈负相关。②VEGF阳性表达而TIMP-1阴性表达组发生乳腺癌浸润和淋巴结转移率及血清sFas浓度最高,VEGF阴性表达而TIMP-1阳性表达组发生淋巴结转移率及血清sFas浓度最低,两组比较差异有极显著意义。结论sFas与VEGF及TIMP-1表达之间存在着反馈机理以及相互激活的密切关系。sFas浓度可以间接地反映基质金属蛋白酶(MMPs)和VEGF的表达情况,sFas在乳腺癌中的浓度变化可以反映乳腺癌的生长、局部浸润和转移。 王心明 陈云波 贾明库 许洪志 刘梦虹关键词:可溶性FAS 血管内皮生长因子 乳腺癌 MAGE-1基因疫苗的构建及其免疫学活性的研究 被引量:1 2005年 目的制备MAGE-1基因疫苗,观察该疫苗诱导小鼠脾脏的抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞CTL活性及产生特异性抗体的影响。方法应用基因重组技术,构建基因疫苗pcMAGE-1;转染HEK293细胞;RT-PCR及Western blot检测MAGE-1mRNA及蛋白的表达;pcMAGE-1免疫3次BALB/c小鼠,末次免疫后7日收集血清及脾细胞。流式细胞术检测血清中抗MA-GE-1多抗的产生,MTT法检测小鼠CTL杀伤活性。结果构建的pcMAGE-1转染HEK293细胞,RT-PCR表明在mRNA水平有MAGE-1的表达;Western blot显示表达产物46kD,与预期一致。基因疫苗免疫组小鼠血清MAGE-1抗体的产生增加,与SMMC-7721结合率显著高于对照组(P<0.05)。杀伤实验结果显示,免疫组小鼠脾细胞对SMMC-7721的杀伤率明显高于两个对照组(P<0.05)。结论成功地构建了MAGE-1基因疫苗,该疫苗能够有效地诱导特异性免疫应答。 太京华 谭宪秋 谭岩 时阳 刘力华 方艳秋 段秀梅 姜艳芳关键词:基因疫苗 MAGE-1 细胞亚群 特异性抗体 CTL Fas/FasL在乳腺疾病发生发展过程中作用的研究 被引量:12 2007年 目的探讨Fas、Fas配体(FasL)在乳腺肿瘤的发生发展及肿瘤免疫逃逸及反击中的作用。方法应用免疫组织化学染色方法,对51例乳腺癌,20例乳腺不典型增生,32例乳腺纤维腺瘤,和36例正常乳腺组织进行Fas和FasL的检测以及和乳腺癌不同病理学参数之间的关系。同时对上述组织用TUNEL法检测Fas和FasL表达区不同细胞的凋亡情况。结果Fas阳性细胞数与FasL阳性细胞数在不同类型的乳腺组织中表达情况正相反,其结果有显著统计学意义;在不同类型的乳腺组织中细胞凋亡指数,乳腺纤维腺瘤和乳腺不典型增生中最高,乳腺癌次之,正常乳腺组织最低;Fas与FasL在不同类型的乳腺组织中的表达强度正相反,其结果有显著统计学意义;Fas、FasL的表达与乳腺癌大小、分期、转移、分化程度密切相关,与组织类型无关。结论Fas、FasL参与了乳腺疾病发生发展的全过程,且于乳腺癌临床病理参数密切相关。 刘晓红 王心明 王延龄关键词:FAS FASL 乳腺肿瘤 C-MYC癌基因与消化系统肿瘤关系的研究 被引量:1 2005年 目的:研究消化系统肿瘤中的C-MYC基因扩增的情况。方法:用聚合酶链式反应(PCR)测定84例老年患者恶性肿瘤中的C-MYC基因,通过激光密度扫描仪对EB染色后的琼脂糖凝胶进行积分光密度分析。结果:正常组织无C-MYC扩增,C-MYC/N+L-MYC比值95%可信区间为0.0869~0.6257,胃癌组织C-MYC基因扩增阳性率为69.5%,直肠癌组织的C-MYC基因扩增阳性率为62.2%,肝癌组织C-MYC基因扩增阳性率为55.6%,145例肿瘤组织C-MYC扩增总阳性率为65.5%。结论:癌组织C-MYC扩增高于正常组织,在不同消化系统肿瘤组织中扩增程度不同,与细胞潜在的增殖能力成正相关,对消化系统肿瘤的发生、发展及预后,特别是指导临床基因治疗提供有用的资料。 卞隽 方艳秋 谭岩 段秀梅 许淑芬 刘力华 姜艳芳 赵平伟关键词:癌基因 直肠癌 肝癌 IFN-γ对体外培养系统中IL-18诱导的肿瘤特异性CTL杀伤效应的影响 被引量:2 2007年 目的:应用rhIL-18在体外培养系统(Coculture system in vitro,CCs)中诱导肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic TLymphocyte,CTL),探讨IFN-γ在rhIL-18诱导的肿瘤特异性CTL产生过程及杀伤效应中的作用。方法:采用StemSepTM免疫磁性细胞分离法分离人外周血NK细胞、T细胞及DCs细胞,流式细胞仪分析细胞表型,125I-UdR标记的细胞毒实验检测杀伤活性,ELISA方法检测IFN-γ蛋白产生量,RT-PCR检测IFN-γmRNA表达含量。结果:在肿瘤抗原存在的条件下,IL-18在CCs中能够诱导并促进CTL介导的肿瘤特异性杀伤效应;IL-18能够在肿瘤抗原刺激的CCs中诱导IFN-γmRNA的表达及IFN-γ蛋白的产生,并与IL-18的含量呈剂量依赖关系,在rhIL-18含量为100ng时,培养上清中IFN-γ为4410±210pg/ml。但加入抗IFN-γ抗体对rhIL-18诱导的肿瘤特异性CTL产生过程无明显影响,不能抑制IL-18诱导的这种肿瘤特异性CTL的杀伤效应。结论:IL-18能够在肿瘤抗原刺激的CCs中有效地诱导CTL介导的肿瘤特异性杀伤效应,并诱导IFN-γ的产生,但其诱导肿瘤特异性CTL的产生过程及杀伤效应与IFN-γ无关。 方艳秋 齐亚灵 孙绍骞 谭岩 段秀梅 许淑芬关键词:IL-18 细胞毒性T淋巴细胞 IFN-Γ 过继免疫治疗对手术后肺癌患者外周血免疫细胞表型影响的研究 被引量:2 2005年 目的:探讨C IK过继免疫治疗对手术后肺癌患者免疫功能的影响。方法:采用流式细胞术检测40例肺癌患者外周血T细胞、B细胞和NK细胞表型。结果:肺癌患者CD3+、CD4+、CD4/CD8比值明显低于对照组并呈显著性差异,而CD8+细胞高于对照组(P<0.01)。经C IK治疗后CD3+、CD4+、CD3-/CD16+56+细胞和CD4/CD8比值都升高,其中CD4+、CD3-/CD16+56+细胞与治疗前比较呈显著性差异(P<0.05),而CD8+细胞与治疗前比较降低(P<0.05);CD19在治疗后稍有增高趋势,但无显著性差异。结论:C IK过继免疫治疗对肺癌患者免疫功能的恢复具有促进作用。 卞隽 谭岩 方艳秋 姜艳芳 许淑芬 刘力华 段秀梅关键词:过继免疫治疗 CIK 肺癌 免疫表型 过继免疫治疗对手术后肺癌患者T细胞及其活化抗原表达影响的研究 被引量:2 2006年 目的探讨CIK过继免疫治疗对手术后肺癌患者T细胞及其活化抗原表达的影响。方法采用流式细胞术检测40例肺癌患者外周血T细胞表型CD3、CD4、CD8和及其活化抗原标志CD69、CD25、HLA-DR。结果肺癌患者CD3+、CD4+、CD4/CD8比值明显低于对照组并呈显著性差异,而CD8+细胞高于对照组(P<0.01);肺癌患者CD69、CD3+/HLA-DR+、CD4+/CD25+与对照组比较无显著性差异。经CIK治疗后CD3+、CD4+、CD4/CD8比值都升高,其中CD4+细胞与治疗前比较呈显著性差异(P<0.05),而CD8+细胞与治疗前比较降低(P<0.05);CD69、CD3+/HLA-DR+均升高(P<0.05),CD4+/CD25+在治疗后有增高趋势,但无显著性差异。结论CIK过继免疫治疗对肺癌患者免疫功能的恢复具有促进作用。 杨广民 段秀梅 谭岩关键词:过继免疫治疗 CIK 肺癌 人肝细胞癌抗原HCA661 DNA疫苗的构建 被引量:1 2005年 目的:构建人肝细胞癌特异性抗原HCA661的DNA疫苗。方法:通过PCR从SMMC7721中获得编码肝细胞癌特异抗原HCA661的基因组DNA序列,插入pGEM-T easy载体后测序,并将目的基因定向亚克隆进入真核表达载体pCI-neo,以PCR和酶切方法鉴定构建的重组真核表达质粒pCI-neo-HCA661。结果:PCR产物为1 040 bp,测序结果与Gene Bank登记完全相同;PCR和酶切结果表明,构建的重组真核表达质粒中含有正确编码的目的基因片段。结论:成功地构建了含有HCA661基因的DNA疫苗。 李树蕾 谭岩 刘力华 段秀梅 方艳秋 姜艳芳 许淑芬 王忠山